周期蛋白依赖性激酶-6基因在鼻咽癌中的表达及分子功能的初步研究
本文关键词:周期蛋白依赖性激酶-6基因在鼻咽癌中的表达及分子功能的初步研究 出处:《南方医科大学》2017年博士论文 论文类型:学位论文
更多相关文章: 周期 蛋白 依赖性 激酶 因在 鼻咽癌 中的 表达 分子 功能 初步 研究
【摘要】:研究背景与内容鼻咽癌是中国南方和东南亚地区最常见的恶性肿瘤之一。它的发生是一个多基因、多阶段、多途径的进程,对鼻咽癌相关新基因的研究仍将有助于我们更好的揭示鼻咽癌的发病机理。本研究在所在课题组前期研究的基础上,采用基因芯片技术,结合前期实验的结果,筛选出了细胞周期依赖性激酶CDK6作为本次研究的对象,并观察到了其细胞周期信号通路的异常表现。基于以上研究结果,本研究为了明确CDK6在鼻咽癌中的作用,了解其参与了哪些miRNA的表达和调控途径,开展以下研究。研究内容与方法1.采用免疫组化和荧光定量等方法检测CDK6在鼻咽癌组织和细胞系中的表达水平,并结合临床资料进行统计学分析。2.利用瞬时转染法沉默CDK6基因在鼻咽癌细胞中的表达,通过MTT、tranwell、boyden等手段研究其对于鼻咽癌细胞生物学特性的影响。3.对干扰CDK6表达的鼻咽癌细胞进行miRNA芯片表达谱的分析,并通过MTT、tranwell、boyden、药敏试验等手段对筛选出的目标miRNA进行功能和机制学的研究。结果1.免疫组化结果显示,CDK6在鼻咽癌组织和细胞系中,均以高表达为主,与正常鼻咽上皮组织以及细胞系相比,差异有统计学意义(P0.001)。PCR验证后的结果相同。同时,有CDK6的核表达的患者的总生存率较无CDK6的核表达的患者更差。2.沉默CDK6基因对鼻咽癌细胞生物学行为的影响采用瞬时转染法,感染HONE1和5-8F细胞,western blot验证其感染效率明确,用于后续实验。1)采用MTT法检测CDK6基因沉默后细胞的体外增殖情况,结果显示,与空白对照组相比,实验组细胞的增殖速度显著减慢,结果具有统计学意义。2)Transwell小室检测CDK6沉默后鼻咽癌细胞体外迁徙运动能力的变化,结果显示,与空白对照组相比,干扰CDK6后的细胞运动能力明显减弱。3)Boyden小室检测CDK6基因沉默后鼻咽癌细胞体外侵袭运动能力的改变,结果显示干扰CDK6后,鼻咽癌细胞的侵袭能力显著降低。3.沉默CDK6表达后,利用miRNA芯片进行表达谱分析及机制、功能验证。沉默CDK6表达后,利用miRNA表达谱芯片筛选出表达差异最显著的Let-7d做为下一步研究对象。1)采用Let-7dmimics/inhibitor转染后,MTT法检测增殖情况,与空载对照组相比,Let-7d mimics组细胞生长速度明显降低(P0.001),Let-7d inhibitor组细胞生长速度明显增快(P0.001),结果有统计学意义。2)Transwell小室迁移实验,相比于对照,Let-7d mimics组细胞穿膜的数量减少,Let-7d inhibitor组细胞穿膜的数量增加,差异有统计学意义(Mimics t=7.572,P0.001,Inhibitor t=5.494,P0.001)。3)Boyden小室侵袭实验,相比于对照组,Let-7d mimics组细胞穿膜数量减少,Let-7dinhibitor组细胞穿膜数量增加,差异有统计学意义。4)western blot检测,Let-7d mimics 转染细胞后细胞周期基因c-myc表达下调。反之,Let-7d inhibitor组中,则c-myc表达上调。5)采用MTT法对CDK6以及let-7d表达改变导致鼻咽癌细胞对(5-fu)药物敏感性的影响进行了检测。观察到let-7d能够增高NPC细胞对5-Fu的药物敏感性。结论:1.CDK6在鼻咽癌组织中较正常鼻咽组织表达明显上调,其核表达阳性与患者生存率明显相关;2.CDK6基因能够增强鼻咽癌细胞的体外增殖能力,并促进其迁移和侵袭,对鼻咽癌的发生其正向调节作用。3.CDK6可能与miRNA中的let-7d存在负相关性,并通过鼻咽癌相关蛋白c-myc调节let-7d的表达,两者之间可能存在负性反馈环路。
【学位授予单位】:南方医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R739.63
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 傅江涛,赵碧芬;表皮生长因子受体在鼻咽癌中的表达及意义[J];浙江医学;2000年04期
2 陈淑勤;蛋白水解酶在鼻咽癌组织中的表达及意义的研究[J];福建医科大学学报;2001年03期
3 胡国华,李兵,朱江;鼻咽癌患者多药耐药相关蛋白基因的表达及意义[J];激光杂志;2004年03期
4 李宇红,邵建永,姜文奇,顾康生,黄慧强,管忠震;鼻咽癌组织中MMP-9CD44v6蛋白表达的检测及其临床意义[J];中国肿瘤临床;2004年20期
5 吴敬波,张建文,范娟,唐学清;多药耐药相关蛋白在鼻咽癌中表达的临床意义[J];四川医学;2005年03期
6 林少民;王奋;唐启信;;鼻咽癌家族肿瘤史115例调查[J];中国热带医学;2006年12期
7 叶奕菁;陆小军;吴新光;雷风;刘玉猛;;表皮生长因子受体在鼻咽癌组织总的表达与临床意义[J];临床和实验医学杂志;2007年04期
8 袁太泽;李晓霞;曹云;钱朝南;曾木圣;郭翔;;表皮生长因子受体活化与鼻咽癌患者无转移生存的关系[J];癌症;2008年05期
9 孔德军;付波;王敏;罗阳超;王平;;鼻咽癌324例延误诊断原因分析[J];华西医学;2009年09期
10 刘震;;曾益新:破解鼻咽癌密码的人[J];广东科技;2009年19期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 符生苗;梁茱;董玉英;;鼻咽癌的P_(16)基因表达分析[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
2 刘青;王雅棣;景尚华;王晓玲;程云杰;吴凤鹏;;E-钙粘蛋白在鼻咽癌组织中的表达水平与颈部淋巴结转移的关系[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年
3 邵建永;王海云;朱志华;孙炳宇;陈静;杜子明;张家兴;邵琼;黄马燕;符珈;廖定准;侯景辉;卢泰祥;叶伟民;Ingemar Ernberg;曾益新;;鼻咽癌分子分型研究[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
4 王树森;管忠震;向燕群;汪波;林桐榆;姜文奇;张力;张惠忠;侯景辉;;鼻咽癌组织中EGFR信号传导通路相关分子的表达[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年
5 陈显钊;;鼻咽癌诊治研究进展[A];海南省第二届肿瘤学术会议论文集[C];2005年
6 林少民;唐启信;;鼻咽癌家族肿瘤史115例调查分析[A];海南省第二届肿瘤学术会议论文集[C];2005年
7 邵世宏;姚运红;;鼻咽癌肿瘤干细胞及其表面标志物初步研究[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年
8 李菊兰;蔡华成;梁传余;韩伟;;生长抑素Ⅱ型受体在鼻咽癌组织中的表达[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编(下)[C];2007年
9 项光早;;微血管密度与鼻咽癌生长、浸润、转移和预后关系的研究[A];浙江省医学会耳鼻咽喉科学分会成立60周年庆典暨2011年浙江省医学会耳鼻咽喉头颈外科学学术年会论文汇编[C];2011年
10 潘建基;;鼻咽癌临床诊治现状和进展[A];中国肿瘤内科进展 中国肿瘤医师教育(2014)[C];2014年
中国重要报纸全文数据库 前6条
1 汤清波邋李奇 刘龄予;挑战“鼻咽癌”的人[N];大众卫生报;2007年
2 本报记者 卢育辉;崇尚“红牛”精神,喜欢“咖啡”会友[N];广东科技报;2006年
3 本报记者 罗艾桦;挑战“广东癌”[N];人民日报;2006年
4 仁华南;“回国发展是一项明智的选择”[N];人民日报海外版;2006年
5 本报记者 谢明霞;从蛋白质组学入手 探究鼻咽癌[N];健康报;2011年
6 广东省第二人民医院 主任医师 蔡长青;病毒与某些癌症[N];家庭医生报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘娟;多药耐药在鼻咽癌中的作用及药物逆转的相关研究[D];复旦大学;2014年
2 宗井凤;基于调强放疗的鼻咽癌临床分期研究以及EB病毒miRNA-BART7在临床中的应用价值[D];福建医科大学;2014年
3 邓旭斌;Evi-1通过RAS/PI3K/AKT通路促进鼻咽癌的进展[D];南方医科大学;2014年
4 宋青翠;CD21在鼻咽上皮的表达及介导游离EBV发生潜伏性感染的研究[D];南方医科大学;2014年
5 汪庚明;KAI1/CD82基因在鼻咽癌中的表达及其与鼻咽癌转移相关性的研究[D];安徽医科大学;2015年
6 王凡;鼻咽癌组织差异miRNA表达谱筛选和调控网络分析[D];南方医科大学;2016年
7 夏铀铀;HMGA2对鼻咽癌恶性生物学行为的影响及机制研究[D];南京医科大学;2016年
8 庄坤;长链非编码RNA HNF1A-AS在鼻咽癌细胞增殖和转移中的作用研究[D];吉林大学;2016年
9 李烁;鼻咽癌组织中磷酸果糖激酶1的表达及RNA干扰靶向沉默磷酸果糖激酶1对鼻咽癌细胞株CNE2生物学特性的影响[D];华中科技大学;2014年
10 谭遥;新疆维吾尔、汉族鼻咽癌患者HLA基因多态性、LMP2A特异性T细胞免疫应答及预后差异性研究[D];新疆医科大学;2016年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 温江妹;斯钙素2表达与鼻咽癌侵袭转移及预后的相关性研究[D];福建医科大学;2015年
2 崔晓飞;LMP1和Siah1在鼻咽癌组织中的表达情况及其预后和相关性分析[D];福建医科大学;2015年
3 杨青青;长链非编码RNA在鼻咽癌患者中差异表达的研究[D];福建医科大学;2015年
4 杨国军;朊蛋白在鼻咽癌中表达及意义的研究[D];石河子大学;2015年
5 吴姗姗;鼻咽癌组织咽拭涂片拉曼光谱研究[D];福建师范大学;2015年
6 马,
本文编号:1315864
本文链接:https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/1315864.html