电针预处理对心肌缺血小鼠NLRP3炎性体活化和巨噬细胞极化的影响
发布时间：2021-08-06 16:48
目的:电针预处理（EAP）能有效减轻心肌缺血（MI）损伤,但是其机制尚未完全阐释。越来越多的证据表明梗死后心脏的炎性反应直接影响心室功能的重塑,其中炎性体活化和巨噬细胞极化在该过程扮演重要角色,因此,拟通过本研究从调控NLRP3炎性体活化和巨噬细胞表型变化的角度探索电针预处理减轻MI损伤的可能机制。方法:以C57BL/6小鼠为研究对象,随机分为4组,正常组（Ctrl）、正常电针预处理组（EA+Ctrl）、心肌缺血模型组（MI）、电针预处理3d后造模组（EA+MI）。采用结扎小鼠冠状动脉左前降支（LAD）构建急性心肌缺血模型;预处理方案为电针双侧“内关”,电针频率2Hz/15Hz,疏密波,强度2mA,每次20min,1次/d,共干预3d。采用超声心动图和TTC染色用于评估缺血24h后MI小鼠的心功能和心脏梗死面积;HE染色法和免疫组织化学法观察小鼠心脏梗死区域的炎症水平,以Western blot检测NLRP3炎性小体的活化程度,流式细胞术检测巨噬细胞极化和中性粒细胞浸润程度。结果:（1）与正常组相比,模型组心肌梗死面积比例和心功能降低;与模型组相比,电针预处理后造模组心肌梗死面积比例和...
【文章来源】：南京中医药大学江苏省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１技术路线图??
反应以及??缺血组织修复的关键环节。调控ＮＬＲＰ３炎性小体的活化，可以平衡急性心肌缺??血阶段缺血心肌组织中的炎性平衡，有利于缺血心肌组织损伤后的修复与重塑。??ＮＬＲＰ３?ＡＳＣ?Ｐｒｏ－ｃａｓｐａｓｅ－１??ＩＨＷＨ?ＮＡＣＨＴ?ＭＭ?ＣＡＲＤ?｜?｜?ＣＡＲＤ??ＬＲＲ?，?．??＼?！?／??＼?ｖ?ｚ??ＤＱＤＱｉ?ｍ?ｃｕｍａｍ?／?一??ＮＬＲＰ３?ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ?＿??Ｂ「盯ＢＢｌ，??Ｃａｓｐａｓｅ－１?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ??图２?ＮＬＲＰ３炎性体的结构及在炎性反应中的作用??大量的动物实验也表明，小鼠ＡＭＩ模型中，缺血心肌组织中ＮＬＲＰ３表达升??高，炎性反应加剧［８４，８５］，相反，缺乏ＮＬＲＰ３炎性体成分可减轻炎性反应并促进??心脏的保护作用［２９］。另外，ＮＬＲＰ３７－小鼠ＡＭＩ模型也验证了?ＮＬＲＰ３的缺乏可有??效降低心肌炎性反应，实现心肌保护效应［８６］。??３．?２巨噬细胞、中性粒细胞与心肌缺血??ＡＭＩ早期的急性炎性反应是由针对缺血心肌细胞坏死的固有免疫触发的。??坏死的心肌碎片作为ＤＡＭＰＳ被固有免疫识别，诱发急性的剧烈的炎性反应Ｐ，??８８）。ＡＭＩ后，当固有免疫系统被激活后，免疫细胞在缺血心肌组织中聚集，诱导??最初的炎性反应［８９］。ＡＭＩ发生后，中性粒细胞是最早进入缺血心肌的免疫细胞，??随后单核巨噬细胞被募集到缺血心肌组织，诱发急性炎性反应，吞噬坏死心肌细??８??
?第一部分理论研究???Ｃｄ２０６ｌｏｗ??Ｃｄ２０６ｈｉｅｈ??图３巨噬细胞的极化对炎性反应的影响??Ｍｌ和Ｍ２巨噬细胞极化的概念最早来源于体外研究，Ｍｌ型巨噬细胞的极??化主要由脂多糖（ＬＰＳ）和ＩＦＮ－ｙ联合诱导，通过诱导信号转导子（ＪＡＫ）和转录??激活因子ｌ（ＳＴＡＴｌ）下游磷酸化，激活Ｔｏｌｌ样受体，进一步影响丝裂原活化蛋白??（ＭＡＰＫ）通路、干扰素调节因子（ＩＲＦ）通路和ＮＦ－ｋＢ通路，促使分泌一系列的促炎??因子［１Ｑ９，?ＵＱ］。Ｍ２型巨噬细胞的极化由ＩＬ－４和ＩＬ－１３信号通过ＪＡＫ－ＳＴＡＴ通路激??活ＳＴＡＴ６，ＳＴＡＴ６的信号传递使巨噬细胞向Ｍ２型表达［ｍ］。虽然理论上可以根??据巨噬细胞极化表达的不同受体来分选，但是由于巨噬细胞有许多细微的表型，??目前我们仍然不能对其进行精确的分类。研究者使用Ｆ４／８０和ＣＤｌｌｂ标记对小??鼠的Ｍｌ和Ｍ２型巨噬细胞进行了分选［８６］；也有研究者通过ＣＤ２０６ｌｍ＾Ｐ?ＣＤ２０６ｈｉｇｈ??对小鼠的Ｍｌ和Ｍ２巨噬细胞进行了区分…２］。另外Ｍ２型巨噬细胞因为具有组??织修复、抑制炎性反应、吞噬活性、免疫调节等作用，所以又将Ｍ２型巨噬细胞??分为Ｍ２ａ，Ｍ２ｂ，Ｍ２ｃ等亚型［｜１３］。Ｍ２ａ和Ｍ２ｃ巨噬细胞对免疫调节和组织修复??至关重要，而抑制炎性免疫反应则主要由依赖Ｍ２ｂ细胞［｜１４］。巨噬细胞亚型的转??化并不是简单割裂的，而不同的巨噬细胞亚型在心肌缺血病理过程中是交替激活??的，巨噬细胞这种多亚型、多功能表达的特点，也为治疗心肌缺血创造了无限的??可能性。??在目前的实验研究中发现，在心肌缺血后，通过将Ｍｌ型巨噬细胞转变为??Ｍ２型巨噬细
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于线粒体通透性转换孔道探讨电针预处理抗心肌缺血/再灌注损伤的保护作用[J]. 张小蕾,王书国,林依梦,向丽莉,薛艺璇,李佳,黄伟. 湖北中医药大学学报. 2019(06)
[2]电针预处理对心肌缺血再灌注大鼠的保护作用及FXR/SHP基因的调控作用[J]. 李晨,张小蕾,薛艺璇,程德均,严江天,吴松,黄伟. 中国针灸. 2019(08)
[3]电针对心肌缺血小鼠心肌组织交感神经相关物质的影响[J]. 袁璟,王军蒙,蔡云,傅淑平,朱冰梅,卢圣锋. 中国针灸. 2019(05)
[4]再灌注期不同时间电针对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织中Bcl-2、Beclin1表达的影响[J]. 张宏如,仲泽昊,陈婉莹,白桦,肖燕,顾一煌,卢圣锋. 中国针灸. 2018(11)
[5]电针减轻大鼠心肌缺血损伤的AMPKα-HDAC5-HIF-1α信号级联机制[J]. 卢圣锋,丁亚娟,于美玲,傅淑平,洪浩,朱冰梅. 中国针灸. 2018(09)
[6]电针对急性心肌缺血模型小鼠心肌组织中炎性反应的影响[J]. 王军蒙,袁璟,蔡云,傅淑平,李敏慧,洪浩,卢圣锋,朱冰梅. 中国针灸. 2018(05)
[7]电针心经对心肌缺血大鼠小肠肠道菌群的影响[J]. 吴生兵,刘苗苗,王堃,吴欣,崔帅,周美启. 中医药临床杂志. 2018(03)
[8]心肌缺血动物模型实验研究进展[J]. 范英兰,胡丽萍,朱竟赫,刘禾,武晓琳,赵文婷,袁宇. 实验动物科学. 2018(01)
[9]电针、艾灸预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌自噬相关蛋白LC 3、Beclin 1表达的影响[J]. 谭成富,王超,杜琳,刘薇薇,宋瑾,冯果,严洁,阳晶晶,唐雅妮,陈美琳,李姣兰. 针刺研究. 2018(01)
[10]肠道菌群与心血管疾病的研究进展[J]. 刘煦,逯茂洋. 世界最新医学信息文摘. 2018(06)
本文编号：3326131
【文章来源】：南京中医药大学江苏省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１技术路线图??
反应以及??缺血组织修复的关键环节。调控ＮＬＲＰ３炎性小体的活化，可以平衡急性心肌缺??血阶段缺血心肌组织中的炎性平衡，有利于缺血心肌组织损伤后的修复与重塑。??ＮＬＲＰ３?ＡＳＣ?Ｐｒｏ－ｃａｓｐａｓｅ－１??ＩＨＷＨ?ＮＡＣＨＴ?ＭＭ?ＣＡＲＤ?｜?｜?ＣＡＲＤ??ＬＲＲ?，?．??＼?！?／??＼?ｖ?ｚ??ＤＱＤＱｉ?ｍ?ｃｕｍａｍ?／?一??ＮＬＲＰ３?ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ?＿??Ｂ「盯ＢＢｌ，??Ｃａｓｐａｓｅ－１?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ??图２?ＮＬＲＰ３炎性体的结构及在炎性反应中的作用??大量的动物实验也表明，小鼠ＡＭＩ模型中，缺血心肌组织中ＮＬＲＰ３表达升??高，炎性反应加剧［８４，８５］，相反，缺乏ＮＬＲＰ３炎性体成分可减轻炎性反应并促进??心脏的保护作用［２９］。另外，ＮＬＲＰ３７－小鼠ＡＭＩ模型也验证了?ＮＬＲＰ３的缺乏可有??效降低心肌炎性反应，实现心肌保护效应［８６］。??３．?２巨噬细胞、中性粒细胞与心肌缺血??ＡＭＩ早期的急性炎性反应是由针对缺血心肌细胞坏死的固有免疫触发的。??坏死的心肌碎片作为ＤＡＭＰＳ被固有免疫识别，诱发急性的剧烈的炎性反应Ｐ，??８８）。ＡＭＩ后，当固有免疫系统被激活后，免疫细胞在缺血心肌组织中聚集，诱导??最初的炎性反应［８９］。ＡＭＩ发生后，中性粒细胞是最早进入缺血心肌的免疫细胞，??随后单核巨噬细胞被募集到缺血心肌组织，诱发急性炎性反应，吞噬坏死心肌细??８??
?第一部分理论研究???Ｃｄ２０６ｌｏｗ??Ｃｄ２０６ｈｉｅｈ??图３巨噬细胞的极化对炎性反应的影响??Ｍｌ和Ｍ２巨噬细胞极化的概念最早来源于体外研究，Ｍｌ型巨噬细胞的极??化主要由脂多糖（ＬＰＳ）和ＩＦＮ－ｙ联合诱导，通过诱导信号转导子（ＪＡＫ）和转录??激活因子ｌ（ＳＴＡＴｌ）下游磷酸化，激活Ｔｏｌｌ样受体，进一步影响丝裂原活化蛋白??（ＭＡＰＫ）通路、干扰素调节因子（ＩＲＦ）通路和ＮＦ－ｋＢ通路，促使分泌一系列的促炎??因子［１Ｑ９，?ＵＱ］。Ｍ２型巨噬细胞的极化由ＩＬ－４和ＩＬ－１３信号通过ＪＡＫ－ＳＴＡＴ通路激??活ＳＴＡＴ６，ＳＴＡＴ６的信号传递使巨噬细胞向Ｍ２型表达［ｍ］。虽然理论上可以根??据巨噬细胞极化表达的不同受体来分选，但是由于巨噬细胞有许多细微的表型，??目前我们仍然不能对其进行精确的分类。研究者使用Ｆ４／８０和ＣＤｌｌｂ标记对小??鼠的Ｍｌ和Ｍ２型巨噬细胞进行了分选［８６］；也有研究者通过ＣＤ２０６ｌｍ＾Ｐ?ＣＤ２０６ｈｉｇｈ??对小鼠的Ｍｌ和Ｍ２巨噬细胞进行了区分…２］。另外Ｍ２型巨噬细胞因为具有组??织修复、抑制炎性反应、吞噬活性、免疫调节等作用，所以又将Ｍ２型巨噬细胞??分为Ｍ２ａ，Ｍ２ｂ，Ｍ２ｃ等亚型［｜１３］。Ｍ２ａ和Ｍ２ｃ巨噬细胞对免疫调节和组织修复??至关重要，而抑制炎性免疫反应则主要由依赖Ｍ２ｂ细胞［｜１４］。巨噬细胞亚型的转??化并不是简单割裂的，而不同的巨噬细胞亚型在心肌缺血病理过程中是交替激活??的，巨噬细胞这种多亚型、多功能表达的特点，也为治疗心肌缺血创造了无限的??可能性。??在目前的实验研究中发现，在心肌缺血后，通过将Ｍｌ型巨噬细胞转变为??Ｍ２型巨噬细
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于线粒体通透性转换孔道探讨电针预处理抗心肌缺血/再灌注损伤的保护作用[J]. 张小蕾,王书国,林依梦,向丽莉,薛艺璇,李佳,黄伟. 湖北中医药大学学报. 2019(06)
[2]电针预处理对心肌缺血再灌注大鼠的保护作用及FXR/SHP基因的调控作用[J]. 李晨,张小蕾,薛艺璇,程德均,严江天,吴松,黄伟. 中国针灸. 2019(08)
[3]电针对心肌缺血小鼠心肌组织交感神经相关物质的影响[J]. 袁璟,王军蒙,蔡云,傅淑平,朱冰梅,卢圣锋. 中国针灸. 2019(05)
[4]再灌注期不同时间电针对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织中Bcl-2、Beclin1表达的影响[J]. 张宏如,仲泽昊,陈婉莹,白桦,肖燕,顾一煌,卢圣锋. 中国针灸. 2018(11)
[5]电针减轻大鼠心肌缺血损伤的AMPKα-HDAC5-HIF-1α信号级联机制[J]. 卢圣锋,丁亚娟,于美玲,傅淑平,洪浩,朱冰梅. 中国针灸. 2018(09)
[6]电针对急性心肌缺血模型小鼠心肌组织中炎性反应的影响[J]. 王军蒙,袁璟,蔡云,傅淑平,李敏慧,洪浩,卢圣锋,朱冰梅. 中国针灸. 2018(05)
[7]电针心经对心肌缺血大鼠小肠肠道菌群的影响[J]. 吴生兵,刘苗苗,王堃,吴欣,崔帅,周美启. 中医药临床杂志. 2018(03)
[8]心肌缺血动物模型实验研究进展[J]. 范英兰,胡丽萍,朱竟赫,刘禾,武晓琳,赵文婷,袁宇. 实验动物科学. 2018(01)
[9]电针、艾灸预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌自噬相关蛋白LC 3、Beclin 1表达的影响[J]. 谭成富,王超,杜琳,刘薇薇,宋瑾,冯果,严洁,阳晶晶,唐雅妮,陈美琳,李姣兰. 针刺研究. 2018(01)
[10]肠道菌群与心血管疾病的研究进展[J]. 刘煦,逯茂洋. 世界最新医学信息文摘. 2018(06)
本文编号：3326131
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