线粒体未折叠蛋白反应在阿尔兹海默病中的作用机制研究
发布时间：2021-01-25 17:11
研究背景及目的阿尔兹海默病（Alzheimer’ s disease,AD）是一种以进行性记忆和认知功能衰退,同时伴有行为和人格改变为主要特征的神经系统退行性疾病。流行病学调查结果显示,在60岁以上人群中有10%的人饱受AD的困扰,而在85岁以上人群中AD的发病比例则高达50%。疾病不仅影响患者的身体和心理健康,而且对他们的照顾者、家庭和整个社会都造成了沉重的负担,因此AD已经成为一项亟待解决的全球公共卫生问题。但到目前为止,还没有能明确治愈这种疾病的方法。由β淀粉样蛋白（Aβ）构成的细胞外的淀粉样蛋白沉积是AD主要的神经病理学特征之一。遗传、生物化学和动物模型的数据均表明,Aβ在AD的发病中起着核心作用,在很长一段时间内都被认为是治疗AD的最有前景的目标。因此,进一步研究A β神经毒性的作用机制对于了解AD的发病机制并开发有效的治疗措施显得尤为重要。线粒体是一种由线粒体外膜和线粒体内膜包被的具有独特结构的细胞器。大量研究证实了线粒体在很多年龄相关性疾病中发挥着重要作用,AD作为一种复杂的多因素疾病,线粒体功能障碍也是其常见的病理改变。当线粒体中大量错误或未折叠蛋白累积时,就会激活线粒...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．?ＡＰ细胞外干预的ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中和ＡＰＰ／ＰＳ１转基因小鼠中存在ＵＰＲｍｔ的激??活??图Ａ?ＳＨＳＹ５Ｙ细胞经不同浓度的Ａ?０?２５－３５处理２４ｈ后，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ＵＰＲｍ?
ａｓｔａｔｉｎ（ｕＭ）?０１１１１０１０１０?＿??Ｓｉｍｖａｓｔａ？ｎ（ｈ）?０?２?６?２４?２?６?２４?Ｃ｜｜｜｜｜ｇ｜?ｌＩ｜｜｜｜｜｜｜??Ｌ０ＮＰ１?———?，５里．１１］篮匱＿—?．■疆ＬｈＪ?＿?Ｈ??Ｈｓｐ６０?Ｗｌｔ＾?ｍｍｍ?？■？?＜ｍｒｎｍ?？ｍ？?Ｓｔｍｖａｓｔａｒｔｎｇ?ＳＵｎｖｘＭＵｎｇ??ＨｔｒＡ２／０ｍｉ?輯？？必一＇…￣?等?ｔＡｌ?１Ｓ＂??二：：：：二：［ｗ＿?偏勤廳??ＳｋｎｖａａｂＭＭｔｇ?Ｂｉａｎｖａａｆａｔｉｎｇ??图１．通过ＨＭＧＣＳ－１?ｓ?ｉＲＮＡｓ或ｓ?ｉｍｖａｓｔａｔ?ｉｎ阻断甲轻戊酸通路会抑制由Ａ?（３?２５－３５诱导的??ＳＨＳＹ５Ｙ细胞ＵＰＲｍｔ反应的激活??图?Ａ?ＳＨＳＹ５Ｙ?细胞经?２０ｕＭ?Ａ?Ｐ?２５－３５?干预?４ｈ?后，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?检测?ＨＭＧＣＳ－１?蛋??白的表达并定量，其中Ｐ－Ａｃｔｉｎ为内参（＊，?ｐ＜０．０５）。图Ｂ转染对照组或??ＨＭＧＣＳ－ｌｓｉＲＮＡｓ?４８ｈ?后，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?检测?ＳＨＳＹ５Ｙ?细胞内?ＨＭＧＣＳ－１?和?ＵＰＲｍｔ?相??关蛋白的表达并定量，其中３－Ａｃｔｉｎ为内参（＊表示与转染ｓｉＮＣ组相比ｐ＜０．?０５）。??图Ｃ转染对照组或ＨＭＧＣＳ－１?ｓｉＲＮＡｓ?４８ｈ后再给与２０ｕＭ?Ａ?Ｐ?２５－３５干预４ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ检测ＳＨＳＹ５Ｙ细胞内１ＩＭＧＣＳ－１和ＵＰＲｍｔ相关蛋白的表达并定量，其中３?－Ａｃｔｉｎ??为内参（＊表不与转染ｓｉＮＣ组相比ｐ＜０．?０５）。图Ｄ经过ｌｕＭ和１０ｕＭ?ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ??处理不同时间后再给与２０ｕＭ?Ａ?Ｐ
激活。为了检测内源性过表达ＡＰＰｓｗ基因后是否会??引起同样的ＵＰＲｍｔ反应，我们采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法检测ＨＥＫ２９３和２０Ｅ２细胞??中ＵＰＲｍｔ相关蛋白的表达。结果显示，与ＨＥＫ２９３细胞相比，２０Ｅ２细胞中ＡＰＰ蛋??白的水平明显增加，再次验证了?ＡＤ细胞模型构建成功。与ＨＥＫ２９３细胞相比，２０Ｅ２??细胞中ＵＰＲｍｔ相关蛋白Ｈｓｐ６０的表达明显增力［］。但是，另外两个ＵＰＲｍｔ相关蛋白??ＨｔｒＡ２／０ｍｉ、ＣＬＰＰ在２０Ｅ２细胞中的水平却比ＨＥＫ２９３细胞下降（图１）。上述结??果提示与ＨＥＫ２９３细胞相比，稳定过表达ＡＰＰｓｗ基因后细胞内ＵＰＲｍｔ相关蛋白的??表达有所改变。??Ｔ?＊?■?ＨＥＫ２９３??…２＇５１?＊?ｍ?２０Ｅ２??ＡＰＰ?丄??２〇－幽??Ｈｓｐ６０?—＊?１５，?Ｈ??ＨｔｒＡ２／０ｍｉ?ｍ＂ｍ?？＊＊？?１?〇．?圖?＊?＊??ＣＬＰＰ?ｍｍ?ｍｍ?。＿５■■圍■幽■?＿??ＧＡＰＤＨ?ｏ．ｏ－Ｌ＊ｒ？￣￣■，開￣￣■■网??Ｈｓｐ６０?ＨｔｒＡ２／０ｍｉ?ＣＬＰＰ??图１．稳定过表达ＡＰＰｓｗ基因后ＨＥＫ２９３细胞内ＵＰＲｍｔ相关蛋白的表达有所改变??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ＨＥＫ２９３和２０Ｅ２细胞中ＡＰＰ及ＵＰＲｍｔ相关蛋白的表达并定量，??其中?ＧＡＰＤＨ?为内参（＊，ｐ＜０．０５）。??５４??
本文编号：2999584
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．?ＡＰ细胞外干预的ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中和ＡＰＰ／ＰＳ１转基因小鼠中存在ＵＰＲｍｔ的激??活??图Ａ?ＳＨＳＹ５Ｙ细胞经不同浓度的Ａ?０?２５－３５处理２４ｈ后，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ＵＰＲｍ?
ａｓｔａｔｉｎ（ｕＭ）?０１１１１０１０１０?＿??Ｓｉｍｖａｓｔａ？ｎ（ｈ）?０?２?６?２４?２?６?２４?Ｃ｜｜｜｜｜ｇ｜?ｌＩ｜｜｜｜｜｜｜??Ｌ０ＮＰ１?———?，５里．１１］篮匱＿—?．■疆ＬｈＪ?＿?Ｈ??Ｈｓｐ６０?Ｗｌｔ＾?ｍｍｍ?？■？?＜ｍｒｎｍ?？ｍ？?Ｓｔｍｖａｓｔａｒｔｎｇ?ＳＵｎｖｘＭＵｎｇ??ＨｔｒＡ２／０ｍｉ?輯？？必一＇…￣?等?ｔＡｌ?１Ｓ＂??二：：：：二：［ｗ＿?偏勤廳??ＳｋｎｖａａｂＭＭｔｇ?Ｂｉａｎｖａａｆａｔｉｎｇ??图１．通过ＨＭＧＣＳ－１?ｓ?ｉＲＮＡｓ或ｓ?ｉｍｖａｓｔａｔ?ｉｎ阻断甲轻戊酸通路会抑制由Ａ?（３?２５－３５诱导的??ＳＨＳＹ５Ｙ细胞ＵＰＲｍｔ反应的激活??图?Ａ?ＳＨＳＹ５Ｙ?细胞经?２０ｕＭ?Ａ?Ｐ?２５－３５?干预?４ｈ?后，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?检测?ＨＭＧＣＳ－１?蛋??白的表达并定量，其中Ｐ－Ａｃｔｉｎ为内参（＊，?ｐ＜０．０５）。图Ｂ转染对照组或??ＨＭＧＣＳ－ｌｓｉＲＮＡｓ?４８ｈ?后，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?检测?ＳＨＳＹ５Ｙ?细胞内?ＨＭＧＣＳ－１?和?ＵＰＲｍｔ?相??关蛋白的表达并定量，其中３－Ａｃｔｉｎ为内参（＊表示与转染ｓｉＮＣ组相比ｐ＜０．?０５）。??图Ｃ转染对照组或ＨＭＧＣＳ－１?ｓｉＲＮＡｓ?４８ｈ后再给与２０ｕＭ?Ａ?Ｐ?２５－３５干预４ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ检测ＳＨＳＹ５Ｙ细胞内１ＩＭＧＣＳ－１和ＵＰＲｍｔ相关蛋白的表达并定量，其中３?－Ａｃｔｉｎ??为内参（＊表不与转染ｓｉＮＣ组相比ｐ＜０．?０５）。图Ｄ经过ｌｕＭ和１０ｕＭ?ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ??处理不同时间后再给与２０ｕＭ?Ａ?Ｐ
激活。为了检测内源性过表达ＡＰＰｓｗ基因后是否会??引起同样的ＵＰＲｍｔ反应，我们采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法检测ＨＥＫ２９３和２０Ｅ２细胞??中ＵＰＲｍｔ相关蛋白的表达。结果显示，与ＨＥＫ２９３细胞相比，２０Ｅ２细胞中ＡＰＰ蛋??白的水平明显增加，再次验证了?ＡＤ细胞模型构建成功。与ＨＥＫ２９３细胞相比，２０Ｅ２??细胞中ＵＰＲｍｔ相关蛋白Ｈｓｐ６０的表达明显增力［］。但是，另外两个ＵＰＲｍｔ相关蛋白??ＨｔｒＡ２／０ｍｉ、ＣＬＰＰ在２０Ｅ２细胞中的水平却比ＨＥＫ２９３细胞下降（图１）。上述结??果提示与ＨＥＫ２９３细胞相比，稳定过表达ＡＰＰｓｗ基因后细胞内ＵＰＲｍｔ相关蛋白的??表达有所改变。??Ｔ?＊?■?ＨＥＫ２９３??…２＇５１?＊?ｍ?２０Ｅ２??ＡＰＰ?丄??２〇－幽??Ｈｓｐ６０?—＊?１５，?Ｈ??ＨｔｒＡ２／０ｍｉ?ｍ＂ｍ?？＊＊？?１?〇．?圖?＊?＊??ＣＬＰＰ?ｍｍ?ｍｍ?。＿５■■圍■幽■?＿??ＧＡＰＤＨ?ｏ．ｏ－Ｌ＊ｒ？￣￣■，開￣￣■■网??Ｈｓｐ６０?ＨｔｒＡ２／０ｍｉ?ＣＬＰＰ??图１．稳定过表达ＡＰＰｓｗ基因后ＨＥＫ２９３细胞内ＵＰＲｍｔ相关蛋白的表达有所改变??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ＨＥＫ２９３和２０Ｅ２细胞中ＡＰＰ及ＵＰＲｍｔ相关蛋白的表达并定量，??其中?ＧＡＰＤＨ?为内参（＊，ｐ＜０．０５）。??５４??
本文编号：2999584
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/2999584.html
教材专著
