氧化铁纳米粒子促人牙周膜干细胞成骨分化及修复大鼠牙周骨缺损的研究
发布时间：2021-08-09 00:07
目的:1)探讨氧化铁纳米粒子（iron oxide nanoparticles,IONPs）促人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）成骨分化的作用及选择最佳IONPs成骨浓度,并通过转录组测序分析其所发挥作用的可能分子机制。2)观察氧化铁纳米粒子在大鼠牙周骨缺损修复中的应用效果。方法:1)（1）通过改良酶消化法及有限稀释法克隆化获得hPDLSCs,并应用流式技术检测第三代hPDLSCs表型。（2）体外定向三系分化培养hPDLSCs 21天后,分别探讨其成骨、成脂、成软骨分化的潜能。（3）佩尔蓝染色、透射电镜（TEM）观察IONPs在hPDLSCs的分布。（4）免疫荧光法检测IONPs处理hPDLSCs后表型;（5）CCK-8法、EdU免疫荧光检测不同浓度0μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、300μg/ml、500μg/mlIONPs处理hPDLSCs后细胞的增殖。（6）以0μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、300μg/ml、500...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人牙周膜干细胞形态学观察（40×）
遵义医科大学硕士学位论文沈梦杰292.2有限稀释法克隆纯化hPDLSCs接种于96孔板24h后挑选标记单个贴壁细胞（图2A/B）；3-5天后单个hPDLSCs克隆成簇的细胞集落（图2C）；单个细胞长满底孔板的2/3时重悬后贴壁，细胞大小均匀，胞浆饱满（图2D）。有限稀释法单克隆培养的单个hPDLSCs呈短梭形或多角形，贴壁、快速生长。图2有限稀释法纯化人牙周膜干细胞（A:100×;B/C/D:40×）注：A：单个人牙周膜干细胞（2天）；B：5天后克隆成簇的人牙周膜干细胞；C/D:一代人牙周膜干细胞（10天）Fig.2MorphologicalcharacteristicofhAMSCs.（A:100×;B/C/D:40×）Note:A:AsinglehPDLSCs(2days);B:hPDLSCs（5days）C/D:P1generationofhPDLSCs(10days).
遵义医科大学硕士学位论文沈梦杰302.3hPDLSCs鉴定及纯度分析hPDLSCs进行流式技术检测，鉴定细胞表型，结果证实：CD44、CD73、CD90、CD105高表达，表达率99%以上，CD34、CD11B、CD19、CD45、HLA-DR阴性表达，从而提示hPDLSCs属于MSCs，确定了本实验所用细胞的来源及其特征（图3）。图3流式细胞术检测第3代hPDLSCs表型分子及纯度注：A:CD19+CD34+CD45+CD11b+HLA-DR;B:CD44;C:CD73;D:CD105;E:CD90Fig.3DetectionofphenotypicmoleculesandpurityofthethirdgenerationofhPDLSCsbyflowcytometry.Note:A:CD19+CD34+CD45+CD11b+HLA-DR;B:CD44;C:CD73;D:CD105;E:CD90
【参考文献】：
期刊论文
[1]氧化铁纳米粒子在骨组织修复再生中的研究与应用[J]. 沈梦杰,杨琨,刘琪. 中国组织工程研究. 2019(14)
[2]The National Center for Nanoscience and Technology,China（NCNST）:an international innovation engine for nano research[J]. Ling Wang,Shuxian Wu. National Science Review. 2017(03)
[3]低温快速成型3D打印磁性纳米复合人工骨的性能测定[J]. 黄江鸿,熊建义,王大平,丁文斌,尤微,刘威,王大明,陈洁琳,段莉,朱伟民. 海南医学. 2017(04)
[4]关于牙周炎定义标准[J]. 裴喜燕,欧阳翔英,和璐. 牙体牙髓牙周病学杂志. 2015(01)
[5]慢病毒介导uPA-siRNA重组表达载体的构建及促进兔软骨细胞增殖[J]. 史晨辉,王维山,李长俊,张振东,郭风劲,陈安民. 基础医学与临床. 2014(05)
[6]牙周膜干细胞的生物学特性及其作为种子细胞在牙周组织工程中应用的研究进展[J]. 殷丽华,刘琪,余占海,秦子顺. 吉林大学学报(医学版). 2013(02)
[7]Wnt信号通道组成及其在成骨细胞分化增殖中的效应[J]. 岳二丽,杨晓喻,赵红宇. 中国口腔种植学杂志. 2008(04)
[8]Wnt信号通路对骨调节研究新进展[J]. 李宝新,李玉坤. 国际骨科学杂志. 2008(03)
[9]免疫磁珠法分离纯化人牙周膜干细胞[J]. 高秦,刘宏伟,金岩. 临床口腔医学杂志. 2006(09)
[10]神经干细胞超顺磁性氧化铁纳米粒子标记和体内MRI示踪[J]. 景猛,刘新权,刘恩重. 中华神经外科疾病研究杂志. 2006(01)
本文编号：3330951
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人牙周膜干细胞形态学观察（40×）
遵义医科大学硕士学位论文沈梦杰292.2有限稀释法克隆纯化hPDLSCs接种于96孔板24h后挑选标记单个贴壁细胞（图2A/B）；3-5天后单个hPDLSCs克隆成簇的细胞集落（图2C）；单个细胞长满底孔板的2/3时重悬后贴壁，细胞大小均匀，胞浆饱满（图2D）。有限稀释法单克隆培养的单个hPDLSCs呈短梭形或多角形，贴壁、快速生长。图2有限稀释法纯化人牙周膜干细胞（A:100×;B/C/D:40×）注：A：单个人牙周膜干细胞（2天）；B：5天后克隆成簇的人牙周膜干细胞；C/D:一代人牙周膜干细胞（10天）Fig.2MorphologicalcharacteristicofhAMSCs.（A:100×;B/C/D:40×）Note:A:AsinglehPDLSCs(2days);B:hPDLSCs（5days）C/D:P1generationofhPDLSCs(10days).
遵义医科大学硕士学位论文沈梦杰302.3hPDLSCs鉴定及纯度分析hPDLSCs进行流式技术检测，鉴定细胞表型，结果证实：CD44、CD73、CD90、CD105高表达，表达率99%以上，CD34、CD11B、CD19、CD45、HLA-DR阴性表达，从而提示hPDLSCs属于MSCs，确定了本实验所用细胞的来源及其特征（图3）。图3流式细胞术检测第3代hPDLSCs表型分子及纯度注：A:CD19+CD34+CD45+CD11b+HLA-DR;B:CD44;C:CD73;D:CD105;E:CD90Fig.3DetectionofphenotypicmoleculesandpurityofthethirdgenerationofhPDLSCsbyflowcytometry.Note:A:CD19+CD34+CD45+CD11b+HLA-DR;B:CD44;C:CD73;D:CD105;E:CD90
【参考文献】：
期刊论文
[1]氧化铁纳米粒子在骨组织修复再生中的研究与应用[J]. 沈梦杰,杨琨,刘琪. 中国组织工程研究. 2019(14)
[2]The National Center for Nanoscience and Technology,China（NCNST）:an international innovation engine for nano research[J]. Ling Wang,Shuxian Wu. National Science Review. 2017(03)
[3]低温快速成型3D打印磁性纳米复合人工骨的性能测定[J]. 黄江鸿,熊建义,王大平,丁文斌,尤微,刘威,王大明,陈洁琳,段莉,朱伟民. 海南医学. 2017(04)
[4]关于牙周炎定义标准[J]. 裴喜燕,欧阳翔英,和璐. 牙体牙髓牙周病学杂志. 2015(01)
[5]慢病毒介导uPA-siRNA重组表达载体的构建及促进兔软骨细胞增殖[J]. 史晨辉,王维山,李长俊,张振东,郭风劲,陈安民. 基础医学与临床. 2014(05)
[6]牙周膜干细胞的生物学特性及其作为种子细胞在牙周组织工程中应用的研究进展[J]. 殷丽华,刘琪,余占海,秦子顺. 吉林大学学报(医学版). 2013(02)
[7]Wnt信号通道组成及其在成骨细胞分化增殖中的效应[J]. 岳二丽,杨晓喻,赵红宇. 中国口腔种植学杂志. 2008(04)
[8]Wnt信号通路对骨调节研究新进展[J]. 李宝新,李玉坤. 国际骨科学杂志. 2008(03)
[9]免疫磁珠法分离纯化人牙周膜干细胞[J]. 高秦,刘宏伟,金岩. 临床口腔医学杂志. 2006(09)
[10]神经干细胞超顺磁性氧化铁纳米粒子标记和体内MRI示踪[J]. 景猛,刘新权,刘恩重. 中华神经外科疾病研究杂志. 2006(01)
本文编号：3330951
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