TNFSF15基因单核苷酸多态性及其表达与原发性胆汁性胆管炎的关联性研究

发布时间：2021-08-09 03:27

　　目的:本研究拟探索人肿瘤坏死因子样配体1A（TNF-like ligand 1A,TL1A）的水平及肿瘤坏死因子超家族15（tumor necrosis factor superfamily 15,TNFSF15）基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）与原发性胆汁性胆管炎（primary biliary cholangitis,PBC）发病的关系,并对关联分析阳性的SNP位点进行功能预测,以期为今后筛查PBC高危人群及发现新的治疗靶点提供线索。方法:1、收集PBC患者和健康对照者外周静脉血,分离血浆和血细胞,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC）,提取基因组DNA和RNA。2、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测健康对照者和PBC患者外周血血浆TL1A的水平。3、实时荧光定量PCR检测PBC患者和健康对照者PBMC中TNFSF15基因mRNA的相对表达量。4、筛选目标SNP位点。应用Sanger... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

线性免疫印迹法检测结果示意图

遵义医科大学硕士学位论文高琪28图（a）图（b）注：图（a）为ELISA检测TL1A柱状图，图（b）为TL1A的标准曲线。图2-2ELISA检测各实验组血浆中TL1A结果Fig2-2TheresultsofTL1AexpressionlevelinplasmabythemethodofELISA2.3.2应用ROC曲线评估血浆TL1A水平预测PBC的价值应用受试者工作特征曲线（receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC）计算曲线下面积，评价血浆TL1A浓度水平预测PBC的价值。血浆TL1A浓度水平预测PBC的ROC曲线下面积为0.838，大于机会参考下面积（P<0.05），说明血浆TL1A水平对于诊断PBC具有显著的意义且具有一定的准确性，ROC曲线图见图2-3。图2-3血浆TL1A水平预测PBC的ROC曲线Fig2-3TheROCcurveofPlasmaTL1AlevelpredictsofPBC2.4TNFSF15基因mRNA的相对表达2.4.1总RNA的浓度、纯度及完整性

遵义医科大学硕士学位论文高琪29琼脂糖凝胶电泳结果显示：28S、18S和5S条带清晰且28S和18S亮度比约为2：1，结果如图2-4。微量核酸检测分光光度计检测结果显示：所有RNA样本的A260/A280比值在1.9~2.1，浓度在60~200ng/μl，表明RNA的纯度、浓度和完整性较好。图2-4RNA琼脂糖凝胶电泳结果Fig2-4TheresultsofagarosegelelectrophoresisofRNA2.4.2TNFSF15基因和内参基因的扩增曲线及熔解曲线扩增曲线的CT值在15~35之间，曲线拐点清楚，整体平行性好。熔解曲线为一单一峰，表明反应无特异性扩增。结果见下图2-5。注：图A为TNFSF15基因和GAPDH内参基因扩增曲线；图B为TNFSF15基因和GAPDH内参基因熔解曲线。图2-5扩增曲线、熔解曲线Fig2-5Amplificationcurve,meltingcurve2.4.3实时荧光定量PCR结果PBC组TNFSF15基因mRNA的相对表达量高于健康对照组2.975倍，两组间差异有统计学意义（P<0.05），结果见表2-4和图2-6所示。AB28S18S5SGAPDHTNFSF15TNFSF15GAPDH


本文编号：3331267