Ad-HGF促进老年大鼠心梗后c-kit阳性心脏干细胞的增殖与分化及机制研究

发布时间：2018-01-16 01:05

本文关键词：Ad-HGF促进老年大鼠心梗后c-kit阳性心脏干细胞的增殖与分化及机制研究　出处：《南京医科大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景缺血性心脏病因其严重的致死率与极差的预后引起了极大的重视。在我国,缺血性心脏病死亡率呈明显上升趋势,平均为62.5/100,000人,是45岁以上男性和65岁以上女性的主要死亡原因。据统计,2015年我国65岁及以上人口为14434万人,近十年65岁及以上人口逐年增加,人口老龄化的高峰即将到来。这将导致老年群体中缺血性心脏病尤其是心肌梗死的发病人数进一步增加。传统治疗方法包括药物治疗、血管介入成形术和外科冠脉旁路移植术,这些方法虽然提高了心肌梗死的生存率和生活质量,但对坏死心肌作用有限,尤其对弥漫性冠状动脉病变难以奏效,心肌梗死已成为心力衰竭的首要原因。因此,探索老年人心梗后心肌再生修复的策略尤为重要。C-kit阳性心脏干细胞(C-kit+CSCs)的发现为我们修复损伤的心脏提供了治疗方向。C-kit阳性心脏干细胞具有高度自我更新能力,能够特异性分化为心脏结构细胞(心肌细胞、平滑肌细胞和内皮细胞)。然而,在老年心肌梗死的心脏中c-kit+CSCs的增殖和分化的调控机制仍不清楚。我们前期研究发现肝细胞生长因子(HGF)对心梗后心脏具有保护作用,然而HGF对于老年心梗后c-kit+ CSCs的增殖与分化的影响尚不清楚。目的本研究旨在探讨HGF对于老年大鼠心梗后心脏c-kit+ CSCs的增殖和分化的影响及潜在的分子机制。方法1.应用免疫荧光与Western blot技术分别检测幼年(2-3天)、中年(6-10月龄)和老年(18-22月龄)大鼠心脏中c-kit+ CSCs的表达情况与心肌组织中HGF及其磷酸化受体p-Met的表达水平,进而评价c-kit+CSCs与HGF在不同年龄大鼠心脏中的表达水平是否具有相关性;2.采用冠状动脉左前降支(LAD)结扎法构建老年大鼠的心肌梗死模型,并将腺病毒携带的肝细胞生长因子(Ad-HGF)注射到大鼠心肌梗死的周边区,研究Ad-HGF对于c-kit+ CSCs增殖和分化的影响;3.采用Western blot与免疫荧光技术检测Ad-HGF对老年大鼠心梗后心肌细胞坏死性凋亡的影响并进一步应用坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)抑制坏死性凋亡,探讨其对c-kit+ CSCs增殖与分化的影响;4.采用Western blot、免疫荧光与ELISA技术研究Ad-HGF对心肌组织及外周血清中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的水平与骨髓中c-kit+干细胞表达情况的影响;5.采用免疫荧光、Western blot、心脏超声与马松染色技术评价Ad-HGF对老年大鼠心梗后心肌重塑及心脏功能的影响。结果1.随着大鼠年龄的增长,其心脏中c-kit+ CSCs与HGF蛋白的表达水平逐渐降低,并且二者之间呈现出显著正相关;2.Ad-HGF促进了老年大鼠心肌梗死后心脏中c-kit+CSCs的增殖与分化,并进一步促进了梗死周边区域心肌细胞的增殖与血管的再生;3.Ad-HGF诱导了老年大鼠心梗后心肌细胞坏死性凋亡的发生,提高了心肌组织与外周血中HMGB1蛋白的表达水平,并增加了骨髓中c-kit+干细胞的数量;4.抑制坏死性凋亡减弱了 Ad-HGF诱导的老年大鼠心梗后c-kit阳性心脏干细胞的增殖与分化,减少了梗死周边区心肌和血管的再生,同时降低了心肌组织与外周血中HMGB1蛋白表达水平及梗死后大鼠骨髓中c-kit阳性干细胞的数量;5.Ad-HGF抑制了老年大鼠心梗后心肌细胞的凋亡,减轻了梗死区域心肌纤维化的水平,并改善了心梗后的心脏功能。结论Ad-HGF促进了老年大鼠心梗后心脏中c-kit+ CSCs的增殖与分化并进一步促进了心肌和血管的再生,改善了心梗后的心肌重塑与心脏功能。这可能与Ad-HGF诱导了梗死区域心肌坏死性凋亡的发生,进而增加了心肌组织与外周血中HMGB1的表达水平,并促进骨髓中c-kit+干细胞的增殖有关。
[Abstract]:Objective To investigate the effects of HGF on the proliferation and differentiation of c - kit + CSCs in aged rats .

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R542.22

【参考文献】