人胚胎干细胞衍生MSC对T淋巴细胞功能调节潜力的研究
发布时间：2021-05-06 07:05
间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cell,MSC）除了具有其干细胞特性以外还具有免疫调节特性而成为颇具临床应用价值的治疗性细胞。胚胎干细胞（Human Embryonic Stem Cell,hESC）是一种在体外可无限增殖的亚全能细胞,具有分化成各种体细胞的潜力,因此如果胚胎干细胞能分化成间充质干细胞则该细胞（hESCMSC）将是一种可再生的MSC,而且由于来源相同,hESC-MSC品质高度均一,可望成为质量完全可控的新型MSC产品以用于临床治疗。尽管目前hESC-MSC分化方案多种多样,但是分化效率相差较大,特别是其免疫调节的特性目前仍存在争议。hESC-MSC分化可使用生物基质材料替代细胞饲养层维持人类胚胎干细胞存活并辅助诱导分化,避免了动物源基质细胞对临床研究造成困难。生物基质材料具有无毒、无病原体、生物相容性良好等优势,是诱导hESC-MSC的理想媒介和微环境。不同包被材料通过识别细胞表面受体信号,在培养过程中对hESC-MSC迁移、增殖、分化等具有重要的意义,但对T淋巴细胞免疫调节特性影响鲜见报道。为此我们首先建立了一个简易、高效的hESC-MSC分化方案,...
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRCT
第一章 综述
1.1 间充质干细胞的研究现状
1.1.1 间充质干细胞应用于免疫疾病治疗
1.1.2 间充质干细胞应用于组织修复和抗衰老治疗
1.1.3 间充质干细胞应用于组织工程研究
1.2 人胚胎干细胞的研究现状
1.3 人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的研究现状
1.4 间充质干细胞对T淋巴细胞免疫调节研究
1.5 研究目的及意义
第二章 人胚胎干细胞衍生间充质干细胞的分化与鉴定
2.1 实验方法
2.1.1 细胞培养
2.1.2 细胞冻存与复苏
2.1.3 hESC-MSC分化方案
2.1.4 MSC成骨、成脂、成软骨诱导分化
2.1.5 MSC增殖检测
2.1.6 流式细胞仪检测细胞表面抗原表达
2.1.7 RNA提取与反转录
2.1.8 荧光定量PCR(Real-time PCR)反应
2.1.9 统计与分析
2.2 实验仪器与试剂
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验试剂
2.3 实验结果
2.3.1 hESC-MSC的分化与细胞表面抗原表达
2.3.2 hESC-MSC的成骨、成脂、成软骨分化
2.3.3 hESC-MSC增殖检测
2.4 小结
第三章 人胚胎干细胞衍生MSC具有强烈的CD4~+-T淋巴细胞功能调节潜力
3.1 实验方法
3.1.1 细胞培养
3.1.2 细胞冻存与复苏
3.1.3 hESC-MSC分化方案
3.1.4 流式细胞仪进行细胞表面抗原表达检测
3.1.5 CD4~+T淋巴细胞增殖检测
3.1.6 CD4~+T淋巴细胞向Treg分化检测
3.1.7 统计与分析
3.2 实验仪器与试剂
3.2.1 实验仪器
3.2.2 实验试剂
3.3 实验结果
3.3.1 hESC-MSC在不同共培养条件下对CD4~+T淋巴细胞增殖的抑制
3.3.2 hESC-MSC在不同共培养条件下促进CD4~+T淋巴细胞向Treg细胞分化
3.4 小结
第四章 hESC通过不同包被材料衍生的MSC生物学特性鉴定
4.1 实验方法
4.1.1 细胞培养
4.1.2 细胞冻存与复苏
4.1.3 hESC-MSC分化方案
4.1.4 MSC成骨、成脂、成软骨诱导分化
4.1.5 流式细胞仪进行细胞表面抗原表达检测
4.1.6 RNA提取与反转录
4.1.7 荧光定量PCR(Real-time PCR)反应
4.1.8 统计与分析
4.2 实验仪器与试剂
4.2.1 实验仪器
4.2.2 实验试剂
4.3 实验结果
4.3.1 不同包被材料分化的hESC-MSC表面抗原表达
4.3.2 不同包被材料分化的hESC-MSC成骨、成脂、成软骨分化能力
4.4 小结
第五章 不同包被材料对hESC-MSC在 T淋巴细胞免疫功能调节的影响
5.1 实验方法
5.1.1 细胞培养
5.1.2 细胞冻存与复苏
5.1.3 hESC-MSC分化方案
5.1.4 流式细胞仪检测细胞表面抗原表达
5.1.5 T淋巴细胞增殖检测
5.1.6 T淋巴细胞向Treg分化检测
5.1.7 ELISA检测MSC分泌抗炎因子
5.1.8 统计与分析
5.2 实验仪器与试剂
5.2.1 实验仪器
5.2.2 实验试剂
5.3 实验结果
5.3.1 不同包被材料对hESC-MSC抑制T淋巴细胞增殖的影响
5.3.2 不同包被材料对hESC-MSC促进Treg分化的影响
5.3.3 不同包被材料对hESC-MSC在不同共培养条件下抗炎因子分泌的影响
讨论
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式
【参考文献】：
期刊论文
[1]间充质干细胞免疫调节特性及在器官移植中的应用[J]. 蒋珊珊,王峰,余丽梅. 中国组织工程研究. 2019(01)
[2]Ⅰ型胶原诱导骨髓间充质干细胞及成骨细胞的成骨分化机制[J]. 谢玉,周诺. 中国组织工程研究. 2018(21)
[3]间充质干细胞移植治疗胰腺炎的研究进展[J]. 金相任,徐铂然,侯国方,孙备,白雪巍. 世界华人消化杂志. 2017(30)
[4]体外定向诱导人羊膜间充质干细胞向骨、软骨及脂肪细胞的分化[J]. 李豫皖,朱喜忠,金瑛,王胜民,杨继滨,熊华章,邹刚,刘毅. 中国组织工程研究. 2017(01)
[5]人胚胎干细胞来源多巴胺前体细胞治疗帕金森病猴[J]. 王昱凯,周琪,胡宝洋. 生命科学. 2016(08)
[6]间充质干细胞临床应用的研究进展[J]. 李明,詹成,代曦煜,杨新宇,冯明祥. 复旦学报(医学版). 2016(04)
[7]人胚胎干细胞源性间充质干细胞的研究进展[J]. 冯年花. 中国细胞生物学学报. 2015(03)
[8]脐血间充质干细胞诱导分化为类雪旺细胞修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究[J]. 王玺,王胜,肖玉周. 中国修复重建外科杂志. 2015(02)
[9]胚胎干细胞衍生的视网膜色素上皮细胞移植治疗眼病[J]. 胡诞宁. 中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2014(02)
[10]HLA-G诱导DC细胞在免疫耐受机制中的研究进展[J]. 许惠惠,阮嫣赟,颜卫华,林爱芬. 生命科学. 2011(08)
博士论文
[1]骨髓间充质干细胞来源微泡的生物学特征及其在组织工程中的应用研究[D]. 谢慧.华中科技大学 2016
硕士论文
[1]hESC生物药物建立及GM-1对hESC诱导分化神经细胞的影响[D]. 高选.山东大学 2010
本文编号：3171478
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
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中文摘要
ABSTRCT
第一章 综述
1.1 间充质干细胞的研究现状
1.1.1 间充质干细胞应用于免疫疾病治疗
1.1.2 间充质干细胞应用于组织修复和抗衰老治疗
1.1.3 间充质干细胞应用于组织工程研究
1.2 人胚胎干细胞的研究现状
1.3 人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的研究现状
1.4 间充质干细胞对T淋巴细胞免疫调节研究
1.5 研究目的及意义
第二章 人胚胎干细胞衍生间充质干细胞的分化与鉴定
2.1 实验方法
2.1.1 细胞培养
2.1.2 细胞冻存与复苏
2.1.3 hESC-MSC分化方案
2.1.4 MSC成骨、成脂、成软骨诱导分化
2.1.5 MSC增殖检测
2.1.6 流式细胞仪检测细胞表面抗原表达
2.1.7 RNA提取与反转录
2.1.8 荧光定量PCR(Real-time PCR)反应
2.1.9 统计与分析
2.2 实验仪器与试剂
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验试剂
2.3 实验结果
2.3.1 hESC-MSC的分化与细胞表面抗原表达
2.3.2 hESC-MSC的成骨、成脂、成软骨分化
2.3.3 hESC-MSC增殖检测
2.4 小结
第三章 人胚胎干细胞衍生MSC具有强烈的CD4~+-T淋巴细胞功能调节潜力
3.1 实验方法
3.1.1 细胞培养
3.1.2 细胞冻存与复苏
3.1.3 hESC-MSC分化方案
3.1.4 流式细胞仪进行细胞表面抗原表达检测
3.1.5 CD4~+T淋巴细胞增殖检测
3.1.6 CD4~+T淋巴细胞向Treg分化检测
3.1.7 统计与分析
3.2 实验仪器与试剂
3.2.1 实验仪器
3.2.2 实验试剂
3.3 实验结果
3.3.1 hESC-MSC在不同共培养条件下对CD4~+T淋巴细胞增殖的抑制
3.3.2 hESC-MSC在不同共培养条件下促进CD4~+T淋巴细胞向Treg细胞分化
3.4 小结
第四章 hESC通过不同包被材料衍生的MSC生物学特性鉴定
4.1 实验方法
4.1.1 细胞培养
4.1.2 细胞冻存与复苏
4.1.3 hESC-MSC分化方案
4.1.4 MSC成骨、成脂、成软骨诱导分化
4.1.5 流式细胞仪进行细胞表面抗原表达检测
4.1.6 RNA提取与反转录
4.1.7 荧光定量PCR(Real-time PCR)反应
4.1.8 统计与分析
4.2 实验仪器与试剂
4.2.1 实验仪器
4.2.2 实验试剂
4.3 实验结果
4.3.1 不同包被材料分化的hESC-MSC表面抗原表达
4.3.2 不同包被材料分化的hESC-MSC成骨、成脂、成软骨分化能力
4.4 小结
第五章 不同包被材料对hESC-MSC在 T淋巴细胞免疫功能调节的影响
5.1 实验方法
5.1.1 细胞培养
5.1.2 细胞冻存与复苏
5.1.3 hESC-MSC分化方案
5.1.4 流式细胞仪检测细胞表面抗原表达
5.1.5 T淋巴细胞增殖检测
5.1.6 T淋巴细胞向Treg分化检测
5.1.7 ELISA检测MSC分泌抗炎因子
5.1.8 统计与分析
5.2 实验仪器与试剂
5.2.1 实验仪器
5.2.2 实验试剂
5.3 实验结果
5.3.1 不同包被材料对hESC-MSC抑制T淋巴细胞增殖的影响
5.3.2 不同包被材料对hESC-MSC促进Treg分化的影响
5.3.3 不同包被材料对hESC-MSC在不同共培养条件下抗炎因子分泌的影响
讨论
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
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【参考文献】：
期刊论文
[1]间充质干细胞免疫调节特性及在器官移植中的应用[J]. 蒋珊珊,王峰,余丽梅. 中国组织工程研究. 2019(01)
[2]Ⅰ型胶原诱导骨髓间充质干细胞及成骨细胞的成骨分化机制[J]. 谢玉,周诺. 中国组织工程研究. 2018(21)
[3]间充质干细胞移植治疗胰腺炎的研究进展[J]. 金相任,徐铂然,侯国方,孙备,白雪巍. 世界华人消化杂志. 2017(30)
[4]体外定向诱导人羊膜间充质干细胞向骨、软骨及脂肪细胞的分化[J]. 李豫皖,朱喜忠,金瑛,王胜民,杨继滨,熊华章,邹刚,刘毅. 中国组织工程研究. 2017(01)
[5]人胚胎干细胞来源多巴胺前体细胞治疗帕金森病猴[J]. 王昱凯,周琪,胡宝洋. 生命科学. 2016(08)
[6]间充质干细胞临床应用的研究进展[J]. 李明,詹成,代曦煜,杨新宇,冯明祥. 复旦学报(医学版). 2016(04)
[7]人胚胎干细胞源性间充质干细胞的研究进展[J]. 冯年花. 中国细胞生物学学报. 2015(03)
[8]脐血间充质干细胞诱导分化为类雪旺细胞修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究[J]. 王玺,王胜,肖玉周. 中国修复重建外科杂志. 2015(02)
[9]胚胎干细胞衍生的视网膜色素上皮细胞移植治疗眼病[J]. 胡诞宁. 中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2014(02)
[10]HLA-G诱导DC细胞在免疫耐受机制中的研究进展[J]. 许惠惠,阮嫣赟,颜卫华,林爱芬. 生命科学. 2011(08)
博士论文
[1]骨髓间充质干细胞来源微泡的生物学特征及其在组织工程中的应用研究[D]. 谢慧.华中科技大学 2016
硕士论文
[1]hESC生物药物建立及GM-1对hESC诱导分化神经细胞的影响[D]. 高选.山东大学 2010
本文编号：3171478
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3171478.html
