采用AT方案新辅助化疗的Luminal A型乳腺癌患者血浆外泌体microRNA特征研究

发布时间：2021-03-18 20:39

　　背景外泌体（exosome）为细胞膜或多囊泡胞内体与细胞膜融合过程中所产生的分子直径30～100nm的小囊泡,在真核生物的血液、尿液和唾液等多种甚至全部体液中广泛分布。近年来针对外泌体及其所含microRNA（miRNA）的研究发现,其与乳腺癌的发病及预后关系密切,并且可能在乳腺癌的早期诊断和临床评估中发挥重要作用。截至目前,已有大量针对乳腺癌细胞外泌体miRNA的研究发现其异常表达与肿瘤的发展阶段和耐药性息息相关。遗憾的是,大多数研究都在细胞系中进行,其miRNA的变化并不能完全代表患者体内miRNA水平的波动。此外由于外泌体的研究是近年来新兴的热点,受制于样本数量及实验规模,目前多数的研究仍基于既往血浆或病理组织中的结果展开。因此在本研究中,我们将直接针对乳腺癌患者血浆外泌体的研究,采用二代测序的方法对外泌体miRNA的调控网络进行全面、深入的分析,筛选其可能的核心靶点,并尝试建立与疗效、预后等临床事件的关联。目的1)探索不同方法提取外泌体miRNA的差异,构建有临床应用价值的实验方法;2)明确外泌体miRNA在新辅助化疗效果差异的Luminal A型乳腺癌患者中的不同表达水平以及... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：81 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

外泌体结构示意图

取的总ＲＮＡ样本进行片段选择，通过胶分离技术收集１７－３０ｎｔＡ?片段，富集后按照?ＴｒｕＳｅｑ?Ｓｍａｌｌ?ＲＮＡ?Ｓａｍｐｌｅ?Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ?Ｋｉｔ（Ｉｌｌｕ８）方法及流程进行。在分离得到的ＲＮＡ片段的两端分别连接上接成ｃＤＮＡ，进行ＰＣＲ扩增建立测序文库，具体如下。??（?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｏｒ??

图３小ＲＮＡ二代测序流程。（Ａ）为桥式扩增、ＤＮＡ簇生成的流程，（Ｂ）??为边合成边测序的原理示意。??７．数据过滤处理??对高通量测序结果所获得的原始测序序列（Ｒａｗ?Ｒｅａｄｓ）进行去接头、去低质量片??段等处理，以获得用于后续分析的目标序列（Ｃｌｅａｎ?Ｒｅａｄｓ）。数据过滤处理的具??体步骤包括：??１）去除测序质量较低的序列；??２）去除无法确定碱基信息的比例大于１０％的序列；??３）去除没有３＇接头的序列；??４）去除有５＇接头污染的序列；??５）去除没有插入片段的序列；??６）去除包含ｐｌｏｙＡ／Ｔ的序列（大部分连续的ｐｏｌｙＡ／Ｔ，可能来源于测序错误）；??

【参考文献】：
期刊论文
[1]外泌体及其在肿瘤诊疗中的意义[J]. 张敏,张晨光,丁卫.  生理科学进展. 2014(05)



本文编号：3088901