VPS13D调控线粒体分裂及自噬参与大鼠癫痫发作的机制研究
发布时间：2021-04-09 03:15
目的:敲减vps13d基因,观察匹罗卡品急性癫痫大鼠模型的行为学改变,检测敲减vps13d基因干预后对DRP1、LC3II及P62蛋白的表达影响,探索VPS13D是否通过调控线粒体分裂及自噬功能参与大鼠癫痫发作及其相关机制。方法:选取健康成年雄性SD大鼠,构建vps13d基因敲减慢病毒质粒、应用脑立体定位仪将慢病毒质粒定位注射到大鼠海马组织,建立vps13d基因敲减病毒大鼠模型,腹腔注射DRP1抑制剂Mdivi-1、构建DRP1抑制剂大鼠模型,干预处理后将所有大鼠全部诱发为匹罗卡品急性癫痫模型。随机分为6个组:正常对照组（n=8）、癫痫模型组（n=8）、vps13d基因敲减组（n=8）、空病毒组（n=8）、Mdivi-1组（n=8）、DMSO对照组（n=8）。急性癫痫模型建立成功后,观察大鼠首次癫痫发作的潜伏期时间,单位时间内大鼠癫痫发作（Racine评分4级及以上）的次数,统计分析并比较各组大鼠癫痫发作程度。通过HE染色法观察大鼠海马神经细胞的形态学变化,透射电镜观察大鼠海马线粒体超微结构的改变,免疫组化、免疫荧光检测VPS13D在正常对照及癫痫模型组大鼠海马组织的亚细胞定位及表达情...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠海马神经细胞HE染色Fig1HEstaininginhippocampusnervecellofrats
遵义医科大学硕士学位论文王建25图2大鼠海马组织VPS13D免疫组化定位及半定量分析Fig2Immunohistochemicallocalizationandsemi-quantitativeanalysisofVPS13DinhippocampusofratsNote:*ComparedwiththecongroupP＜0.05.2.3免疫荧光检测大鼠脑组织VPS13D定位及半定量表达我们利用免疫荧光技术对大鼠海马和皮层的VPS13D进行定位，结果显示（如图3A所示）：VPS13D（绿色荧光）主要表达于大鼠海马和皮层神经细胞，与神经元标记物MAP2（紫色荧光）共表达（白色箭头所示），不与星形胶质细胞标记物GFAP（红色荧光）共表达。正常对照组与癫痫模型组大鼠海马组织CA1区、CA3区及大鼠cortex区神经元均有表达（如图3B所示，标尺：50μm），我们对两组大鼠海马CA1区、CA3区及皮质区VPS13D荧光信号强度绝对值进行半定量统计分析，结果显示（如图3C所示）：癫痫模型组大鼠海马组织VPS13D荧光信号强度绝对值降低，与正常对照组比较，差异具有统计学意义（P﹤0.05）。AB
遵义医科大学硕士学位论文王建26图3大鼠海马及皮层VPS13D免疫荧光定位及半定量分析Fig3Immunofluorescencelocalizationandsemi-quantitativeanalysisofVPS13DinhippocampusandcortexofratsNote:*ComparedwiththecongroupP＜0.05.2.4透射电镜观察线粒体的超微结构我们利用透射电镜对正常对照组与癫痫模型组大鼠海马组织CA1区线粒体的超微结构进行观察，结果显示（如图4所示，标尺：2μm，放大倍数：20000倍）：正常对照组大鼠海马CA1区线粒体形态正常，呈椭圆形，边界清楚，无线粒体嵴及膜损伤；癫痫模型组大鼠海马组织CA1区线粒体形态不规则，线粒体膜边缘模糊，有线粒体嵴损伤，线粒体周边水肿明显（黄色箭头所示），出现线粒体分裂（红色箭头ABCVPS13DMAP2GFAPMerge
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mitophagy links oxidative stress conditions and neurodegenerative diseases[J]. Ulfuara Shefa,Na Young Jeong,In Ok Song,Hyung-Joo Chung,Dokyoung Kim,Junyang Jung,Youngbuhm Huh. Neural Regeneration Research. 2019(05)
硕士论文
[1]DRP1调控ENT1参与大鼠癫痫发作的作用及机制研究[D]. 罗忠.遵义医学院 2018
本文编号：3126803
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠海马神经细胞HE染色Fig1HEstaininginhippocampusnervecellofrats
遵义医科大学硕士学位论文王建25图2大鼠海马组织VPS13D免疫组化定位及半定量分析Fig2Immunohistochemicallocalizationandsemi-quantitativeanalysisofVPS13DinhippocampusofratsNote:*ComparedwiththecongroupP＜0.05.2.3免疫荧光检测大鼠脑组织VPS13D定位及半定量表达我们利用免疫荧光技术对大鼠海马和皮层的VPS13D进行定位，结果显示（如图3A所示）：VPS13D（绿色荧光）主要表达于大鼠海马和皮层神经细胞，与神经元标记物MAP2（紫色荧光）共表达（白色箭头所示），不与星形胶质细胞标记物GFAP（红色荧光）共表达。正常对照组与癫痫模型组大鼠海马组织CA1区、CA3区及大鼠cortex区神经元均有表达（如图3B所示，标尺：50μm），我们对两组大鼠海马CA1区、CA3区及皮质区VPS13D荧光信号强度绝对值进行半定量统计分析，结果显示（如图3C所示）：癫痫模型组大鼠海马组织VPS13D荧光信号强度绝对值降低，与正常对照组比较，差异具有统计学意义（P﹤0.05）。AB
遵义医科大学硕士学位论文王建26图3大鼠海马及皮层VPS13D免疫荧光定位及半定量分析Fig3Immunofluorescencelocalizationandsemi-quantitativeanalysisofVPS13DinhippocampusandcortexofratsNote:*ComparedwiththecongroupP＜0.05.2.4透射电镜观察线粒体的超微结构我们利用透射电镜对正常对照组与癫痫模型组大鼠海马组织CA1区线粒体的超微结构进行观察，结果显示（如图4所示，标尺：2μm，放大倍数：20000倍）：正常对照组大鼠海马CA1区线粒体形态正常，呈椭圆形，边界清楚，无线粒体嵴及膜损伤；癫痫模型组大鼠海马组织CA1区线粒体形态不规则，线粒体膜边缘模糊，有线粒体嵴损伤，线粒体周边水肿明显（黄色箭头所示），出现线粒体分裂（红色箭头ABCVPS13DMAP2GFAPMerge
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mitophagy links oxidative stress conditions and neurodegenerative diseases[J]. Ulfuara Shefa,Na Young Jeong,In Ok Song,Hyung-Joo Chung,Dokyoung Kim,Junyang Jung,Youngbuhm Huh. Neural Regeneration Research. 2019(05)
硕士论文
[1]DRP1调控ENT1参与大鼠癫痫发作的作用及机制研究[D]. 罗忠.遵义医学院 2018
本文编号：3126803
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3126803.html
最近更新
教材专著
