碘难治型甲状腺癌与高分化甲状腺癌颈部转移淋巴结比较蛋白质组学研究及兴趣蛋白的初步筛选
发布时间：2021-04-07 12:30
目的:寻找碘难治型甲状腺癌与高分化甲状腺癌之间的差异蛋白,探讨碘难治型甲状腺癌可能的发生机制,寻找潜在的核素分子治疗靶点,改善碘难治型甲状腺癌患者的预后。方法:收集重庆医科大学附属第一医院核医学科高分化甲状腺癌和碘难治型甲状腺癌患者颈部转移淋巴结各3例,利用iTRAQ技术联合质谱分析得到差异蛋白。通过生物信息学方法对差异蛋白进行GO功能注释、KEGG通路分析,并利用TCGA、TCPA数据库对部分所得差异蛋白进行验证。利用TMpred对部分差异蛋白进行跨膜结构区域预测,筛选出结构合适的蛋白,并通过免疫组化对目的蛋白进行定位验证。通过慢病毒转染技术过表达目的蛋白,利用蛋白印迹技术验证该蛋白对于钠碘转运体表达量的影响。结果:本实验鉴定得到差异蛋白共665个,在碘难治型甲状腺癌中显著上调的蛋白327个,显著下调的蛋白338个。差异蛋白的主要功能包括调节转运体活性及酶活性等,参与细胞代谢等多个生物过程。差异蛋白主要富集于代谢通路、黏着斑等多条信号通路。TMpred跨膜结构预测提示CHI3L1存在多个跨膜区域,免疫组化结果显示CHI3L1定位于细胞膜及细胞质,且在碘难治型甲状腺癌中表达显著高于高分...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
差异蛋白的GO功能注释包括细胞成分，生物过程，分子功能三个本体，横坐标代表
重庆医科大学硕士研究生学位论文222.2CHI3L1过表达稳定株及空载病毒稳定株的构建细胞株经慢病毒侵染，puro筛选2周后，在荧光显微镜下观察可见细胞状态良好，CHI3L1过表达稳定株和其空载病毒对照稳定株puro抗性明显（图3）。故判断PTC-K1细胞CHI3L1过表达稳定株及其空载病毒对照稳定株筛选成功。图3慢病毒转染结果在显微镜下分别用白光和荧光观察细胞，可见CHI3L1过表达稳定株（a、b）和空载病毒对照稳定株（c、d）细胞状态良好，puro抗性明显。Figure3Resultoflentivirustransfection.Cellswereobservedunderthemicroscopewithwhitelightandfluorescence,respectively.CellswereingoodconditionandwithstableresistancetopuroinbothCHI3L1over-expressionstabletransfectant(aandb)andno-loadviruscontroltransfectant(candd).2.3CHI3L1可激活MEK/ERK1/2信号通路并抑制NIS蛋白在甲状腺癌中的表达WesternBlotting结果表明，在CHI3L1过表达稳定株，空载病毒对照稳定株及PTC-K1三组细胞中，NIS的表达在CHI3L1过表达组中显著低于空载病毒空白对
重庆医科大学硕士研究生学位论文23照组及PTC-K1细胞组，而空载病毒空白对照组与PTC-K1细胞组之间无显著性差异。此外，在CHI3L1过表达组中，MEK/ERK1/2信号通路被激活，MEK及ERK1/2的表达显著上调。载病毒空白对照组与PTC-K1细胞组之间无显著性差异（图4）。图4WesternBlotting验证CHI3L1对NIS及MEK/ERK1/2信号通路的影响。Figure4.WesternblottingwasusedtoconfirmtheinfluenceofCHI3L1onNISandMEK/ERK1/2signalpathway.a.CHI3L1过表达稳定株中,MEK,ERK1/2表达明显高于空载病毒对照组及PTC-K1组。b.CHI3L1过表达稳定株中NIS的表达量显著低于空载病毒对照组及PTC-K1组。c.CHI3L1过表达稳定株，空载病毒对照组及PTC-K1组中，ERK1/2，MEK及NIS蛋白表达量的统计学分析。***：P<0.001。a.ExpressionofMEKandERK1/2inCHI3L1overexpressionstabletransfectantissignificantlyup-regulatedthanthatinPTC-K1andno-loadviruscontrolstabletransfectant.b.ExpressionofNISissignificantlylowerinCHI3L1overexpressionstabletransfectantthaninPTC-K1andno-loadviruscontrolstabletransfectant.c.Statisticanalysisofthreegroups.TheexpressionofERK1/2,MEK,andNISinCHI3L1overexpressionstabletransfectantwassignificantlydifferentcomparingtoPTC-K1andno-loadviruscontrolstabletransfectant.***P<0.001.
【参考文献】：
期刊论文
[1]甲状腺未分化癌的靶向药物治疗进展[J]. 武元元,王军. 国际肿瘤学杂志. 2019 (02)
[2]基于iTRAQ蛋白质组学技术对前列腺癌血清标志物的筛查[J]. 张墨,陈骊珠,杨泽宇,殷波,宋永胜. 现代肿瘤医学. 2018(01)
[3]人甲状腺乳头状癌与正常腺体组织蛋白质组差异表达分析[J]. 边学,唐平章. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2010 (04)
本文编号：3123490
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
差异蛋白的GO功能注释包括细胞成分，生物过程，分子功能三个本体，横坐标代表
重庆医科大学硕士研究生学位论文222.2CHI3L1过表达稳定株及空载病毒稳定株的构建细胞株经慢病毒侵染，puro筛选2周后，在荧光显微镜下观察可见细胞状态良好，CHI3L1过表达稳定株和其空载病毒对照稳定株puro抗性明显（图3）。故判断PTC-K1细胞CHI3L1过表达稳定株及其空载病毒对照稳定株筛选成功。图3慢病毒转染结果在显微镜下分别用白光和荧光观察细胞，可见CHI3L1过表达稳定株（a、b）和空载病毒对照稳定株（c、d）细胞状态良好，puro抗性明显。Figure3Resultoflentivirustransfection.Cellswereobservedunderthemicroscopewithwhitelightandfluorescence,respectively.CellswereingoodconditionandwithstableresistancetopuroinbothCHI3L1over-expressionstabletransfectant(aandb)andno-loadviruscontroltransfectant(candd).2.3CHI3L1可激活MEK/ERK1/2信号通路并抑制NIS蛋白在甲状腺癌中的表达WesternBlotting结果表明，在CHI3L1过表达稳定株，空载病毒对照稳定株及PTC-K1三组细胞中，NIS的表达在CHI3L1过表达组中显著低于空载病毒空白对
重庆医科大学硕士研究生学位论文23照组及PTC-K1细胞组，而空载病毒空白对照组与PTC-K1细胞组之间无显著性差异。此外，在CHI3L1过表达组中，MEK/ERK1/2信号通路被激活，MEK及ERK1/2的表达显著上调。载病毒空白对照组与PTC-K1细胞组之间无显著性差异（图4）。图4WesternBlotting验证CHI3L1对NIS及MEK/ERK1/2信号通路的影响。Figure4.WesternblottingwasusedtoconfirmtheinfluenceofCHI3L1onNISandMEK/ERK1/2signalpathway.a.CHI3L1过表达稳定株中,MEK,ERK1/2表达明显高于空载病毒对照组及PTC-K1组。b.CHI3L1过表达稳定株中NIS的表达量显著低于空载病毒对照组及PTC-K1组。c.CHI3L1过表达稳定株，空载病毒对照组及PTC-K1组中，ERK1/2，MEK及NIS蛋白表达量的统计学分析。***：P<0.001。a.ExpressionofMEKandERK1/2inCHI3L1overexpressionstabletransfectantissignificantlyup-regulatedthanthatinPTC-K1andno-loadviruscontrolstabletransfectant.b.ExpressionofNISissignificantlylowerinCHI3L1overexpressionstabletransfectantthaninPTC-K1andno-loadviruscontrolstabletransfectant.c.Statisticanalysisofthreegroups.TheexpressionofERK1/2,MEK,andNISinCHI3L1overexpressionstabletransfectantwassignificantlydifferentcomparingtoPTC-K1andno-loadviruscontrolstabletransfectant.***P<0.001.
【参考文献】：
期刊论文
[1]甲状腺未分化癌的靶向药物治疗进展[J]. 武元元,王军. 国际肿瘤学杂志. 2019 (02)
[2]基于iTRAQ蛋白质组学技术对前列腺癌血清标志物的筛查[J]. 张墨,陈骊珠,杨泽宇,殷波,宋永胜. 现代肿瘤医学. 2018(01)
[3]人甲状腺乳头状癌与正常腺体组织蛋白质组差异表达分析[J]. 边学,唐平章. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2010 (04)
本文编号：3123490
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