Notch信号途径在Breg发育及变态反应应答中的作用研究

  本文关键词：Notch重组配体D1R在促进造血重建中的作用与机理，由笔耕文化传播整理发布。

《第四军医大学》 2014年

Notch信号途径在Breg发育及变态反应应答中的作用研究

李慧  

【摘要】：免疫系统的稳态依赖于效应性细胞和调节性细胞的平衡。与效应T细胞相对应的调节性T细胞已经得到证实，其存在及功能具有重要的意义。对于B细胞，一直认为其通过产生抗体、提供共刺激分子、提呈抗原在免疫反应中发挥正向调节作用1，然而最近研究发现，免疫系统中还存在发挥负向调节功能的B细胞亚群调节性B细胞(regulatory B cell，Breg)。 Breg是近年来确认的一类具有负向免疫调节功能的B细胞亚群，在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）2、炎症性肠炎3、系统性红斑狼疮4、接触性过敏反应5、感染和肿瘤6等疾病中发挥重要的调节作用。部分Breg亚群的免疫调节功能依赖于IL-10，又被称为B10细胞6,7。最近揭示了产生IL-10的Breg的表型，2008年Tedder等5研究发现，在小鼠脾脏产生IL-10的B细胞大多数存在于CD5+CD1dhighCD19+B细胞亚群，这一亚群B细胞尽管只占野生型小鼠脾脏B细胞的很小一部分，但却是产生IL-10的主要细胞1。CD5+CD1dhighCD19+B10细胞的鉴定是Breg研究领域的一项重要进展，为进一步研究其起源、发育和功能特点奠定了基础。 Breg的发育和功能受多种信号途径的调控，TLR信号、BCR信号、CD40信号均参与了Breg发育的调控，，IL-21也是调控Breg细胞功能的重要分子。然而，但到目前为止，Breg发育的确切调控机制尚未完全阐明。 Notch信号途径是调控细胞双向亚群发育和双向功能分化的重要信号途径，不仅参与T/B细胞分化、CD4/CD8T细胞分化等调控，还参与巨噬细胞的M1/M2极化、树突状细胞的致应答/致耐受的调控等，但Notch信号途径在Breg细胞发育及B细胞的正向/负向免疫调节功能中的作用及机制尚不明确。Notch信号通路包括Notch配体、Notch受体以及下游信号转导分子和调节分子，Notch受体的激活需要转录因子RBP-J来介导，将其敲除可以阻断所有Notch受体的信号，从而得到Notch受体完全失活的模型。我们课题组前期研究发现RBP-J基因敲除小鼠的边缘带前体（T2-MZP）B细胞的数目减少，边缘带B（MZB）细胞数量也减少。结合最新研究认为Breg细胞来源于T2-MZP细胞，我们推测Notch信号途径在Bregs的发育和功能中可能也发挥着关键性的作用。 目的：本研究拟利用在B细胞特异性剔除Notch信号分子RBP-J基因的小鼠，分析Notch信号对Breg细胞发育影响，同时分析Notch信号途径在B细胞特异性缺失后对接触性超敏反应和口服免疫耐受应答的影响。 方法：将CD19-Cre小鼠与RBP-flox小鼠交配，获得CD19-Cre-RBP-Jf/f基因型的小鼠，流式细胞仪分析该小鼠CD19+CD5+CD1dhighBreg的数量和比例；分离上述小鼠脾脏细胞，体外给予不同刺激,流式细胞仪检测分泌IL-10的B10细胞数目及B10前体细胞数目，分析Notch对B10细胞发育的影响。利用CD19-Cre-RBP-Jf/f小鼠和对照小鼠制备接触性超敏反应和口服免疫耐受模型，分析Notch信号途径在B细胞特异性缺失小鼠与对照小鼠相比在接触性皮炎炎症反应和特异性IgE应答等方面的差异。 结果： (1)获得了在B细胞特异性敲除RBP-J基因的小鼠；与杂合小鼠相比，CD19-Cre-RBP-Jf/f小鼠脾脏CD19+CD5+CD1dhighBreg数量显著降低；小鼠脾细胞体外刺激，细胞表面和胞浆内抗体染色后，进行流式细胞术检测，结果显示表达IL-10的B10及B10前体细胞的数目明显少于对照组。 (2)在接触性超敏反应模型中，B细胞特异性敲除RBP-J基因的小鼠耳廓较杂合子小鼠厚度改变更为明显，苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色切片中显示炎症更显著，即B细胞特异性敲除RBP-J基因的小鼠接触性超敏反应更为严重。 (3)在口服免疫耐受模型中，CD19-Cre-RBP-Jf/f小鼠血清中IgE的水平较杂合子小鼠明显升高，提示B细胞特异性敲除RBP-J基因的小鼠诱导产生免疫耐受的能力下降。 结论：Notch信号途径参与B10细胞发育，Notch信号通过B细胞负向调控接触性超敏反应和口服耐受模型的应答。

【关键词】：
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R758.2
【目录】：

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