夹脊电针调控ASCI大鼠微环境中Rho-ROCKⅡ信号通路相关轴突生长抑制因子研究

发布时间：2018-10-17 19:08

【摘要】：目的:采用大鼠急性脊髓损伤(Acute spinal cord injury,ASCI)模型,观察夹脊电针对脊髓损伤后神经细胞轴突再生及相关抑制因子NogoA、RhoA、ROCKⅡ、MLC表达及变化规律,试图从髓鞘相关抑制因子启动Rho-ROCKⅡ信号通路途径相关主要因素的研究角度进一步揭示夹脊电针治疗急性脊髓损伤作用机制。方法:采用NYU打击器制备大鼠急性脊髓损伤模型,动物分为正常组(Normal组,仅用于Western blot)、模型组(ASCI组)、假手术组(Sham组)、夹脊电针组(EA组)、抑制剂组(Fasudi1组)。应用BBB评分法对大鼠急性脊髓损伤后运动功能的评定;HE染色观察脊髓损伤组织的病理改变;BDA示踪观察大鼠ASCI后神经通路上神经元的变化;免疫组化法检测大鼠ASCI后脊髓组织中NogoA、RhoA、ROCKⅡ、MLC的表达及Western blot法检测NogoA、RhoA、ROCKⅡ、MLC各时间段的蛋白表达变化。结果:1.大鼠急性脊髓损伤后BBB的评分结果表明:术后14d、28d,EA组疗效优于ASCI组(P0.05)。与术后14d相比,术后28dEA组评分明显升高,有统计学意义(P0.05)。2.HE染色结果显示:EA组、Fasudi1组神经细胞结构、形态变化均优于ASCI组,且术后28d效果最佳。3.BDA示踪结果显示:ASCI组、Sham组、EA组、Fasudi1组在脑部、T8-T9段均有大量神经元着色,呈现棕黄色颗粒,数量无明显差异(P0.05)。在T12-L1段,四组间BDA示踪存在显著差异:在Sham组,仍然存在大量BDA标记的神经元存在,差异不显著(P0.05);在ASCI组,标记的神经元数量明显减少,与Sham组相比,差异显著(P0.05);在EA组与Fasudil组经BDA标记的存活再生神经元与ASCI组相比,数量明显增加,差异显著(P0.05)。4.免疫组化结果显示:与ASCI组比较,EA组和Fasudi1组中RhoA、Nogo-A、ROCKⅡ、MLC表达降低,差异具有统计学意义(P0.05);与术后14d相比,术后28dEA组中RhoA、Nogo-A、ROCKⅡ、MLC表达降低,差异具有统计学意义(P0.05)。5.Western blot结果显示:与ASCI组比较,EA组和Fasudil组中RhoA、Nogo-A、ROCKⅡ、MLC表达降低,差异具有统计学意义(P0.05);与术后14d相比,术后28dEA组中RhoA、Nogo-A、ROCKⅡ、MLC表达降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1.大鼠急性脊髓损伤后损伤区微环境中髓鞘相关抑制因子释放增加,抑制了轴突再生现象,导致了脊髓继发性损害。2.ASCI后损伤区内,髓鞘相关抑制因子被有效激活,促进ASCI大鼠损伤区微环境中ROCKⅡ的表达,抑制轴突再生,提示Rho-ROCKⅡ信号通路介导ASCI大鼠轴突抑制因子的释放,从而抑制轴突再生。3.ROCKⅡ抑制剂(Fasudil)通过抑制ROCKⅡ的活性,从而阻断ROCKⅡ激活作用底物,从而减少脊髓损伤后轴突再生障碍,促进脊髓损伤神经功能恢复。4.夹脊电针通过抑制RhoA、Nogo-A、ROCKⅡ、MLC抑制因子在大鼠急性脊髓损伤后微环境中的表达,促进轴突再生,减轻脊髓继发性病理损害,促进受损神经功能恢复。
[Abstract]:Objective: to observe the expression and changes of nerve cell axon regeneration and related inhibitory factor NogoA,RhoA,ROCK 鈪，

本文编号：2277671