黄连素在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的作用及机制研究
发布时间：2021-08-08 01:03
目的葡萄膜炎是一种常见的致盲性的眼内炎症性疾病,常由自身免疫失调引起。以往研究发现,黄连素可缓解实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）及溃疡性结肠炎等自身免疫性疾病的临床症状。本实验旨在研究黄连素是否可以抑制实验性自身性葡萄膜炎（EAU）的发生发展,并阐明其可能的作用及机制。方法B10R.Ⅲ小鼠经视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白161-180（IRBP161-180）免疫诱为EAU。并在诱导第1天开始予以黄连素或安慰剂ddH2O灌胃。在免疫后第14天,用裂隙灯观察炎症小鼠前房的改变并进行临床评分;取小鼠眼球做HE切片并进行病理评分;伊文思蓝实验用于观察血视网膜屏障完整性的改变;RT-PCR用于检测IL-17、IFN-r和IL-10的表达量;流式细胞术用于检测Th1细胞、Th17细胞和Treg细胞比例的变化;转录组测序用于检测脾脏转录组的差异表达基因;粪便16sRNA测序用于检测肠道菌群的差异。结果EAU造模后第14天,与对照组（ddH2O组）相比,黄连素治疗组小鼠临床评分和病理评分显著降低,受损的血眼屏障得到修复,黄连素治疗组EAU鼠炎症细胞和炎症因子的表达显著降低,同时抗炎因子的表达显...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
所示为，在造模及灌胃第14天后，使用裂隙灯评估小鼠的临床症状
重庆医科大学硕士研究生学位论文21如图5所示，黄连素可显著降低EAU小鼠脾脏淋巴细胞中Th17(IL-17+CD4+)细胞及Th1(IFN-γ+CD4+)细胞的比例，而增加Treg(Foxp3+CD4+)细胞的比例(n=5/group;mean±SD;***p<0.001;**p<0.01;*p<0.05;Unpairedt-test)。TheflowcytometryresultsshowedthatberberinecanremarkablyreducethefrequencyofTh17(IL-17+CD4+),Th1(IFN-γ+CD4+),andincreasethefrequencyofTreg(Foxp3+CD4+)(n=5/group;mean±SD;***p<0.001;**p<0.01;*p<0.05;Unpairedt-test).2.1.6黄连素可显著改变EAU小鼠脾脏转录组黄连素治疗EAU小鼠14天之后，取小鼠脾脏做转录组测序，结果显示黄连素处理组与对照组小鼠脾脏转录组存在显著差异，设阈值为：FDR<0.05,|log2foldchange|>1，则有476个DEGs，其中上调的DEGs为249个，下调DEGs为227个。
重庆医科大学硕士研究生学位论文22如图6所示，黄连素可显著改变EAU小鼠脾脏转录组的基因表达，其中上调的DEGs为249个，下调DEGs为227个（FDR<0.05,|log2foldchange|>1）。TheresultshowedthatBBRchangedtheglobalgenetranscriptionprofilesofEAUspleen，whereby249DEGswereupregulatedand227DEGsweredownregulated（FDR<0.05,|log2foldchange|>1）.2.1.7脾脏转录组GO分析黄连素治疗EAU小鼠可引起脾脏染色体重组通路及多条免疫相关通路基因表达水平的变化。其中上调的通路有三条，都属于细胞成分类别包括：basementmembrane,extracellularmatrix,collagen-containingextracellularmatrix；下调的通路有71调，生物过程类别通路有：nucleosomeassembly,chromatinassembly,myeloidcelldifferentiation,antigenprocessingandpresentationofpeptideantigen等；下调的细胞成分类别通路有：nucleosome,DNApackagingcomplex,protein-DNAcomplex,chromatin,MHCproteincomplex等；下调的分子功能类别
本文编号：3328894
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
所示为，在造模及灌胃第14天后，使用裂隙灯评估小鼠的临床症状
重庆医科大学硕士研究生学位论文21如图5所示，黄连素可显著降低EAU小鼠脾脏淋巴细胞中Th17(IL-17+CD4+)细胞及Th1(IFN-γ+CD4+)细胞的比例，而增加Treg(Foxp3+CD4+)细胞的比例(n=5/group;mean±SD;***p<0.001;**p<0.01;*p<0.05;Unpairedt-test)。TheflowcytometryresultsshowedthatberberinecanremarkablyreducethefrequencyofTh17(IL-17+CD4+),Th1(IFN-γ+CD4+),andincreasethefrequencyofTreg(Foxp3+CD4+)(n=5/group;mean±SD;***p<0.001;**p<0.01;*p<0.05;Unpairedt-test).2.1.6黄连素可显著改变EAU小鼠脾脏转录组黄连素治疗EAU小鼠14天之后，取小鼠脾脏做转录组测序，结果显示黄连素处理组与对照组小鼠脾脏转录组存在显著差异，设阈值为：FDR<0.05,|log2foldchange|>1，则有476个DEGs，其中上调的DEGs为249个，下调DEGs为227个。
重庆医科大学硕士研究生学位论文22如图6所示，黄连素可显著改变EAU小鼠脾脏转录组的基因表达，其中上调的DEGs为249个，下调DEGs为227个（FDR<0.05,|log2foldchange|>1）。TheresultshowedthatBBRchangedtheglobalgenetranscriptionprofilesofEAUspleen，whereby249DEGswereupregulatedand227DEGsweredownregulated（FDR<0.05,|log2foldchange|>1）.2.1.7脾脏转录组GO分析黄连素治疗EAU小鼠可引起脾脏染色体重组通路及多条免疫相关通路基因表达水平的变化。其中上调的通路有三条，都属于细胞成分类别包括：basementmembrane,extracellularmatrix,collagen-containingextracellularmatrix；下调的通路有71调，生物过程类别通路有：nucleosomeassembly,chromatinassembly,myeloidcelldifferentiation,antigenprocessingandpresentationofpeptideantigen等；下调的细胞成分类别通路有：nucleosome,DNApackagingcomplex,protein-DNAcomplex,chromatin,MHCproteincomplex等；下调的分子功能类别
本文编号：3328894
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