人脂肪干细胞来源的外泌体通过miR-486-5p介导促进皮肤创面愈合的机制研究

发布时间：2021-02-28 20:47

　　背景:皮肤作为人体最大的器官,维持着人体内外环境的平衡。当皮肤的正常解剖结构和功能完整性发生紊乱时,在机体自身的保护机制下,将启动一系列与创面愈合相关的生理和病理修复机制。愈合是一种复杂而动态的细胞信号反应,是一种由止血、炎症、增殖、迁移和重塑等重叠阶段组成的生物和分子活动,以实现组织修复。损伤发生后,脂肪组织可以促进恢复原始组织结构,其机制可能与ADSCs内含丰富的分泌体有关,这些分泌体已被证实在细胞增殖、分化、迁移和改善细胞与细胞外微环境之间联系中发挥重要的作用。外分泌体具有与干细胞类似的功能,其富含蛋白质、mRNA、miRNA和其他物质,少数miRNA被报道在愈合过程中发挥作用。miRNA为近年来一研究热点,但是关于外泌体分泌的miRNA在皮肤损伤愈合过程中的作用研究较少。目的:本研究主要探讨ADSCs源性外泌体分泌的miR-486-5p在皮肤损伤愈合中的作用及其机制,并为用于临床治疗提供理论基础。方法:本课题中主要使用的实验包括小鼠皮肤损伤模型、组织免疫荧光和HE染色、Masson三色染色、细胞转染技术、CCK8、蛋白免疫印迹实验、划痕实验、迁移实验和小管形成实验等。结果:1.... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

流式细胞计数检测细胞的表面分子（CD105、CD44、CD73和CD90）

第2章体外分离脂肪源性干细胞和外泌体鉴定14图2：茜素红、油红O、阿尔西亚蓝染色实验，其染色结果分别代表具有成骨、成脂肪和成软骨潜能2.2.3ADSCs源性外泌体判断最后，我们采用外泌体粒径检测和电镜检查实验，发现所获得的粒子直径高峰在100nm左右（图3A），电镜下也在该大小视野内发现该粒子（图3B）。Westernblot实验提示，相比对照组，所获得的粒子CD63蛋白和TSG101蛋白表达较高，而calnexin蛋白表达较少（图3C）。图3：外泌体粒径检测和电镜检查（A）粒径检测（B）电镜检查（C）Westernblot检测CD63、Calnexin和TSG101蛋白2.3讨论该部分实验我们采用经典的ADSCs细胞分离方法，从脂肪组织中分离ADSCs，并于体外进行培养，传代3次后，进行ADSCs细胞鉴定和外泌体检测。流式细胞仪检测发现，该细胞系表面分子CD105、CD44、CD73和CD90表达丰富；而其他分子如CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR表达阴性。茜素

第2章体外分离脂肪源性干细胞和外泌体鉴定14图2：茜素红、油红O、阿尔西亚蓝染色实验，其染色结果分别代表具有成骨、成脂肪和成软骨潜能2.2.3ADSCs源性外泌体判断最后，我们采用外泌体粒径检测和电镜检查实验，发现所获得的粒子直径高峰在100nm左右（图3A），电镜下也在该大小视野内发现该粒子（图3B）。Westernblot实验提示，相比对照组，所获得的粒子CD63蛋白和TSG101蛋白表达较高，而calnexin蛋白表达较少（图3C）。图3：外泌体粒径检测和电镜检查（A）粒径检测（B）电镜检查（C）Westernblot检测CD63、Calnexin和TSG101蛋白2.3讨论该部分实验我们采用经典的ADSCs细胞分离方法，从脂肪组织中分离ADSCs，并于体外进行培养，传代3次后，进行ADSCs细胞鉴定和外泌体检测。流式细胞仪检测发现，该细胞系表面分子CD105、CD44、CD73和CD90表达丰富；而其他分子如CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR表达阴性。茜素


本文编号：3056435