SF3B1在乳腺癌组织中的表达及其敲除对人ER阳性乳腺癌细胞功能的影响
发布时间：2021-07-02 13:17
目的:检测剪接因子3B亚单位1（SF3B1）在不同分型乳腺癌中的表达量,评估其表达与临床病理学因素间的相关性。同时在体外检测SF3B1敲除后对雌激素受体（ER）阳性乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移、细胞周期和凋亡的影响。方法:用免疫组化检测110例乳腺癌标本中SF3B1的表达,通过ROC曲线确定最佳切点值,将乳腺癌患者组织标本分为高表达组与低表达组,并与临床病理因素相关联;通过短发夹RNA（shRNA）转染ER阳性乳腺癌细胞ZR-75-30进行SF3B1敲除,将其分为敲除组（SF3B1-sh1,SF3B1-sh2组）和阴性对照组（ZR-75-30-NC组）;用实时荧光定量的反转录聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹（Western blot）检测分别在mRNA水平和蛋白质水平验证SF3B1基因的敲除效率;用MTT法和集落形成实验评估细胞增殖能力;使用Transwell法测定细胞侵袭和迁移的能力;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;应用SPSS 20.0统计软件进行统计,计量资料采用均数±标准差（Mean±SD）表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05差异具...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
与邻近的正常乳腺组织相比，SF3B1在乳腺癌组织中表达上调
山西医科大学硕士学位论文16图2.SF3B1在不同乳腺癌细胞中的表达及敲除效率的验证。(a)RT-qPCR检测6株乳腺癌细胞系中SF3B1的mRNA表达量。(b)RT-qPCR检测ZR-75-30细胞系中SF3B1的敲除效率。(c)Westernblot检测ZR-75-30细胞系中SF3B1的敲除效率。注：SF3B1：剪接因子3B亚单位1；敲除组（SF3B1-sh1,SF3B1-sh2组）和阴性对照组（ZR-75-30-NC组）如集落形成实验所示，敲除组集落形成效率显著降低(P<0.01)(图3a)。然后用MTT法分析SF3B1基因敲除与细胞增殖的关系。分别于24、48、72、96、120h测定吸光度值。在72、96、120h，ZR-75-30细胞系中，SF3B1敲除组吸光度值与相应的阴性对照组相比明显降低(P<0.05)(图3b)。图3.SF3B1敲除在体外抑制ZR-75-30细胞增殖和集落形成。(a)与阴性对照组相比，SF3B1敲除组集落形成数减少(P<0.01)。(b)SF3B1敲除抑制ZR-75-30细胞的增殖(P<0.05)。
山西医科大学硕士学位论文16图2.SF3B1在不同乳腺癌细胞中的表达及敲除效率的验证。(a)RT-qPCR检测6株乳腺癌细胞系中SF3B1的mRNA表达量。(b)RT-qPCR检测ZR-75-30细胞系中SF3B1的敲除效率。(c)Westernblot检测ZR-75-30细胞系中SF3B1的敲除效率。注：SF3B1：剪接因子3B亚单位1；敲除组（SF3B1-sh1,SF3B1-sh2组）和阴性对照组（ZR-75-30-NC组）如集落形成实验所示，敲除组集落形成效率显著降低(P<0.01)(图3a)。然后用MTT法分析SF3B1基因敲除与细胞增殖的关系。分别于24、48、72、96、120h测定吸光度值。在72、96、120h，ZR-75-30细胞系中，SF3B1敲除组吸光度值与相应的阴性对照组相比明显降低(P<0.05)(图3b)。图3.SF3B1敲除在体外抑制ZR-75-30细胞增殖和集落形成。(a)与阴性对照组相比，SF3B1敲除组集落形成数减少(P<0.01)。(b)SF3B1敲除抑制ZR-75-30细胞的增殖(P<0.05)。
本文编号：3260540
【文章来源】：山西医科大学山西省
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
与邻近的正常乳腺组织相比，SF3B1在乳腺癌组织中表达上调
山西医科大学硕士学位论文16图2.SF3B1在不同乳腺癌细胞中的表达及敲除效率的验证。(a)RT-qPCR检测6株乳腺癌细胞系中SF3B1的mRNA表达量。(b)RT-qPCR检测ZR-75-30细胞系中SF3B1的敲除效率。(c)Westernblot检测ZR-75-30细胞系中SF3B1的敲除效率。注：SF3B1：剪接因子3B亚单位1；敲除组（SF3B1-sh1,SF3B1-sh2组）和阴性对照组（ZR-75-30-NC组）如集落形成实验所示，敲除组集落形成效率显著降低(P<0.01)(图3a)。然后用MTT法分析SF3B1基因敲除与细胞增殖的关系。分别于24、48、72、96、120h测定吸光度值。在72、96、120h，ZR-75-30细胞系中，SF3B1敲除组吸光度值与相应的阴性对照组相比明显降低(P<0.05)(图3b)。图3.SF3B1敲除在体外抑制ZR-75-30细胞增殖和集落形成。(a)与阴性对照组相比，SF3B1敲除组集落形成数减少(P<0.01)。(b)SF3B1敲除抑制ZR-75-30细胞的增殖(P<0.05)。
山西医科大学硕士学位论文16图2.SF3B1在不同乳腺癌细胞中的表达及敲除效率的验证。(a)RT-qPCR检测6株乳腺癌细胞系中SF3B1的mRNA表达量。(b)RT-qPCR检测ZR-75-30细胞系中SF3B1的敲除效率。(c)Westernblot检测ZR-75-30细胞系中SF3B1的敲除效率。注：SF3B1：剪接因子3B亚单位1；敲除组（SF3B1-sh1,SF3B1-sh2组）和阴性对照组（ZR-75-30-NC组）如集落形成实验所示，敲除组集落形成效率显著降低(P<0.01)(图3a)。然后用MTT法分析SF3B1基因敲除与细胞增殖的关系。分别于24、48、72、96、120h测定吸光度值。在72、96、120h，ZR-75-30细胞系中，SF3B1敲除组吸光度值与相应的阴性对照组相比明显降低(P<0.05)(图3b)。图3.SF3B1敲除在体外抑制ZR-75-30细胞增殖和集落形成。(a)与阴性对照组相比，SF3B1敲除组集落形成数减少(P<0.01)。(b)SF3B1敲除抑制ZR-75-30细胞的增殖(P<0.05)。
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