Tfh细胞及其相关因子Bcl-6和IL-21在CRSwNP病人鼻息肉中的表达和意义的研究

发布时间：2017-03-18 08:06

  本文关键词：Tfh细胞及其相关因子Bcl-6和IL-21在CRSwNP病人鼻息肉中的表达和意义的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分Tfh细胞相关因子Bcl-6和IL-21在CRSwNP鼻息肉组织中的表达和意义的研究研究目的：鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)是慢性鼻窦炎的类型之一,传统上是一种TH2占主导伴有组织大量嗜酸性细胞浸润的鼻腔鼻窦粘膜慢性炎症性疾病。除了大量嗜酸细胞在息肉组织浸润外,我们还可以看到B细胞在息肉组织的大量活化、聚集以及IgA.IgE在息肉组织的过度产生,这说明局部B细胞聚集及其产生的IgA、IgE在CRSwNP形成过程中发挥了重要作用。以往研究发现B淋巴细胞在淋巴组织生发中心的活化、聚集以及IgA, IgE的产生必须有T淋巴细胞的辅助作用。过去学者一直认为是Th2细胞在T淋巴细胞辅助B淋巴细胞的过程中发挥了主要作用。但有研究显示缺乏Th2发育关键因子的老鼠仍然可以形成生发中心,仍然可以引起T细胞依赖的抗体反应,这就提示Th2细胞可能在B细胞聚集和免疫球蛋白的产生过程中发挥了有限的作用。滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)是新近发现的不同于Thl和Th2的CD4+T细胞(辅助性淋巴细胞,Th)的一个亚群。2011年Crotty提出,Tfh是主要负责辅助B细胞产生抗体的T细胞亚群,细胞在生发中心(GC)是Tfh辅助B细胞的部位,Tfh细胞在生发中心的形成,选择高亲和力B细胞分化为记忆细胞或浆细胞并分泌大量IgA, IgE等免疫球蛋白,以及维持长时间的体液免疫应答等方面都发挥着关键作用。并提出Bcl-6是控制CD4+T细胞分化为Tfh的关键转录因子。Tfh细胞能够表达各种不同类型细胞分子,如细胞因子IL-21,趋化因子受体5(CXCR5),共刺激诱导分子(ICOS)和程序死亡因子1(pd-1)。IL-21是Tfh细胞执行效应功能的主要细胞因子,其作用的主要靶细胞是B细胞,在B细胞对T细胞依赖抗原的初始免疫应答、再次免疫应答以及体液免疫长期的维持中都发挥了主要作用。近期研究发现Tfh细胞通过细胞因子IL-21在生发中心通过调节B细胞分化成记忆性B细胞和浆细胞,分泌大量IgA、IgE等免疫球蛋白,发挥调节人类机体免疫的功能。目前研究发现Tfh细胞参与了许多免疫系统及炎症性疾病的发生过程,如：支气管哮喘、自身免疫性肝炎和类风湿性关节炎等,但Tfh细胞是否参与了CRSwNP的发病过程并不明确。本研究旨在通过检测CRSwNP病人鼻息肉组织中Tfh细胞转录因子Bcl-6和白细胞介素21(IL-21)的表达,及其与CD20(B细胞标志抗原)、IgA、IgE在鼻息肉中的表达情况的关系,探讨Tfh细胞在CRSwNP形成过程中是否发挥了作用。研究方法：以2013年3月-2014年3月期间就诊并行手术治疗的22例CRSwNP病人的鼻息肉组织为实验组。并根据鼻息肉范围对病人评分(分别记为1,2,3分)。1分：鼻息肉仅仅在中鼻道内部；2分：鼻息肉超出中鼻道但还未达到下鼻甲下缘；3分：鼻息肉超过上述范围或多发性鼻息肉。以12例因脑脊液鼻漏、眶壁骨折需手术治疗病人的鼻腔、鼻窦粘膜组织为对照组。通过免疫组化检测实验组和对照组样本中Bcl-6+、CD20+(B细胞标志性分化抗原)细胞的表达分布,观察Tfh细胞和B细胞在鼻息肉组织中的分布情况；Real time PCR (RT-PCR)检测实验组和对照组样本中Bcl-6、IL-21在mRNA水平的表达；Western Blot检测实验组和对照组样本中在蛋白水平Bcl-6的表达；ELISA检测实验组和对照组样本中IL-21、IgA、IgE的表达。然后对所得数据进行统计学分析,客观反映在实验组和对照组中上述各种因子的表达是否存在差异。研究结果：Bcl-6+细胞广泛分布于鼻息肉组织的固有层中,与对照组比较,实验组表达量明显增高,且3分CRSwNP亚群患者息肉组织中Bcl-6+细胞的表达远高于2分者,差异有统计学意义(P0.01)。不论是在mRNA水平还是在蛋白水平,Bcl-6、IL-21在实验组中的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.01),且在mRNA水平Bcl-6的表达与IL-21表达呈正相关。CD20+细胞(B细胞)广泛分布于鼻息肉组织的固有层中,与对照组比较,实验组CD20+细胞、IgA、IgE表达明显增高,差异有统计学意义(P0.01)。且在实验组中发现了6例CD20+细胞、IgA、IgE表达均明显增高的具有生发中心样结构(G-C like structure)的典型病例。研究结论：Tfh细胞相关因子Bcl-6、IL-21在CRSwNP病人鼻息肉组织中表达明显高于对照组,提示Tfh细胞可能参与了鼻息肉的形成；CD20+B细胞、IgA、IgE在实验组病人鼻息肉组织中表达与Tfh细胞同步增高,提示在B细胞增殖、分化和免疫球蛋白的产生过程中可能是Tfh细胞提供了关键性辅助作用。第二部分Tfh细胞在CRSwNP不同亚型鼻息肉组织中流式细胞学研究研究目的：根据以往临床经验及先前的研究发现,CRSwNP病人病情的严重程度、手术预后与病人是否伴有组织嗜酸性细胞浸润、病人是否同时伴有支气管哮喘以及病人是否为复发性CRSwNP密切相关,而且我们实验的第一部已经证实Tfh细胞可能通过为B细胞的增殖、分化和免疫球蛋白的产生提供帮助的方式参与了CRSwNP的形成。在此基础上,我们根据CRSwNP是否伴有组织嗜酸性细胞浸润、是否同时伴有支气管哮喘以及病人是否为复发性CRSwNP将病人分为不同亚型,并利用流式细胞术分析Tfh细胞在CRSwNP、对照组及其不同亚型鼻息肉组织中的表达,观察疾病的严重程度是否与Tfh细胞的表达情况具有相关性。研究方法：根据CRSwNP病人鼻息肉组织中是否具有生发中心样结构、是否伴有组织嗜酸性细胞浸润、是否同时伴有支气管哮喘以及是否为复发性CRSwNP,将病人分为不同的亚型,CRSwNP鼻息肉组织或正常对照鼻腔鼻窦粘膜经匀浆器匀浆后提取上清液。由于Tfh细胞是Th细胞(CD4+T细胞)的一个亚群,Bcl-6是Tfh细胞的关键转化因子,所有Bc16+CD4+T细胞即为Tfh细胞。我们用流式细胞仪分析检测实验组和对照组组织提取液中的Bcl6+CD4+细胞(Tfh细胞)占全部CD4+T细胞的比例,用统计学方法进行统计和分析。研究结果：CRSwNP病人鼻息肉组织中Tfh细胞占全部CD4+细胞的比例明显高于对照组(P0.01)；具有生发中心样结构(GC+)CRSwNP病人鼻息肉组织中Tfh细胞的比例明显高于不具有生发中心样结构者(P0.01)；伴有组织嗜酸性细胞(EOS+)浸润CRSwNP病人鼻息肉组织中Tfh细胞的比例明显高于非嗜酸性细胞浸润者(P0.01)；同时伴有支气管哮喘CRSwNP病人(AS+)鼻息肉组织中Tfh细胞的比例明显高于不伴有哮喘者(P0.01)；复发性CRSwNP病人鼻息肉组织中Tfh细胞的比例明显高于初发者(P0.01)。研究结论：Tfh细胞在CRSwNP的表达明显高于对照组,此结果与第一部分实验结果(Tfh细胞相关因子Bcl-6、IL-21在CRSwNP病人鼻息肉组织中表达明显高于对照组)相一致,进一步说明了Tfh细胞在CRSwNP发病中发挥了重要的作用；Tfh细胞在具有生发中心样结构病人、伴有组织嗜酸性细胞浸润病人、伴有支气管哮喘病人以及复发性CRSwNP病人中的表达高于相应对照组,说明Tfh细胞在鼻息肉组织中表达情况与疾病的严重程度密切相关。由于Tfh细胞在不同亚型CRSwNP病人中的表达存在差异,提示Tfh细胞可以作为Tfh细胞病人病情严重程度以及手术预后的新的生物学指标,也提示我们可以针对Tfh细胞及其相关因子Bcl-6、IL-21制定特异性治疗方法,从而为鼻窦炎伴鼻息肉的治疗,特别是难治性鼻窦炎的治疗提供一种新的治疗手段。
【关键词】：滤泡辅助T细胞 鼻窦炎伴鼻息肉 白介素21 Bcl-6 免疫球蛋白 滤泡辅助T细胞 鼻窦炎伴鼻息肉 Bd-6 免疫球蛋白
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R765.25
【目录】：

• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-14
• 符号说明14-16
• 前言16-26
• 参考文献23-26
• 第一部分：Tfh细胞相关因子Bcl-6和IL-21在鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)病人鼻息肉组织中的表达和意义的研究26-51
• 研究背景26-29
• 实验材料与方法29-40
• 实验结果40-41
• 讨论41-44
• 研究结论44-45
• 附图附表45-51
• 第二部分：Tfh细胞在CRSwNP不同亚型鼻息肉组织中流式细胞学研究51-63
• 研究背景51-53
• 实验材料和方法53-55
• 结果55-56
• 讨论56-58
• 结论58-59
• 附图附表59-63
• 参考文献63-65
• 致谢65-66
• 攻读学位期间发表文章及科研成果66-67
• 学位论文评阅及答辩情况表67-68
• 英文附文168-85
• 英文附文285-97
• 英文附文397-106

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 刘良忠;王静;雷宇;安选;胡鹏;胡怀东;张大志;任红;;循环滤泡型辅助性T淋巴细胞及IL-21在自身免疫性肝炎中的初步研究[J];免疫学杂志;2010年12期

2 龚芳;苏强;申卫红;潘宇红;黄璇;;支气管哮喘患者外周血CD4~+CXCR5~+滤泡辅助性T细胞样细胞的变化及其意义[J];南京医科大学学报(自然科学版);2013年01期

3 洪苏玲,黄江菊,杨玉成,康厚墉,王yN琴,孙荣,钱迪,董小琴;慢性鼻窦炎鼻息肉合并支气管哮喘患者鼻窦内镜术后对支气管哮喘疗效的影响[J];中华耳鼻咽喉科杂志;2004年03期

  本文关键词：Tfh细胞及其相关因子Bcl-6和IL-21在CRSwNP病人鼻息肉中的表达和意义的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：254151