纳米脂肪联合鼠神经生长因子促进游离股前外侧穿支皮瓣神经再生的研究
发布时间：2021-04-12 08:27
目的:探讨纳米脂肪联合鼠神经生长因子对游离股前外侧穿支皮瓣术后感觉恢复的影响及潜在治疗机制,为促进皮瓣术后感觉恢复提供安全、有效的临床治疗方案及理论基础。方法:一.临床研究1.患者招募:制定纳入、排除标准,招募已行游离股前外侧穿支皮瓣术术后4月的患者16人;2.术前皮瓣感觉评估及取材:术前评估皮瓣及周围区域痛觉、温度觉、两点辨别觉、触压觉,使用直径为5mm打孔器获取皮瓣皮肤组织。3.纳米脂肪与鼠神经生长因子混合物的制备:参考Tonnard的方法获取纳米脂肪,将鼠神经生长溶液与纳米脂肪以1:9比例混合。4.实验的干预:鼠神经生长因子注射组（N组）、纳米脂肪注射组（Na组）、鼠神经生长因子联合纳米脂肪组（NN组）、生理盐水组（NS组）。5.术后评估:按术前方法进行皮瓣感觉评估,在术前取皮部位再次使用打孔器取材。免疫组化:通过CD31免疫组织化学染色观察皮瓣皮肤新生血管情况,通过S100免疫组织化学染色观察皮瓣皮肤神经再生情况,选取5个视野后Image J软件分别手动计数新生血管数目、阳性细胞表达的个数,将感觉评估、免疫组化术前术后数据求差值,统计结果。二.基础研究6.使用临床制备的纳米脂肪...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
皮瓣切取、移植术后神经情况：A.游离皮瓣切取后皮瓣中神经与供区完全离断
遵义医科大学硕士学位论文张凤玲16图2：A.直径为5mm的打孔器。B.注射器中黄色为纳米脂肪，无色液体为鼠神经生长因子溶液。C.注射层次为真皮深层。1.2.4注射中、后注意事项观察皮瓣血运：1.皮瓣皮肤颜色：正常为红润，皮瓣缺血表现为苍白。2.皮肤毛细血管充盈实验：正常为撤除压力后，局部皮肤颜色由白转红的时间≤2S，＞3S说明皮瓣皮肤供血不足。如发现血运问题，应急处理方案：1、立即停止注射。2、进行活血扩管等药物治疗。3、应用激素提高应激反应。4、理疗。5、如术后皮肤坏死则进行换药、促皮肤生长或者植皮等治疗。1.2.5术后感觉评估及取材感觉评估：术后2月召集患者返院随访，由实验员B按照术前方法对术前标记区域进行感觉评估，记录术后皮冷热觉恢复情况、两点辨别觉及触压觉，将对应皮瓣术后与术前数据求差值，统计数据。取材：术者C在术前取材部位瘢痕旁使用打孔器取皮瓣皮肤。1.2.6组织学检测免疫组化：通过CD31免疫组织化学染色检测评估皮瓣皮肤中血管密度；通过S100免疫组化检测来评估皮瓣皮肤神经再生情况。步骤简述之[55,56]：石蜡切片二甲苯两次脱蜡，分别放入无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、75%乙醇中水化，PBS清洗10分钟，放入3%过氧化氢溶液10分钟，PBS清洗10分钟，清洗两次，再使用EDTA进行抗原修复（待高压锅冒气后调低热量再加热20分钟），PBS清洗5分钟，用5%山羊血清稀释一抗孵育（稀释比1:250），滴加一抗，然后放入4℃冰箱过夜，20小时后拿出片子，37℃温箱复温，PBS清洗3次，每次10分钟，滴加二抗工作液（HRP标记），然后放入37℃温箱30min，PBS清洗3次，每次10分钟，配置DAB显色液（现配现用），滴加DAB显色液，显微镜观察见着色后立即将片子放入自来水中中止显色，苏木素复染5分钟，流水清洗3分钟，放入1%盐酸?
遵义医科大学硕士学位论文张凤玲202.结果2.1手术及随访、皮瓣感觉评估图片16例患者手术后均无皮肤坏死。术前、术后对术前标记区进行两点辨别觉、温度觉及触压觉检测，发现术前各组两点辨别觉很差，术前NN组、N组、Na组、NS组两点辨别觉分别为32.05±1.41、31.93±1.55、31.78±1.49、31.88±1.45，术后分别为13.33±1.39、18.50±0.88、23.03±1.29、27.38±0.82。统计数据显示NN组两点辨别觉恢复最好，差值为18.73±2.72，与其他组差值对比均具有统计学意义（p＜0.05）。NS组恢复最差，差值为4.50±1.88，而N组与Na组差值无统计学意义（p＞0.05）（表1）。术前NN组、N组、Na组、NS组swm规格分别为5.33±0.37、5.26±0.31、5.33±0.52、5.31±0.38，术后分别为4.09±0.56、4.68±0.29、4.67±0.34、5.12±0.39。统计数据显示NN组触压觉恢复最好，SWM规格差值为1.24±0.26，与其他组差值对比均具有统计学意义（p＜0.05）。NS组恢复最差，差值为0.17±0.11，而N组与Na组差值无统计学意义（p＞0.05）（表2）。术前温度觉均为无恢复，术后2月显示NN组温度觉恢复例数最多，6例恢复温度觉，N组恢复4例，Na组恢复3例，NS组恢复最少，温度觉仅恢复1例（表3）（图3、4）。图3：各组术前术后随访图片。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Generation of induced secretome from adipose-derived stem cells specialized for disease-specific treatment:An experimental mouse model[J]. Ok-Hee Kim,Ha-Eun Hong,Haeyeon Seo,Bong Jun Kwak,Ho Joong Choi,Kee-Hwan Kim,Joseph Ahn,Sang Chul Lee,Say-June Kim. World Journal of Stem Cells. 2020(01)
[2]旋股外侧动脉降支穿支皮瓣的临床应用[J]. 张雄,许晓彤,谢心军,徐永贵,谢求恩. 中国现代药物应用. 2019(24)
[3]股前外侧穿支皮瓣的临床应用研究进展[J]. 梁再卿,吴宁. 中华骨与关节外科杂志. 2019(12)
[4]鼠神经生长因子神经外科临床应用专家共识[J]. 中国临床神经外科杂志. 2019(11)
[5]穿支皮瓣在手外科临床应用分析[J]. 唐金淇. 临床医药文献电子杂志. 2019(94)
[6]神经生长因子（NGF）对周围神经损伤修复的作用[J]. 张贤平,王锐英. 世界最新医学信息文摘. 2019(86)
[7]带神经的异指指动脉顺行岛状皮瓣修复手指掌侧复合软组织缺损[J]. 王辉,霍永鑫,郝睿峥,刘伟,常红,李骏然,王斌. 中国修复重建外科杂志. 2019(11)
[8]大鼠神经生长因子治疗周围神经损伤的效果[J]. 胡斌云. 中国卫生标准管理. 2019(16)
[9]穿支皮瓣在手术外科临床应用中的效果观察分析[J]. 王有福. 临床医药文献电子杂志. 2019(59)
[10]纳米脂肪的研究进展及临床应用[J]. 易晓林,梁至洁,黎洪棉. 中国组织工程研究. 2019(26)
硕士论文
[1]缝合与不缝合指固有神经掌侧皮支的指动脉逆行岛状皮瓣修复指端软组织缺损后疗效观察[D]. 周鹏飞.扬州大学 2019
本文编号：3132983
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
皮瓣切取、移植术后神经情况：A.游离皮瓣切取后皮瓣中神经与供区完全离断
遵义医科大学硕士学位论文张凤玲16图2：A.直径为5mm的打孔器。B.注射器中黄色为纳米脂肪，无色液体为鼠神经生长因子溶液。C.注射层次为真皮深层。1.2.4注射中、后注意事项观察皮瓣血运：1.皮瓣皮肤颜色：正常为红润，皮瓣缺血表现为苍白。2.皮肤毛细血管充盈实验：正常为撤除压力后，局部皮肤颜色由白转红的时间≤2S，＞3S说明皮瓣皮肤供血不足。如发现血运问题，应急处理方案：1、立即停止注射。2、进行活血扩管等药物治疗。3、应用激素提高应激反应。4、理疗。5、如术后皮肤坏死则进行换药、促皮肤生长或者植皮等治疗。1.2.5术后感觉评估及取材感觉评估：术后2月召集患者返院随访，由实验员B按照术前方法对术前标记区域进行感觉评估，记录术后皮冷热觉恢复情况、两点辨别觉及触压觉，将对应皮瓣术后与术前数据求差值，统计数据。取材：术者C在术前取材部位瘢痕旁使用打孔器取皮瓣皮肤。1.2.6组织学检测免疫组化：通过CD31免疫组织化学染色检测评估皮瓣皮肤中血管密度；通过S100免疫组化检测来评估皮瓣皮肤神经再生情况。步骤简述之[55,56]：石蜡切片二甲苯两次脱蜡，分别放入无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、75%乙醇中水化，PBS清洗10分钟，放入3%过氧化氢溶液10分钟，PBS清洗10分钟，清洗两次，再使用EDTA进行抗原修复（待高压锅冒气后调低热量再加热20分钟），PBS清洗5分钟，用5%山羊血清稀释一抗孵育（稀释比1:250），滴加一抗，然后放入4℃冰箱过夜，20小时后拿出片子，37℃温箱复温，PBS清洗3次，每次10分钟，滴加二抗工作液（HRP标记），然后放入37℃温箱30min，PBS清洗3次，每次10分钟，配置DAB显色液（现配现用），滴加DAB显色液，显微镜观察见着色后立即将片子放入自来水中中止显色，苏木素复染5分钟，流水清洗3分钟，放入1%盐酸?
遵义医科大学硕士学位论文张凤玲202.结果2.1手术及随访、皮瓣感觉评估图片16例患者手术后均无皮肤坏死。术前、术后对术前标记区进行两点辨别觉、温度觉及触压觉检测，发现术前各组两点辨别觉很差，术前NN组、N组、Na组、NS组两点辨别觉分别为32.05±1.41、31.93±1.55、31.78±1.49、31.88±1.45，术后分别为13.33±1.39、18.50±0.88、23.03±1.29、27.38±0.82。统计数据显示NN组两点辨别觉恢复最好，差值为18.73±2.72，与其他组差值对比均具有统计学意义（p＜0.05）。NS组恢复最差，差值为4.50±1.88，而N组与Na组差值无统计学意义（p＞0.05）（表1）。术前NN组、N组、Na组、NS组swm规格分别为5.33±0.37、5.26±0.31、5.33±0.52、5.31±0.38，术后分别为4.09±0.56、4.68±0.29、4.67±0.34、5.12±0.39。统计数据显示NN组触压觉恢复最好，SWM规格差值为1.24±0.26，与其他组差值对比均具有统计学意义（p＜0.05）。NS组恢复最差，差值为0.17±0.11，而N组与Na组差值无统计学意义（p＞0.05）（表2）。术前温度觉均为无恢复，术后2月显示NN组温度觉恢复例数最多，6例恢复温度觉，N组恢复4例，Na组恢复3例，NS组恢复最少，温度觉仅恢复1例（表3）（图3、4）。图3：各组术前术后随访图片。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Generation of induced secretome from adipose-derived stem cells specialized for disease-specific treatment:An experimental mouse model[J]. Ok-Hee Kim,Ha-Eun Hong,Haeyeon Seo,Bong Jun Kwak,Ho Joong Choi,Kee-Hwan Kim,Joseph Ahn,Sang Chul Lee,Say-June Kim. World Journal of Stem Cells. 2020(01)
[2]旋股外侧动脉降支穿支皮瓣的临床应用[J]. 张雄,许晓彤,谢心军,徐永贵,谢求恩. 中国现代药物应用. 2019(24)
[3]股前外侧穿支皮瓣的临床应用研究进展[J]. 梁再卿,吴宁. 中华骨与关节外科杂志. 2019(12)
[4]鼠神经生长因子神经外科临床应用专家共识[J]. 中国临床神经外科杂志. 2019(11)
[5]穿支皮瓣在手外科临床应用分析[J]. 唐金淇. 临床医药文献电子杂志. 2019(94)
[6]神经生长因子（NGF）对周围神经损伤修复的作用[J]. 张贤平,王锐英. 世界最新医学信息文摘. 2019(86)
[7]带神经的异指指动脉顺行岛状皮瓣修复手指掌侧复合软组织缺损[J]. 王辉,霍永鑫,郝睿峥,刘伟,常红,李骏然,王斌. 中国修复重建外科杂志. 2019(11)
[8]大鼠神经生长因子治疗周围神经损伤的效果[J]. 胡斌云. 中国卫生标准管理. 2019(16)
[9]穿支皮瓣在手术外科临床应用中的效果观察分析[J]. 王有福. 临床医药文献电子杂志. 2019(59)
[10]纳米脂肪的研究进展及临床应用[J]. 易晓林,梁至洁,黎洪棉. 中国组织工程研究. 2019(26)
硕士论文
[1]缝合与不缝合指固有神经掌侧皮支的指动脉逆行岛状皮瓣修复指端软组织缺损后疗效观察[D]. 周鹏飞.扬州大学 2019
本文编号：3132983
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