皱盖假芝和灵芝孢子中甾醇类化合物抗肿瘤作用机制研究

发布时间：2018-01-01 10:22

本文关键词：皱盖假芝和灵芝孢子中甾醇类化合物抗肿瘤作用机制研究　出处：《华南理工大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：癌症已经成为全世界的严重公共健康问题,是引起死亡的主要原因。在新药物发现的历史上,从天然产物(尤其是次生代谢产物)中寻找抗肿瘤药物或辅助药物,成为国内外研究的重点之一。药用真菌因物种、遗传和生态的多样性,决定了其代谢产物多种多样,目前被认为是筛选抗肿瘤天然活性物质的重要资源。为了寻找更多的具有抗肿瘤生物活性的物质,本论文采用活性追踪的方法,研究了药用真菌皱盖假芝(Amauroderma rude(Berk.)Torrend)和成熟灵芝(Ganoderma lucidum(Curtis:Fr.)P.Karst)子实体所喷射出的灵芝孢子(G.lucidum spore)的抗肿瘤活性代谢产物,并对其活性物质的抗肿瘤作用和机制进行了探索。采用硅胶柱层析、反相半制备液相色谱法进行分离纯化,多种波谱法结合鉴定化合物结构。从皱盖假芝乙醇提取物的氯仿部分获得6个具有抗肿瘤活性组分,4种单体化合物,其中单体化合物包括2种甾醇类化合物,2种脂肪酸,鉴定为:麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇即麦角甾醇(ergosta-5,7,22-trien-3β-ol,1)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(ergosta-7,22-dien-3β-ol,2)、十六碳酸即棕榈酸(palmic acid,3)、二十碳酸(arachidic acid,4)。从灵芝孢子中分离得到5种化合物,包括3种甾醇类化合物,1种脂肪酸,1种二十四碳酸单甘油酯,鉴定为:十六碳酸即棕榈酸(palmic acid,GL12)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(Ergosta-7,22-dien-3β-ol,GL222)、麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one,GL211)、5α,8α-过氧麦角甾-6,22(E)-二烯-3β(5,8-epidioxiergosta-6,22-dien-3β-ol,G421)、二十四碳酸单甘油酯(tetracosanoicacidglyceride,GL52)。本文以单体化合物麦角甾醇为对象,研究其体内外抗肿瘤作用及分子作用机制。体外细胞实验结果显示,麦角甾醇抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵染和在软琼脂中形成克隆;体内动物实验结果显示,麦角甾醇能显著地延长腹水瘤小鼠生存期;进一步的研究发现,麦角甾醇激活肿瘤细胞内Foxo3a表达上调,Foxo3a直接作用于下游靶基因Bim和FasL,增强Bim和FasL蛋白表达,Fas L与Fas结合启动胞外细胞凋亡途径,Bim启动胞内线粒体细胞凋亡途径,二者联合作用,诱导细胞凋亡。从灵芝孢子中分离的过氧麦角甾醇是含有过氧桥氧化麦角甾醇类化合物。本研究以过氧麦角甾醇为研究对象,探讨其抗肿瘤作用机制。功能实验结果显示过氧麦角甾醇抑制肝癌细胞增殖和在软琼脂中形成克隆,表明其抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞死亡;进而,研究发现过氧麦角甾醇诱导肿瘤细胞死亡过程受到pAKT/Foxo3a和c-Myc/Foxo3a途径双重调控,通过抑制促癌因子AKT和c-Myc活性,提高细胞内Foxo3a含量,Foxo3a结合下游靶基因Puma和Bax,增强Puma和Bax蛋白表达,启动细胞凋亡途径,诱导肿瘤细胞死亡。综上所述,本文经过筛选从皱盖假芝醇提取物获得6个抗肿瘤组分,分离鉴定出4种化合物;从灵芝孢子中分离鉴定出5种化合物;评价了麦角甾醇和过氧麦角甾醇抗肿瘤活性,发现二者具有较强的抗肿瘤活性,并发现其抗肿瘤的作用机制。上述研究证明了药用真菌皱盖假芝和灵芝孢子抗肿瘤的物质基础,甾醇类化合物是其抗肿瘤的重要组分之一,是寻找抗肿瘤药物的先导化合物的重要资源。
[Abstract]:In order to find more substances with anti - tumor biological activity , four kinds of compounds including ergosta - 5,7,22 - trien - 3 尾 - ol , 1 , ergosta - 7,22 - trien - 3 尾 - ol ( 1 ) , ergosta - 7,22 - diene - 3 尾 - ol ( 2 ) , hexadecanoic acid ( palmic acid , 3 ) and 20 carbonic acid ( 4 ) were obtained . The effects of ergosterol on proliferation , migration , infection and formation of cell apoptosis in soft agar were studied . The results showed that ergosterol inhibited proliferation , migration , infection and formation of cell apoptosis in soft agar .

【学位授予单位】：华南理工大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285;R284

【参考文献】