Grx1敲除对慢性高氧诱导新生小鼠支气管肺发育不良的影响及机制研究
发布时间：2021-08-07 06:55
目的:肺发育需要在正确时间地点微血管以合适数量出现。血管发育破坏从而扰乱肺泡上皮和毛细血管之间的关系是BPD发病重要机制。高氧环境下,Grx1/PSSG氧化还原模块调控信号通路,介导肺微血管发育。但Grx1/PSSG作用方式、功能及与BPD发生的相互关系尚未完全阐明。我们推测BPD氧化状态下Grx1/PSSG通过氧化还原NF-kB和HIF-1α通路调节炎性因子及VEGF之间平衡进而影响肺血管发育,引起BPD病理改变,肺泡间隔扩大。我们拟利用小鼠BPD模型探讨BPD发生始动因素:肺微血管发育紊乱-炎症介质诱导而非VEGF介导引起生理肺微血管发育阻滞而病理性血管形成。进一步明确BPD发生中肺微血管形成紊乱机制,并试图通过干预Grx1信号通路治疗BPD。力争在BPD发病机制血管假说方面获得突破,引导生理性毛细血管形成。方法:实验分组:取新生1天的C57BL/6J小鼠随机分为Grx1-/--control组、WT-control组、Grx1-/--O2组和WT-O2组,每组各50只。本实验采用的是85%高氧模型造模方法,取各组新生小鼠生后1、3、7、...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
高氧对小鼠Grx1酶活性（A）、蛋白表达（B）和免疫荧光（C）强度的影响
重庆医科大学硕士研究生学位论文22由于高氧增加了BPD肺组织中的Grx1含量，因此我们接下来研究了Grx1消融对BPD表型的影响。我们记录了每组21天的死亡率，幼鼠的生存曲线如图2A所示。高氧暴露会降低存活率，但是Grx1消融在高氧暴露后逆转了这种存活率趋势。高氧组的病理特征与肺泡简化一致，这是BPD的典型特征。Grx1缺陷型小鼠的肺泡发育得到改善，即使是那些用85％的氧气治疗的小鼠（图2B）。RAC用于评估肺泡的数量，并根据MLI测量值计算肺泡大校与对照肺相比，暴露于85％O2的肺中的RAC值显着降低；但是，暴露于85％O2的肺中的MLI值显着高于对照肺。Grx1消融明显防止了高氧气暴露引起的病理损伤（图2C）。图2各组小鼠死亡率（A）、肺组织形态学（B）、MLI和RAC（C）的比较Fig.2EffectofGrx1onsurvivalandlungmorphology.(A)Kaplan-Meiercurvesofmiceinfourgroups.(B)Hematoxylinandeosinstainingoflungtissuesat21days.(C)EffectsofGrx1duringhyperoxiaonRACandMLIinmice.2.3Grx1缺失诱导VEGFR2和VEGFA表达增加由于各种血管生成基因对于产后肺血管生成必不可少，因此我们接下来关注2.2Grx1消融增强BPD小鼠的存活和肺泡形成
调节 依赖性信号通路的能力，以证实 缺乏症通过 轴改善了 BPD。 Western 印迹显示，暴露于 O2 的小鼠中 VEGFR2 和 VEGFA 的水平均显着降低，而通过 Grx1 消融，二者的水平均升高（图 3A）。通过免疫荧光获得高倍放大的共聚焦图像，以专门评估 VEGFR2 和 CD31 的共定位。在新生儿对照小鼠中，VEGFR2 与 CD31 的共定位发生在上皮细胞中（由复合图像上主要的黄色/橙色信号证明），该细胞位于次级棘的尖端。在暴露于 O2 的小鼠中，VEGFR2 和 CD31 的染色均明显减少，位于隔膜尖端的上皮细胞中不存在 VEGFR2表达，而在 Grx1 消融后，毛细血管内皮细胞中的 VEGFR2 表达增加（图 3C）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]高氧及TGF-β1对肺泡Ⅱ型细胞上皮间质转化的影响[J]. 刘芳君,邓春,郭春宝,符州. 细胞与分子免疫学杂志. 2012(05)
本文编号：3327308
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【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
高氧对小鼠Grx1酶活性（A）、蛋白表达（B）和免疫荧光（C）强度的影响
重庆医科大学硕士研究生学位论文22由于高氧增加了BPD肺组织中的Grx1含量，因此我们接下来研究了Grx1消融对BPD表型的影响。我们记录了每组21天的死亡率，幼鼠的生存曲线如图2A所示。高氧暴露会降低存活率，但是Grx1消融在高氧暴露后逆转了这种存活率趋势。高氧组的病理特征与肺泡简化一致，这是BPD的典型特征。Grx1缺陷型小鼠的肺泡发育得到改善，即使是那些用85％的氧气治疗的小鼠（图2B）。RAC用于评估肺泡的数量，并根据MLI测量值计算肺泡大校与对照肺相比，暴露于85％O2的肺中的RAC值显着降低；但是，暴露于85％O2的肺中的MLI值显着高于对照肺。Grx1消融明显防止了高氧气暴露引起的病理损伤（图2C）。图2各组小鼠死亡率（A）、肺组织形态学（B）、MLI和RAC（C）的比较Fig.2EffectofGrx1onsurvivalandlungmorphology.(A)Kaplan-Meiercurvesofmiceinfourgroups.(B)Hematoxylinandeosinstainingoflungtissuesat21days.(C)EffectsofGrx1duringhyperoxiaonRACandMLIinmice.2.3Grx1缺失诱导VEGFR2和VEGFA表达增加由于各种血管生成基因对于产后肺血管生成必不可少，因此我们接下来关注2.2Grx1消融增强BPD小鼠的存活和肺泡形成
调节 依赖性信号通路的能力，以证实 缺乏症通过 轴改善了 BPD。 Western 印迹显示，暴露于 O2 的小鼠中 VEGFR2 和 VEGFA 的水平均显着降低，而通过 Grx1 消融，二者的水平均升高（图 3A）。通过免疫荧光获得高倍放大的共聚焦图像，以专门评估 VEGFR2 和 CD31 的共定位。在新生儿对照小鼠中，VEGFR2 与 CD31 的共定位发生在上皮细胞中（由复合图像上主要的黄色/橙色信号证明），该细胞位于次级棘的尖端。在暴露于 O2 的小鼠中，VEGFR2 和 CD31 的染色均明显减少，位于隔膜尖端的上皮细胞中不存在 VEGFR2表达，而在 Grx1 消融后，毛细血管内皮细胞中的 VEGFR2 表达增加（图 3C）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]高氧及TGF-β1对肺泡Ⅱ型细胞上皮间质转化的影响[J]. 刘芳君,邓春,郭春宝,符州. 细胞与分子免疫学杂志. 2012(05)
本文编号：3327308
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