【摘要】：目的建立子宫内膜异位症大鼠模型,采用中药复方“益气化瘀方”进行干预。从功能学角度观察益气化瘀方对模型大鼠妊娠功能的影响,从组织病理学和分子生物学角度观察益气化瘀方对模型大鼠子宫内膜容受性的影响及对异位内膜生长的影响。探讨益气化瘀方治疗子宫内膜异位症同时改善子宫内膜容受性,提高妊娠功能的作用机制,为进一步临床应用提供理论依据。方法通过手术切除大鼠右侧子宫,剪取内膜组织块移植到肠系膜建立子宫内膜异位症大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为益气化瘀方组、孕三烯酮组、模型组,另设假手术组。各组给药方法如下:益气化瘀方组予益气化瘀方混悬液(相当于生药3.55g/ml),按4ml/(Kg·d)连续灌胃6周;孕三烯酮组予孕三烯酮混悬液(0.1mg/ml),按4ml/(Kg·d)连续灌胃4周后以等体积灭菌蒸馏水连续灌胃2周;模型组及假手术组均予灭菌蒸馏水,按4ml/(Kg·d)连续灌胃6周。实验研究分为三个部分。第一部分实验观察益气化瘀方对子宫内膜异位症模型大鼠妊娠功能的影响。在药物干预结束后于动情期将雌雄大鼠以2:1比例合笼,以发现阴栓或阴道脱落细胞涂片发现精子当日记为妊娠第1天,于雌鼠妊娠第16天采集标本。统计各组妊娠雌鼠数、妊娠雌鼠单侧子宫着床数,电子天平称量各胚胎及胎盘重量,平行切片法计数左侧卵巢妊娠黄体数,计算大鼠妊娠率、着床率。第二部分实验探讨益气化瘀方改善子宫内膜容受性,促进胚胎着床的作用机制。在药物干预结束后于动情期将雌雄大鼠以2:1比例合笼,于雌鼠妊娠第4天采集标本。ELISA法检测大鼠血清雌二醇(E2)与孕酮(P)水平,免疫组化SP法和蛋白质免疫印迹法分别检测大鼠子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、白血病抑制因子(lif)、整合素αυβ3(αυβ3)、基质金属蛋白酶-9(mmp-9)的表达。第三部分实验探讨益气化瘀方抑制异位内膜生长的作用机制。用游标卡尺测量大鼠干预前、后异位囊肿直径,免疫组化sp法检测大鼠异位内膜er、pr、αυβ3、mmp-9、基质金属蛋白酶组织抑制物-1(timp-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(casepase-9)表达。免疫组化切片放大400倍,采用image-proplus6.0软件进行图像分析,测量特异蛋白表达阳性区域的累计光密度(iod)值及区域面积(area),以平均光密度(iod/area)代表蛋白表达强度,结果记录为平均光密度值。westernblot采用bio-radxrs+成像仪采集图像,测定目标条带灰度值,选择β-actin为蛋白内参,结果记录为目标条带灰度值/β-actin条带灰度值。应用spss19.0统计软件进行数据分析,计量资料用均数加减标准差(`x±s)表示。计量资料经参数检验,多组间比较采用单因素方差分析或秩和检验,两两组间比较采用lsd或kruskal-wallis检验,组内差异采用配对样本t检验或wilcoxonsigned-rank检验;计数资料采用χ2检验或fisher精确检验。设定检验水准α=0.05,p0.05即为差异有显著性意义。结果1.益气化瘀方对子宫内膜异位症模型大鼠妊娠功能的影响模型组排卵数、着床数、着床率、胚胎重量及胎盘重量均低于假手术组,益气化瘀方组排卵数、着床数、着床率、胚胎重量及胎盘重量均高于模型组和孕三烯酮组,差异有显著性意义(p0.05);而孕三烯酮组排卵数、着床数、着床率、胚胎重量及胎盘重量与模型组差异无显著性意义(p0.05)。2.益气化瘀方对子宫内膜异位症模型大鼠围着床期血清e2、p水平的影响益气化瘀方组e2水平高于模型组和孕三烯酮组,差异有显著性意义(p0.05);而孕三烯酮组e2水平与模型组差异无显著性意义(p0.05)。模型组p水平低于假手术组,益气化瘀方组p水平高于模型组和孕三烯酮组,差异有显著性意义(p0.05);但孕三烯酮组p水平与模型组差异无显著性意义(p0.05)。3.益气化瘀方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜容受性的影响模型组围着床期子宫内膜er表达高于假手术组,益气化瘀方组和孕三烯酮组er表达均低于模型组,益气化瘀方组er表达高于孕三烯酮组,差异有显著性意义(p0.05)。模型组围着床期子宫内膜pr表达高于假手术组,益气化瘀方组和孕三烯酮组pr表达均低于模型组,益气化瘀方组pr表达低于孕三烯酮组,差异有显著性意义(p0.05)。模型组围着床期子宫内膜lif、αυβ3、mmp-9表达均低于假手术组,益气化瘀方组lif、αυβ3、mmp-9表达均高于模型组,差异有显著性意义(p0.05);但孕三烯酮组lif、αυβ3、mmp-9表达与模型组差异无显著性意义(p0.05)。4.益气化瘀方对子宫内膜异位症模型大鼠异位内膜的影响益气化瘀方组和孕三烯酮组干预后异位囊肿直径均较干预前减小,差异有显著性意义(p0.05);模型组干预前后异位囊肿直径比较差异无显著性意义(p0.05)。益气化瘀方组和孕三烯酮组异位内膜er、pr表达均低于模型组,差异有显著性意义(p0.05);而益气化瘀方组和孕三烯酮组异位内膜er、pr表达差异均无显著性意义(p0.05)。益气化瘀方组和孕三烯酮组异位内膜αυβ3、mmp-9表达均低于模型组,而timp-1表达均高于模型组,差异有显著性意义(p0.05);但益气化瘀方组和孕三烯酮组异位内膜αυβ3、mmp-9、timp-1表达均差异无显著性意义(p0.05)。益气化瘀方组和孕三烯酮组异位内膜casepase-9表达均高于模型组,差异有显著性意义(p0.05);但益气化瘀方组和孕三烯酮组casepase-9表达差异无显著性意义(p0.05)。结论1.子宫内膜异位症模型大鼠妊娠功能偏低,益气化瘀方能有效提高其排卵数和着床率,并能促进胚胎发育。2.益气化瘀方能有效提升子宫内膜异位症模型大鼠围着床期P水平,降调子宫内膜上PR表达,并能上调子宫内膜中LIF、αυβ3、MMP-9的表达,提示其可通过调节子宫内膜容受性,促进胚胎着床而改善子宫内膜异位症模型大鼠妊娠功能。3.益气化瘀方能有效抑制异位内膜生长,其机制可能与降低异位内膜ER、PR、αυβ3、MMP-9表达,提升TIMP-1表达而抑制异位内膜侵袭以及上调Casepase-9表达促进异位内膜细胞凋亡有关。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5;R-332
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本文编号：
2267571
