反相/反相组合全二维液相色谱的构建及其在中药分析中的应用
发布时间：2021-04-07 16:38
中药是中华民族数千年来无数代中医学者智慧和实践经验的结晶,为人类的健康做出了卓越的贡献,已然成为了中华文化的一部分。然而,由于中药的超复杂组成,其作用机理暂无全面系统的阐释,质量控制难度大,阻碍中药走向世界。因此,对中药复杂组分进行深入系统的研究成为中药继续发展的基础。在已有的分析工具中,二维色谱由于其具有远高于一维色谱的峰容量,成为系统分离分析中药化学成分的首选。此外,液质联用技术（LC-MS）的成熟应用为在线快速、有效、准确鉴定已分离化合物提供了强有力支撑。反相/反相（RPLC/RPLC）组合的二维系统具有流动相兼容性好、理论峰容量大、分离度高等特点,在中药复杂体系的分离上有很大的发展空间。但是由于不同反相柱组合二维系统两维分离机理相似性,正交性差,极大地限制了RPLC/RPLC组合的二维色谱的发展。所以本文拟从分离条件的优化与组合出发,重点解决正交性不足的问题,以充分利用反相色谱高效分离上的优势。选用三种具有代表性的中药活性组分:生物碱类（博落回）、蒽醌类（大黄）、黄酮类（黄芩）,针对其不同的性质构建不同的RPLC×RPLC系统并优化分离条件,以实现这些化合物类型的高效分离:1....
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
二维色相色谱系统模型（A）样品环/捕集柱调制器，（B）平行柱调制器
反相/反相组合全二维液相色谱的构建及其在中药分析中的应用17图2-1在线全二维色相色谱系统模型Figure2-1Schemeoftheon-linecomprehensive2D-LCsystem.2.2.72DLC-MS/MS分析将优化后的二维液相色谱系统与质谱仪联机，从二极管阵列检测器流出液被T型分流器分流，然后以0.4ml/min的流速进入质谱。参照已发表文献中的MS数据，来鉴定博落回根部提取物中的生物碱成分。电喷雾离子源在正离子模式下工作。工作参数如下：干燥气体：10.0L/min；雾化气体：3.0L/min；加热气体：10.0L/min；加热块温度：400°C；脱溶剂管温度：250°C；离子源接口温度：300°C；毛细管电压：4000V；生物碱母离子m/z扫描范围：200-650Da，碰撞电压范围在20-40V之间。2.2.8数据处理使用ShimadzuLCLabsolution软件获取液相数据。MS和MS/MS的数据是在ShimadzuLC-MSLabsolution软件中获得的。经Origin9.0软件处理，作图。正交性（O）根据等式（2-1）计算，其中∑bins是包含数据点的二维等高线图中的点个数。P代表矩形箱的数量[91]。O=PP63.0P-bins2-12.3结果与讨论2.3.1在不同的条件下分离博落回中的生物碱博落回中的异喹啉类生物碱，都是由一个很大的疏水部分和一个氨基官能团
硕士学位论文18组成。所以其多数，即使是季铵生物碱，pKb大多在6到9之间[13]。因此，当流动相中pH改变时，生物碱的存在形态也会改变，其极性大小也会随之改变。如果流动相的pH值分别小于6.0和大于9.0，则在RPLC上分离的生物碱的保留值在理论上会有很大差异。为了证明这一点，选取博落回的根部提取物为测试样品，然后挑选出在pH范围2.0至10.0的内均具有良好的耐受性的多根色谱柱，用作第一、二维使用的色谱柱。图2-2A和2-2B分别显示了碱性流动相（pH=9.0）和酸性流动相（pH=2.6）下博落回中生物碱的分离结果。结果表明，四种主要生物碱的保留时间分别为：别隐品碱（碱性条件/酸性条件，22.50min/12.05min），原阿片碱（24.71min/11.76min），血根碱（25.67min/13.21min）和白屈菜红碱（26.82min/14.38min）。博落回中的生物碱类化合物在酸性条件下的保留时间比在碱性条件下短，并且洗脱顺序也有所不同。因为生物碱在酸性条件下呈离子状态存在，极性较大，碱性条件下呈分子状态存在，极性较校综上所述，博落回生物碱在两个不同的pH条件下（2.6和9.0）可以为构建正交性良好的RPLC×RPLC系统。图2-2碱性条件（A）和酸性条件（B）下分析博落回生物碱Figure2-2AnalysisofalkaloidofM.cordata(willd.)R.Br.withbasicconditions(A)andacidicconditions(B)通常，两种分离模式的组合顺序在二维液相色谱分离系统中至关重要。在这项工作中，考虑到二维系统需要与质谱检测器结合来鉴别生物碱，酸性流动相有助于离子源中生物碱的电离，碱性流动相会抑制生物碱的离子化，导致检测响应
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄的化学成分和药理研究进展[J]. 金丽霞,金丽军,栾仲秋,刘聪,潘超. 中医药信息. 2020(01)
[2]基于全二维液相色谱的牛黄上清丸指纹图谱研究[J]. 吴瑞军,钟国跃,曾金祥,何军伟,宋伦,梁健. 中草药. 2019(03)
[3]大黄化学成分与药理作用研究进展[J]. 孙汉青,李锦萍,刘力宽,杨春芳,左文明,李成慧. 青海草业. 2018(01)
[4]离线二维反相液相色谱/超临界流体色谱在瓜蒌子分离中的应用[J]. 袁云,辛华夏,彭子悦,傅青,金郁. 色谱. 2017(07)
[5]大孔吸附树脂在天然产物分离纯化中的应用[J]. 刘丹,吴叶红,李玮桓,张嫚丽,史清文. 中草药. 2016(15)
[6]黄芩的化学成分与药理作用研究进展[J]. 郑勇凤,王佳婧,傅超美,王建新. 中成药. 2016(01)
[7]中药发展前景分析[J]. 孟军,戚颖欣. 科技创新导报. 2014(31)
[8]二维色谱技术及其在中药领域中的应用[J]. 沈保家,秦昆明,刘启迪,蔡皓,刘晓,蔡宝昌. 中国科学:化学. 2013(11)
[9]膜分离技术的研究进展及应用展望[J]. 王华,刘艳飞,彭东明,王福东,鲁曼霞. 应用化工. 2013(03)
[10]大黄化学成分与药理作用研究新进展[J]. 傅兴圣,陈菲,刘训红,许虎,周逸芝. 中国新药杂志. 2011(16)
博士论文
[1]中药中黄酮类化合物全定性分析策略[D]. 刘国柱.湖南师范大学 2010
[2]基于构库思想的中药分离与表征方法研究[D]. 张晓哲.中国科学院研究生院（大连化学物理研究所） 2004
硕士论文
[1]中药HPLC分析设计空间的建立与可靠性研究[D]. 戴胜云.北京中医药大学 2016
[2]二维液相色谱—质谱联用技术在栀子豉汤成分分析中的应用研究[D]. 陈岑.广东药学院 2014
[3]新型二维液相色谱体系的建立、评价及其应用[D]. 余丹华.华东理工大学 2011
本文编号：3123813
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
二维色相色谱系统模型（A）样品环/捕集柱调制器，（B）平行柱调制器
反相/反相组合全二维液相色谱的构建及其在中药分析中的应用17图2-1在线全二维色相色谱系统模型Figure2-1Schemeoftheon-linecomprehensive2D-LCsystem.2.2.72DLC-MS/MS分析将优化后的二维液相色谱系统与质谱仪联机，从二极管阵列检测器流出液被T型分流器分流，然后以0.4ml/min的流速进入质谱。参照已发表文献中的MS数据，来鉴定博落回根部提取物中的生物碱成分。电喷雾离子源在正离子模式下工作。工作参数如下：干燥气体：10.0L/min；雾化气体：3.0L/min；加热气体：10.0L/min；加热块温度：400°C；脱溶剂管温度：250°C；离子源接口温度：300°C；毛细管电压：4000V；生物碱母离子m/z扫描范围：200-650Da，碰撞电压范围在20-40V之间。2.2.8数据处理使用ShimadzuLCLabsolution软件获取液相数据。MS和MS/MS的数据是在ShimadzuLC-MSLabsolution软件中获得的。经Origin9.0软件处理，作图。正交性（O）根据等式（2-1）计算，其中∑bins是包含数据点的二维等高线图中的点个数。P代表矩形箱的数量[91]。O=PP63.0P-bins2-12.3结果与讨论2.3.1在不同的条件下分离博落回中的生物碱博落回中的异喹啉类生物碱，都是由一个很大的疏水部分和一个氨基官能团
硕士学位论文18组成。所以其多数，即使是季铵生物碱，pKb大多在6到9之间[13]。因此，当流动相中pH改变时，生物碱的存在形态也会改变，其极性大小也会随之改变。如果流动相的pH值分别小于6.0和大于9.0，则在RPLC上分离的生物碱的保留值在理论上会有很大差异。为了证明这一点，选取博落回的根部提取物为测试样品，然后挑选出在pH范围2.0至10.0的内均具有良好的耐受性的多根色谱柱，用作第一、二维使用的色谱柱。图2-2A和2-2B分别显示了碱性流动相（pH=9.0）和酸性流动相（pH=2.6）下博落回中生物碱的分离结果。结果表明，四种主要生物碱的保留时间分别为：别隐品碱（碱性条件/酸性条件，22.50min/12.05min），原阿片碱（24.71min/11.76min），血根碱（25.67min/13.21min）和白屈菜红碱（26.82min/14.38min）。博落回中的生物碱类化合物在酸性条件下的保留时间比在碱性条件下短，并且洗脱顺序也有所不同。因为生物碱在酸性条件下呈离子状态存在，极性较大，碱性条件下呈分子状态存在，极性较校综上所述，博落回生物碱在两个不同的pH条件下（2.6和9.0）可以为构建正交性良好的RPLC×RPLC系统。图2-2碱性条件（A）和酸性条件（B）下分析博落回生物碱Figure2-2AnalysisofalkaloidofM.cordata(willd.)R.Br.withbasicconditions(A)andacidicconditions(B)通常，两种分离模式的组合顺序在二维液相色谱分离系统中至关重要。在这项工作中，考虑到二维系统需要与质谱检测器结合来鉴别生物碱，酸性流动相有助于离子源中生物碱的电离，碱性流动相会抑制生物碱的离子化，导致检测响应
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄的化学成分和药理研究进展[J]. 金丽霞,金丽军,栾仲秋,刘聪,潘超. 中医药信息. 2020(01)
[2]基于全二维液相色谱的牛黄上清丸指纹图谱研究[J]. 吴瑞军,钟国跃,曾金祥,何军伟,宋伦,梁健. 中草药. 2019(03)
[3]大黄化学成分与药理作用研究进展[J]. 孙汉青,李锦萍,刘力宽,杨春芳,左文明,李成慧. 青海草业. 2018(01)
[4]离线二维反相液相色谱/超临界流体色谱在瓜蒌子分离中的应用[J]. 袁云,辛华夏,彭子悦,傅青,金郁. 色谱. 2017(07)
[5]大孔吸附树脂在天然产物分离纯化中的应用[J]. 刘丹,吴叶红,李玮桓,张嫚丽,史清文. 中草药. 2016(15)
[6]黄芩的化学成分与药理作用研究进展[J]. 郑勇凤,王佳婧,傅超美,王建新. 中成药. 2016(01)
[7]中药发展前景分析[J]. 孟军,戚颖欣. 科技创新导报. 2014(31)
[8]二维色谱技术及其在中药领域中的应用[J]. 沈保家,秦昆明,刘启迪,蔡皓,刘晓,蔡宝昌. 中国科学:化学. 2013(11)
[9]膜分离技术的研究进展及应用展望[J]. 王华,刘艳飞,彭东明,王福东,鲁曼霞. 应用化工. 2013(03)
[10]大黄化学成分与药理作用研究新进展[J]. 傅兴圣,陈菲,刘训红,许虎,周逸芝. 中国新药杂志. 2011(16)
博士论文
[1]中药中黄酮类化合物全定性分析策略[D]. 刘国柱.湖南师范大学 2010
[2]基于构库思想的中药分离与表征方法研究[D]. 张晓哲.中国科学院研究生院（大连化学物理研究所） 2004
硕士论文
[1]中药HPLC分析设计空间的建立与可靠性研究[D]. 戴胜云.北京中医药大学 2016
[2]二维液相色谱—质谱联用技术在栀子豉汤成分分析中的应用研究[D]. 陈岑.广东药学院 2014
[3]新型二维液相色谱体系的建立、评价及其应用[D]. 余丹华.华东理工大学 2011
本文编号：3123813
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