Ⅱ型心肾综合征患者中医证候学特征与circRNA表达谱关系研究

发布时间：2019-04-12 07:59

【摘要】：目的研究分析Ⅱ型心肾综合征患者相关临床特征、主要中医证候分布及不同中医证候之间临床特征的差异情况;检测Ⅱ型心肾综合征及不同中医证候患者circRNA表达谱差异;检测Ⅱ型心肾综合征不同中医证候患者的关键调节circRNA,并对其进行RT-PCR验证,为Ⅱ型心肾综合征患者中医辨证分型提供客观依据,为Ⅱ型心肾综合征诊断提供生物学基础。方法1.1 Ⅱ型心肾综合征患者临床资料收集选择2009-2016年在中国中医科学院广安门医院心内科住院的Ⅱ型心肾综合征患者267例,运用Epidata3.1数据库,建立Ⅱ型心肾综合征患者的临床资料数据库,并收集健康人241人,分析比较Ⅱ型心肾综合征患者与健康人之间的相关临床特征。1.2不同GFR水平的Ⅱ型心肾综合征患者临床资料收集选择2009-2016年在中国中医科学院广安门医院心内科住院的Ⅱ型心肾综合征患者267例,根据eGFR水平,分成三组(CKD3-5期),分析比较Ⅱ型心肾综合征患者不同分期的相关临床特征。1.3 Ⅱ型心肾综合征患者中医证候学分析对267例Ⅱ型心肾综合征患者的中医症状进行归纳分析,将出现频率10%症状剔除,筛选得到40个变量,运用聚类和因子分析等方法,得到Ⅱ型心肾综合征不同中医证候,并根据所得不同中医证候进行相关临床特征的比较分析。1.4 Ⅱ型心肾综合征患者外周血circRNA表达谱检测和生物信息学分析选取20例Ⅱ型心肾综合征患者和5例健康人,运用CapitalBio Technology Human CircRNA Array v2芯片,筛选Ⅱ型心肾综合征患者外周血中circRNA表达谱,利用miRanda软件预测与其结合的miRNA,进而预测其转录本mRNA,运用生物信息学方法对Ⅱ型心肾综合征患者差异表达mRNA进行功能分析。1.5 Ⅱ型心肾综合征不同中医证候患者外周血circRNA表达谱检测和生物信息学分析选取Ⅱ型心肾综合征不同中医证候患者20例,每个证候5例,同时选取健康人 5 例,运用 CapitalBio Technology Human CircRNA Array v2 芯片,筛选不同中医证候以及不同中医证候与健康人的差异表达circRNA,利用miRanda软件预测与其结合的miRNA,进而预测其转录本mRNA,运用生物信息学方法对上述表达差异mRNA进行功能探索。1.6 Ⅱ型心肾综合征患者中医证候学circRNA验证分别对15例Ⅱ型心肾综合征患者和12例健康人、8例Ⅱ型心肾综合征心肾不交、血瘀水停证和7例Ⅱ型心肾综合征非心肾不交、血瘀水停证患者,应用RT-PCR技术对Ⅱ型心肾综合征和Ⅱ型心肾综合征心肾不交、血瘀水停证患者的特异circRNA进行验证,分别得到Ⅱ型心肾综合征和Ⅱ型心肾综合征心肾不交、血瘀水停证的分子生物学基础。结果1.1 Ⅱ型心肾综合征患者相关临床特征结果独立样本t检验结果显示,CRS组红细胞参数、白细胞参数、血小板参数、血清酶学、肝肾功能、血脂、血浆蛋白及HCY方面均存在一定差异,Spearman相关性研究显示,红细胞参数、白细胞参数、血小板参数、血清酶学、肝肾功能、血脂、血浆蛋白与Ⅱ型心肾综合征的发生具有一定的相关性。二分类Logistic逐步回归分析,结果显示,年龄、血清HCY水平是Ⅱ型心肾综合征发病的重要因素。1.2不同GFR水平的Ⅱ型心肾综合征患者相关临床特征结果采用单因素方差分析结果显示,CKD3-5组患者在红细胞参数、血清酶学、血脂、肾功能、血浆蛋白、同型半胱氨酸、NT-proBNP、尿蛋白及心脏超声方面均存在一定差异。1.3 Ⅱ型心肾综合征患者中医证候学特征结果通过聚类和因子分析,得到以下4个证候:脾肾阳虚、气虚血瘀证;心肾阳虚、阳损及阴证;心肾不交、血瘀水停证;阴阳两虚、血瘀痰浊证。1.4 Ⅱ型心肾综合征患者circRNA表达谱及生物信息学结果Ⅱ型心肾综合征患者与健康人比较,circRNA芯片结果显示,差异表达上调circRNA共1989个,下调circRNA共895个;差异表达的mRNA经GO分析,细胞组分方面,表达差异的mRNA显著富集于cell periphery、plasma membrane、plasma membrane part、integral component of plasma membrane、intrinsic component of plasma membrane等98条通路;分子功能方面,表达差异的mRNA显著富集于 receptor activity、molecular transducer activity、signaling receptor activity、transmembrane signaling receptor activity、signal transducer activity 等 143 条通路;生物进程方面,表达差异的mRNA显著富集于signaling、response to chemical、single organism signaling、cell communication、cell surface receptor signaling pathway等595条通路。KEGG分析:Ⅱ型心肾综合征患者与健康对照组差异表达 mRNA 富集于 Hematopoietic cell lineage、Cell adhesion molecules(CAMs)等2条通路。1.5 Ⅱ型心肾综合征患者中医证候学circRNA表达谱及生物信息学分析脾肾阳虚、气虚血瘀证与健康人比较,差异表达上调circRNA共2614个,下调circRNA共516个;心肾阳虚、阳损及阴证与健康人比较,差异表达上调circRNA共847个,下调circRNA共1947个;心肾不交、血瘀水停证与健康人比较,差异表达上调circRNA共3272个,下调circRNA共2381个;阴阳两虚、血瘀痰浊证与健康人比较差异表达上调circRNA共3262个,下调circRNA共1590个;脾肾阳虚、气虚血瘀证与心肾阳虚、阳损及阴证比较,差异表达上调circRNA共1760个,下调circRNA共80个;脾肾阳虚、气虚血瘀证与心肾不交、血瘀水停证比较,差异表达上调circRNA共329个,下调circRNA共103个;心肾不交、血瘀水停证与心肾阳虚、阳损及阴证比较,差异表达上调circRNA共620个,下调circRNA共139个;阴阳两虚、血瘀痰浊证与脾肾阳虚、气虚血瘀证比较,差异表达上调circRNA共120个,下调circRNA共75个;阴阳两虚、血瘀痰浊证与心肾阳虚、阳损及阴证比较,差异表达上调circRNA共1887个,下调circRNA共224个;阴阳两虚、血瘀痰浊证与心肾不交、血瘀水停证比较,差异表达上调circRNA共202个,下调circRNA共27个。各不同中医证候与健康组比较,差异表达mRNA富集于多条生物通路,如locomotion、single organism signaling、signaling、cell communication、anatomical structure morphogenesis等通路;各中医证候之间比较,差异表达mRNA富集于多条生物通路,如 DNA repair、embryo development ending in birth or egg hatching、chordate embryonic development、cellular component organization、single-organism cellular process 等通路。1.6 Ⅱ型心肾综合征患者不同中医证候外周血circRNA实时定量PCR结果CRS组与Health组比较,hsa_cir_0001763的ΔCT明显低于对照组,hsa_circ_0079598的ΔCT明显高于对照组,差异具有极显著性统计学意义(P0.01);心肾不交、血瘀水停证组(XS组)与非心肾不交、血瘀水停证组(FXS组)比较,hsa_circ_0025640的△CT明显低于对照组,差异具有显著性统计学意义(P0.05),上述结果均与circRNA芯片结果一致。ROC曲线结果显示,hsa_cir_0001763曲线下面积(AUC)为0.933,敏感性为86.67%,特异性为83.33%,预测Ⅱ型心肾综合征的正确率为85.18%,hsa_cir c_0079598曲线下面积(AUC)为0.911,敏感性为73.33%,特异性为91.67%,预测Ⅱ型心肾综合征的正确率为 81.48%,hsa_circ_0025640 曲线下面积(AUC)为 0.875,敏感性为 87.50%,特异性为71.43%,预测Ⅱ型心肾综合征心肾不交、血瘀水停证的正确率为80.00%,提示 hsa_cir_0001763 水平越高,hsa_circ_0025640 水平越低,则患 Ⅱ 型心肾综合征的可能性越大,hsa_circ_0025640水平越高,则患Ⅱ型心肾综合征心肾不交、血瘀水停证的可能性越大。结论1.Ⅱ型心肾综合征患者随着肾功能损伤的不断加重,其造血系统、凝血系统、免疫系统、循环系统、泌尿系统等系统功能障碍加重,病情恶化。2.Ⅱ型心肾综合征患者临床表现为本虚标实,虚实夹杂。其常见证候为脾肾阳虚、气虚血瘀证,心肾不交、血瘀水停证,心肾阳虚、阳损及阴证及阴阳两虚、血瘀痰阻证。3.Ⅱ型心肾综合征患者发病机制可能与Hematopoietic cell lineage通路、Toll样受体信号通路、MAPK信号通路、Wnt信号通路等信号通路有关。4.Ⅱ型心肾综合征患者脾肾阳虚、气虚血瘀证关键上调circRNA为hsa-circRNA14362-14、hsa_circ_0127021、hsa_circ_0117337、hsa_circ_0060535、hsa_circ_0138971,关键下调 circRNA 为 hsa-circRNA9066-1、hsa_circ_0136708;心肾阳虚、阳损及阴证关键下调circRNA为hsa_circ_0103678、hsa-circRNA6809-9、hsa-circRNAl 1277-1、hsa_circ_0122389;心肾不交、血瘀水停证关键上调 circRNA 为hsa_circ_0012956、hsa_circ_0100172、hsa_circ_0025640、hsa_circ_0025641、hsa_circ_0117312、has_circ_0133589,关键下调 circRNA 为has_circ_0103164、hsa_circ_0098592、hsa-circRNA11756-1;阴阳两虚、血瘀痰浊证关键上调 circRNA 为 hsa_circ_0113754、hsa-circRNA7413-12,关键下调circRNA 为 hsa circ 0106982、hsa circ 0000777、hsa-circRNA3410-17。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中国中医科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R259

【参考文献】

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本文编号：2456855