Sigma-1受体对N型钙通道的负性调节作用及其机制研究
发布时间：2021-04-08 06:49
Sigma受体是具有伴侣蛋白活性的一类受体蛋白。鉴于其与其他哺乳动物蛋白没有同源性以及与其他受体相比所具有的独特的生理功能,现在也被认为是一类孤儿受体。目前认为Sigma受体家族包括两个亚型,一个亚型为Sigma-1受体,另一个亚型为Sigma-2受体。由于到现在为止,还未获得Sigma-2受体的克隆,也不清楚其氨基酸序列和结构,所以对它的研究比较少也比较滞后,研究重点一般集中在Sigma-1受体。Sigma-1受体主要聚集于细胞内质网,并广泛分布在MAM膜、细胞膜以及核膜等细胞膜系统上。经过研究人员对该受体将近40年的研究,尤其在获得Sigma-1受体的克隆及Sigma-1受体敲除鼠后,我们对其在结构和功能上的认识越来越清晰。Sigma-1受体是包含223个氨基酸的一条蛋白质单链,其分子量大小约为26 k Da。之前大多数研究认为Sigma-1受体包括两个跨膜结构域,且N端和C端均位于膜内侧。而在2016年,对人源Sigma-1受体的晶体结构解析结果表明,Sigma-1受体是以寡聚体（一般是三聚体）形式存在的一类单次跨膜蛋白,其N端在膜外,C端则位于膜内侧。在其功能方面,Sigma-...
【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市
【文章页数】：87 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
ChIs中Sigma-1受体与N型钙通道的表达
第 1 章 Sigma-1 受体在 ChIs 上对钙离子通道的调节作用of ChAT, Sigma-1 receptor and 1A-C in ChIs by scRT-PCR. The 1B subunit ofN-type Ca2+channel was found in 92.1% detected cells.3.2 免疫荧光染色为了从蛋白水平证实 Sigma-1 受体的表达，我们在 5 m 连续切片上进行免疫荧光染色，由于是连续切片，荧光显示的细胞形态并不完全相同，从细胞的相对位置我们可以看出箭头标示出的细胞确实来源于同一个神经元。实验结果见图1-2，其中 ChAT 染色结果以红色荧光表示，表明这些神经元是 ChIs；绿色荧光代表对 Sigma-1 受体的染色结果。对结果进行分析比较，可以确定 Sigma-1 受体在蛋白水平上在背侧纹状体内的 ChIs 中有表达。
图 2-1 N 型钙通道以及 Sigma-1 受体在爪蟾卵母细胞上的表达。(A) 上图：向卵母细胞中注射 N 型钙通道 cRNA 后记录到的 N 型钙电流；下图：记录被 0.2 μM的 CTX 阻断后的 N 型钙电流。表明 N 型钙通道已在卵母细胞中成功表达。(B)A图中所记录到的电流的I-V曲线。(C) 注射了Sigma-1受体cRNA的卵母细胞 (以“+”表示，第一泳道) 与空白细胞 (以“-”表示，中间三条泳道) 的全蛋白 WesternBlot 实验结果，该结果表明 Sigma-1 受体已在卵母细胞中成功表达。最后一条泳道为蛋白 Marker。Fig 2-1 Expression of N-type Ca2+channel and Sigma-1 receptor in xenopus oocytes.(A) Upper panel: the current of N-type Ca2+channel recorded in oocytes aftermicroinjection with N-type Ca2+channel cRNA. Lower panel: the current wasblocked by N-type Ca2+channel blocker CTX (0.2 μM). (B) I-V plot of the recordedN-type Ca2+channel current in Figure 3A. (C) Schematic Western blot strap ofoocytes injected with Sigma-1 cRNA (the first lane) and control group (the middlethree lanes), which indicated the Sigma-1 receptor expressed successfully. The last
本文编号：3125068
【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市
【文章页数】：87 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
ChIs中Sigma-1受体与N型钙通道的表达
第 1 章 Sigma-1 受体在 ChIs 上对钙离子通道的调节作用of ChAT, Sigma-1 receptor and 1A-C in ChIs by scRT-PCR. The 1B subunit ofN-type Ca2+channel was found in 92.1% detected cells.3.2 免疫荧光染色为了从蛋白水平证实 Sigma-1 受体的表达，我们在 5 m 连续切片上进行免疫荧光染色，由于是连续切片，荧光显示的细胞形态并不完全相同，从细胞的相对位置我们可以看出箭头标示出的细胞确实来源于同一个神经元。实验结果见图1-2，其中 ChAT 染色结果以红色荧光表示，表明这些神经元是 ChIs；绿色荧光代表对 Sigma-1 受体的染色结果。对结果进行分析比较，可以确定 Sigma-1 受体在蛋白水平上在背侧纹状体内的 ChIs 中有表达。
图 2-1 N 型钙通道以及 Sigma-1 受体在爪蟾卵母细胞上的表达。(A) 上图：向卵母细胞中注射 N 型钙通道 cRNA 后记录到的 N 型钙电流；下图：记录被 0.2 μM的 CTX 阻断后的 N 型钙电流。表明 N 型钙通道已在卵母细胞中成功表达。(B)A图中所记录到的电流的I-V曲线。(C) 注射了Sigma-1受体cRNA的卵母细胞 (以“+”表示，第一泳道) 与空白细胞 (以“-”表示，中间三条泳道) 的全蛋白 WesternBlot 实验结果，该结果表明 Sigma-1 受体已在卵母细胞中成功表达。最后一条泳道为蛋白 Marker。Fig 2-1 Expression of N-type Ca2+channel and Sigma-1 receptor in xenopus oocytes.(A) Upper panel: the current of N-type Ca2+channel recorded in oocytes aftermicroinjection with N-type Ca2+channel cRNA. Lower panel: the current wasblocked by N-type Ca2+channel blocker CTX (0.2 μM). (B) I-V plot of the recordedN-type Ca2+channel current in Figure 3A. (C) Schematic Western blot strap ofoocytes injected with Sigma-1 cRNA (the first lane) and control group (the middlethree lanes), which indicated the Sigma-1 receptor expressed successfully. The last
本文编号：3125068
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