过表达JAZF1对甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、凋亡的影响及其机制
发布时间：2021-04-07 16:41
第一部分JAZF1在BCPAP细胞中过表达及验证目的:使用重组腺病毒载体（Adv-JAZF1-GFP）在BCPAP细胞中过表达JAZF1。方法:采用重组腺病毒分别感染BCPAP细胞,分为阴性对照组（NC组）、空载组（Adv-GFP组）、实验组（Adv-JAZF1-GFP组）,转染48h后,分别提取各组细胞总RNA,逆转录合成c DNA,采用SYBR-Green I法、ABI7500、q RT-PCR二步法检测JAZF1 m RNA的表达水平,以GAPDH作为内参,用2-△△CT值表示基因相对表达量,采用q RT-PCR检测各组JAZF1 m RNA表达水平;提取各组细胞总蛋白,定量各组蛋白浓度,Western blot分别检测各组JAZF1蛋白相对表达水平。结果:重组腺病毒转染BCPAP细胞48h后,对照组与空载组比较无明显统计学差异,实验组JAZF1 m RNA以及蛋白相对表达水平较对照组、空载组均明显上调（P<0.001）。结论:成功构建JAZF1过表达BCPAP细胞株,为进一步研究JAZF1基因对甲状腺乳头状癌生物学行为的影响及相关机制的研究奠定坚实的基础。第二部分过表达J...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
显微镜下的BCPAP细胞（A×200倍）及Adv-JAZF1-GFP转染48小时荧光图（B×200倍、C×400倍）
遵义医科大学硕士学位论文熊代刚22图1显微镜下的BCPAP细胞（A×200倍）及Adv-JAZF1-GFP转染48小时荧光图（B×200倍、C×400倍）Fig.1BCPAPcellsundermicroscope(A200x)and48hfluorescencemapofAdv-JAZF1-GFPtransfection(B200x,C400x)3.2qRT-PCR、WB检测JAZF1mRNA的表达水平及过表达验证转染48h后，提取各组细胞总RNA，逆转录合成cDNA，采用SYBR-GreenI法、ABI7500、qRT-PCR二步法检测JAZF1mRNA的表达水平，以GAPDH作为内参，用2-△△CT值表示基因相对表达量。Adv-GFP、Adv-JAZF1-GFP转染BPCPA细胞48h后，对照组与空载组比较无明显统计学差异，实验组JAZF1mRNA、蛋白相对表达水平均较对照组、空载组明显上调（均P＜0.001），见图1。图2qRT-PCR、Westernblot检测各组BCPAP细胞JAZF1相对表达水平Fig.2TherelativeexpressionofJAZF1ineachgroupBCPAPcellsbyqRT-PCRandWesternblot注：与NC组相比，***P<0.001。图A.三组（NC组及转染Adv-GFP或Adv-JAZF1-GFP）BCPAP细胞中JAZF1mRNA相对表达水平；图B.三组（NC组及转染Adv-GFP或Adv-JAZF1-GFP）BCPAP细胞中JAZF1蛋白相对表达水平。Note.Comparedwiththenegativecontrolgroup,***P<0.001.FigureA.TherelativemRNAexpressionlevelofJAZF1inNCandBCPAPcellstransfectedwithAdv-GFPorAdv-JAZF1-GFP；FigureB.RelativeproteinexpressionlevelofJAZF1inNCandBCPAPcellstransfectedwithAdv-GFPorAdv-JAZF1-GFP.
遵义医科大学硕士学位论文熊代刚283结果3.1过表达JAZF1对BCPAP细胞增殖及集落形成能力的影响MTT结果提示：与阴性对照组、空载组比较，实验组BCPAP细胞在24h、48h、72h时其增殖能力明显被抑制（均P<0.01）；平板克隆形成试验表明实验组克隆形成效率较NC组、空载组明显降低（均P<0.001），见图2。图3过表达JAZF1对各组BCPAP细胞增殖、克隆形成能力的影响Fig.3EffectofJAZF1overexpressiononproliferationandcloneformationofBCPAPcellsineachgroup注：与NC组相比，**P<0.01,***P<0.001。图A.在三组BCPAP细胞中进行的MTT实验及24h、48h、72h吸光度比较；图B.在三组BCPAP细胞中进行的克隆形成实验。Note.Comparedwiththenegativecontrolgroup,**P<0.01,***P<0.001.FigureA.TheMTTexperimentandthecomparisonofabsorbanceat24h,48hand72hinthreegroupsofBCPAPcells;FigureB.ColonyformationexperimentswerecarriedoutinthreegroupsofBCPAPcells.3.2过表达JAZF1对BCPAP细胞凋亡的影响AnnexinV-FITC/PI法流式细胞术检测结果显示：实验组细胞凋亡率较NC组、空载组明显增加（23.02±0.35%vs.8.63±0.40%,7.95±0.32%，均P<0.001），见图3。图4过表达JAZF1对各组BCPAP细胞凋亡的影响(均P<0.001)Fig.4EffectofJAZF1overexpressiononapoptosisofBCPAPcellsineachgroup(allP<0.001)A.B.
【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达JAZF1对甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、凋亡的影响及其机制[J]. 熊代刚,侯泽宇,蔡玉怀,黄亮亮,杨艳,曾峰,程晓明. 中国比较医学杂志. 2019(09)
[2]JAZF1对胶质母细胞瘤侵袭和迁徙的影响及分子机制研究[J]. 欧海荣,梁仔,龙霄翱,覃木秀,杨燕飞. 中华神经创伤外科电子杂志. 2019(03)
[3]The PI3K/Akt/GSK-3β/ROS/eIF2B pathway promotes breast cancer growth and metastasis via suppression of NK cell cytotoxicity and tumor cell susceptibility[J]. Fengjiao Jin,Zhaozhen Wu,Xiao Hu,Jiahui Zhang,Zihe Gao,Xiao Han,Junfang Qin,Chen Li,Yue Wang. Cancer Biology & Medicine. 2019(01)
[4]Tip27基因在甲状腺肿瘤组织的表达及临床意义[J]. 马宁,杨艳,冯辉豪,曾峰,李涛浪,方小玉,凃仕贵,程晓明. 中华实验外科杂志. 2017 (05)
本文编号：3123818
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
显微镜下的BCPAP细胞（A×200倍）及Adv-JAZF1-GFP转染48小时荧光图（B×200倍、C×400倍）
遵义医科大学硕士学位论文熊代刚22图1显微镜下的BCPAP细胞（A×200倍）及Adv-JAZF1-GFP转染48小时荧光图（B×200倍、C×400倍）Fig.1BCPAPcellsundermicroscope(A200x)and48hfluorescencemapofAdv-JAZF1-GFPtransfection(B200x,C400x)3.2qRT-PCR、WB检测JAZF1mRNA的表达水平及过表达验证转染48h后，提取各组细胞总RNA，逆转录合成cDNA，采用SYBR-GreenI法、ABI7500、qRT-PCR二步法检测JAZF1mRNA的表达水平，以GAPDH作为内参，用2-△△CT值表示基因相对表达量。Adv-GFP、Adv-JAZF1-GFP转染BPCPA细胞48h后，对照组与空载组比较无明显统计学差异，实验组JAZF1mRNA、蛋白相对表达水平均较对照组、空载组明显上调（均P＜0.001），见图1。图2qRT-PCR、Westernblot检测各组BCPAP细胞JAZF1相对表达水平Fig.2TherelativeexpressionofJAZF1ineachgroupBCPAPcellsbyqRT-PCRandWesternblot注：与NC组相比，***P<0.001。图A.三组（NC组及转染Adv-GFP或Adv-JAZF1-GFP）BCPAP细胞中JAZF1mRNA相对表达水平；图B.三组（NC组及转染Adv-GFP或Adv-JAZF1-GFP）BCPAP细胞中JAZF1蛋白相对表达水平。Note.Comparedwiththenegativecontrolgroup,***P<0.001.FigureA.TherelativemRNAexpressionlevelofJAZF1inNCandBCPAPcellstransfectedwithAdv-GFPorAdv-JAZF1-GFP；FigureB.RelativeproteinexpressionlevelofJAZF1inNCandBCPAPcellstransfectedwithAdv-GFPorAdv-JAZF1-GFP.
遵义医科大学硕士学位论文熊代刚283结果3.1过表达JAZF1对BCPAP细胞增殖及集落形成能力的影响MTT结果提示：与阴性对照组、空载组比较，实验组BCPAP细胞在24h、48h、72h时其增殖能力明显被抑制（均P<0.01）；平板克隆形成试验表明实验组克隆形成效率较NC组、空载组明显降低（均P<0.001），见图2。图3过表达JAZF1对各组BCPAP细胞增殖、克隆形成能力的影响Fig.3EffectofJAZF1overexpressiononproliferationandcloneformationofBCPAPcellsineachgroup注：与NC组相比，**P<0.01,***P<0.001。图A.在三组BCPAP细胞中进行的MTT实验及24h、48h、72h吸光度比较；图B.在三组BCPAP细胞中进行的克隆形成实验。Note.Comparedwiththenegativecontrolgroup,**P<0.01,***P<0.001.FigureA.TheMTTexperimentandthecomparisonofabsorbanceat24h,48hand72hinthreegroupsofBCPAPcells;FigureB.ColonyformationexperimentswerecarriedoutinthreegroupsofBCPAPcells.3.2过表达JAZF1对BCPAP细胞凋亡的影响AnnexinV-FITC/PI法流式细胞术检测结果显示：实验组细胞凋亡率较NC组、空载组明显增加（23.02±0.35%vs.8.63±0.40%,7.95±0.32%，均P<0.001），见图3。图4过表达JAZF1对各组BCPAP细胞凋亡的影响(均P<0.001)Fig.4EffectofJAZF1overexpressiononapoptosisofBCPAPcellsineachgroup(allP<0.001)A.B.
【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达JAZF1对甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、凋亡的影响及其机制[J]. 熊代刚,侯泽宇,蔡玉怀,黄亮亮,杨艳,曾峰,程晓明. 中国比较医学杂志. 2019(09)
[2]JAZF1对胶质母细胞瘤侵袭和迁徙的影响及分子机制研究[J]. 欧海荣,梁仔,龙霄翱,覃木秀,杨燕飞. 中华神经创伤外科电子杂志. 2019(03)
[3]The PI3K/Akt/GSK-3β/ROS/eIF2B pathway promotes breast cancer growth and metastasis via suppression of NK cell cytotoxicity and tumor cell susceptibility[J]. Fengjiao Jin,Zhaozhen Wu,Xiao Hu,Jiahui Zhang,Zihe Gao,Xiao Han,Junfang Qin,Chen Li,Yue Wang. Cancer Biology & Medicine. 2019(01)
[4]Tip27基因在甲状腺肿瘤组织的表达及临床意义[J]. 马宁,杨艳,冯辉豪,曾峰,李涛浪,方小玉,凃仕贵,程晓明. 中华实验外科杂志. 2017 (05)
本文编号：3123818
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3123818.html
