Livin在TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化中的作用及机制研究
发布时间：2021-04-02 06:02
目的:慢性肾脏疾病（Chronic kidney disease,CKD）是指各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍。慢性肾脏疾病不但病死率高,同时能够明显增加患者合并心血管疾病的风险,往往维持治疗需要巨额的经济支出。统计数据显示,慢性肾脏病发病率呈逐年增高的趋势,因此它已经成为备受关注的全球性公共健康问题之一。肾间质纤维化是CKD进展成为肾脏衰竭甚至终末期肾衰竭的重要病理表现。在导致肾间质纤维化的众多途径中,肾小管上皮细胞-间质转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）占据着重要的地位,转化生长因子beta1（Transforming growth factor beta,TGF-β1）被认为是能够导致肾小管EMT的最关键的促纤维化因子之一。而本文研究的Livin/BIRC7最初是在黑色素瘤中被发现,后被归类于凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族。Livin在正常高分化器官中少有表达,但在多种实体肿瘤中参与调控肿瘤的侵袭,转移和对化疗药物的耐药等生物学行为。而近期来相关的研究发现,Livin除...
【文章来源】： 周洁清 中国医科大学
【文章页数】：69 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
TGF-β诱导HK2细胞发生EMT
图 2 TGF-β 诱导 HK2 细胞发生 EMT图 2A：2ng/ml TGF-β1 刺激 HK2 细胞 48h 细胞形态的变化(x200)。图 2B：2ng/ml TGF-β1 刺激 48h，E-ca、α-SMA 及 vim 的蛋白表达变化。图 2C：2ng/ml TGF-β1 刺激 48h，检测 E-ca、α-SMA 及 vim 蛋白表达及分布的影响（免疫荧光×200）。图 2D：2ng/ml TGF-β1 刺激 48h，qPCR 检测 TGF-β1 处理组 E-ca 的 mRNA 表达下降，*P＜0.05，α-SMA 和 vim 的 mRNA 表达增高，**P＜0.01。图 2E：2ng/ml TGFβ1 刺激 48 小时细胞迁移能力的变化，组间比较差异具有统计学意义，**P＜0.01（×100）。注：con 代表对照组；TGF-β1 代表用 2ng/ml TGF-β1 刺激 HK2 细胞 48 小时组，与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。3.5 TGF-β1 诱导 HK2 细胞的 Livin 蛋白及 mRNA 的表达
1 诱导 HK2 细胞形态改变的结果及 Livin 蛋白表达水平的改变，选择 TGF-β1ng/ml 刺激 HK2 细胞 48 小时为本实验的条件，见图 3A。免疫荧光结果显示，照组 HK2 细胞中细胞浆及细胞核中有极少量的 Livin 蛋白表达，经 2ng/mlGF-β1 刺激 HK2 细胞 48 小时后，HK2 细胞中 Livin 蛋白的表达量明显升高，在细胞浆及细胞核中均有表达升高，见图 3B。.5.2 TGF-β1 诱导 HK2 细胞 Livin 的 mRNA 表达qPCR 结果显示正常对照组 HK-2 细胞中 Livin 的 mRNA 表达水平很低，GF-β1 作用后 Livin 的 mRNA 表达量呈增多趋势。使用不同浓度梯度的 TGF-1（0ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml 及 10ng/ml）作用细胞 48h，结果显示GF-β1 浓度为 2ng/ml 时 Livin 的 mRNA 表达即有明显的升高，具有统计学差(P<0.05)。Livin 的 mRNA 表达水平基本与 Livin 蛋白表达趋势一致。见图C。
本文编号：3114734
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【学位级别】：博士
【部分图文】：
TGF-β诱导HK2细胞发生EMT
图 2 TGF-β 诱导 HK2 细胞发生 EMT图 2A：2ng/ml TGF-β1 刺激 HK2 细胞 48h 细胞形态的变化(x200)。图 2B：2ng/ml TGF-β1 刺激 48h，E-ca、α-SMA 及 vim 的蛋白表达变化。图 2C：2ng/ml TGF-β1 刺激 48h，检测 E-ca、α-SMA 及 vim 蛋白表达及分布的影响（免疫荧光×200）。图 2D：2ng/ml TGF-β1 刺激 48h，qPCR 检测 TGF-β1 处理组 E-ca 的 mRNA 表达下降，*P＜0.05，α-SMA 和 vim 的 mRNA 表达增高，**P＜0.01。图 2E：2ng/ml TGFβ1 刺激 48 小时细胞迁移能力的变化，组间比较差异具有统计学意义，**P＜0.01（×100）。注：con 代表对照组；TGF-β1 代表用 2ng/ml TGF-β1 刺激 HK2 细胞 48 小时组，与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。3.5 TGF-β1 诱导 HK2 细胞的 Livin 蛋白及 mRNA 的表达
1 诱导 HK2 细胞形态改变的结果及 Livin 蛋白表达水平的改变，选择 TGF-β1ng/ml 刺激 HK2 细胞 48 小时为本实验的条件，见图 3A。免疫荧光结果显示，照组 HK2 细胞中细胞浆及细胞核中有极少量的 Livin 蛋白表达，经 2ng/mlGF-β1 刺激 HK2 细胞 48 小时后，HK2 细胞中 Livin 蛋白的表达量明显升高，在细胞浆及细胞核中均有表达升高，见图 3B。.5.2 TGF-β1 诱导 HK2 细胞 Livin 的 mRNA 表达qPCR 结果显示正常对照组 HK-2 细胞中 Livin 的 mRNA 表达水平很低，GF-β1 作用后 Livin 的 mRNA 表达量呈增多趋势。使用不同浓度梯度的 TGF-1（0ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml 及 10ng/ml）作用细胞 48h，结果显示GF-β1 浓度为 2ng/ml 时 Livin 的 mRNA 表达即有明显的升高，具有统计学差(P<0.05)。Livin 的 mRNA 表达水平基本与 Livin 蛋白表达趋势一致。见图C。
本文编号：3114734
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