小鼠应对巴贝虫感染的蛋白调节分子机制

发布时间：2021-05-12 04:55

　　巴贝虫病是由巴贝虫（Babesia）引起的一种血液原虫病。全世界报道每年由巴贝虫病造成的损失高达数亿美元。哺乳动物是巴贝虫的中间宿主,蜱类是巴贝虫的终末宿主。近些年,新发巴贝虫病例报道越来越多,已对人类健康和畜牧业发展构成了新的威胁。巴贝虫主要寄生于哺乳动物的红细胞内,通过硬蜱的吸血活动使得其在哺乳动物间或人与哺乳动物间传播。患巴贝虫病的宿主会出现高热、贫血等症状,这是巴贝虫与宿主间相互拮抗的结果。虽然巴贝虫在发病时对宿主危害严重,但部分宿主能够通过快速免疫系统的激活来抵御并清除巴贝虫而恢复健康。目前宿主的这种自身免疫调控机制尚不清楚。本研究利用基于DIA的定量和修饰蛋白质组学技术研究BALB/c小鼠感染巴贝虫后脾脏、心脏和血液蛋白质组表达和磷酸化修饰的动态变化,找到疾病发生发展过程中的关键蛋白,作为疾病诊断标志物或治疗的靶分子,为巴贝虫预防、检测和治疗研究提供新的线索和依据。1.通过对巴贝虫感染小鼠不同时期脾脏组织病理学观察,发现感染高峰期脾脏结构破坏严重;感染后期脾脏组织可见棕褐色色素颗粒及较多虫体沉积。超微病理学观察显示,感染高峰期吞噬体及溶酶体数量最多,线粒体肿胀,嵴消失。感染... 

【文章来源】：河北师范大学河北省

【文章页数】：155 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一篇 文献综述
    第一章 巴贝虫及巴贝虫病
        1.1 巴贝虫病原学
        1.2 巴贝虫病的流行病学
        1.3 巴贝虫致病机理
        1.4 巴贝虫病的临床症状
        1.5 巴贝虫病的诊断和治疗
        1.6 巴贝虫免疫学
    第二章 蛋白质组学概述
        2.1 蛋白质组概念
        2.2 蛋白质组学相关技术
            2.2.1 蛋白质分离技术
                2.2.1.1 双向凝胶电泳技术
                2.2.1.2 色谱
            2.2.2 蛋白质鉴定技术
                2.2.2.1 质谱技术
                2.2.2.2 蛋白芯片
        2.3 修饰蛋白质组学主要技术
        2.4 定量蛋白质组学
        2.5 生物信息学分析
        2.6 疟原虫侵染造成宿主蛋白质组变化
        2.7 巴贝虫侵染造成宿主蛋白质组变化
    第三章 本研究的目的和意义
第二篇 实验研究
    第一章 巴贝虫的感染对小鼠脾脏病理变化及免疫功能的影响
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验动物及实验虫株
            1.1.2 实验试剂
            1.1.3 实验仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 巴贝虫的复苏
            1.2.2 巴贝虫感染小鼠模型建立
            1.2.3 血清提取
            1.2.4 脾脏病理组织学观察
            1.2.5 脾脏超微病理学观察
            1.2.6 淋巴细胞亚群分化水平检测
            1.2.7 细胞因子水平检测
        1.3 数据处理
        1.4 实验结果
            1.4.1 脾脏病理组织学观察
            1.4.2 脾脏超微病理学观察
            1.4.3 淋巴细胞亚群分化水平检测
            1.4.4 血清细胞因子水平检测
        1.5 讨论
    第二章 蛋白质组学分析巴贝虫的感染对小鼠脾脏蛋白表达的影响
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物及实验虫株
            2.1.2 实验试剂
            2.1.3 实验仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 巴贝虫的复苏
            2.2.2 巴贝虫感染小鼠模型建立
            2.2.3 脾脏总蛋白的提取
            2.2.4 蛋白酶解
            2.2.5 高pH高效液相色谱(HPLC)的样品分级分离
            2.2.6 DDA建库
            2.2.7 DIA质谱分析
            2.2.8 蛋白质的DIA鉴定与数据分析
            2.2.9 生物信息学分析
        2.3 实验结果
            2.3.1 蛋白质鉴定
            2.3.2 Cluster聚类分析
            2.3.3 GO功能注释与分析
            2.3.4 KEGG通路分析
        2.4 讨论
    第三章 巴贝虫不同感染时期小鼠脾脏磷酸化蛋白的定量分析
        3.1 实验材料
            3.1.1 实验动物及实验虫株
            3.1.2 实验试剂
            3.1.3 实验仪器
        3.2 实验方法
            3.2.1 巴贝虫的复苏
            3.2.2 巴贝虫感染小鼠模型建立
            3.2.3 脾脏总蛋白的提取
            3.2.4 蛋白酶解
            3.2.5 TiO_2 法富集磷酸化肽段
            3.2.6 高pH高效液相色谱(HPLC)的样品分级分离
            3.2.7 DDA建库
            3.2.8 DIA质谱分析
            3.2.9 蛋白质的DIA鉴定与数据分析
            3.2.10 生物信息学分析
        3.3 实验结果
            3.3.1 磷酸化肽段定量结果
            3.3.2 Cluster聚类分析
            3.3.3 GO功能注释与分析
            3.3.4 KEGG通路分析
        3.4 讨论
    第四章 蛋白质组学分析巴贝虫的感染对小鼠心脏蛋白表达的影响
        4.1 实验材料
            4.1.1 实验动物及实验虫株
            4.1.2 实验试剂
            4.1.3 实验仪器
        4.2 实验方法
            4.2.1 巴贝虫的复苏
            4.2.2 巴贝虫感染小鼠模型建立
            4.2.3 心脏总蛋白的提取
            4.2.4 蛋白酶解
            4.2.5 高pH高效液相色谱(HPLC)的样品分级分离
            4.2.6 DDA建库
            4.2.7 DIA质谱分析
            4.2.8 蛋白质的DIA鉴定与数据分析
            4.2.9 生物信息学分析
        4.3 实验结果
            4.3.1 蛋白质鉴定
            4.3.2 Cluster聚类分析
            4.3.3 GO功能注释与分析
            4.3.5 KEGG通路分析
        4.4 讨论
    第五章 巴贝虫不同感染时期小鼠心脏磷酸化蛋白的定量分析
        5.1 实验材料
            5.1.1 实验动物及实验虫株
            5.1.2 实验试剂
            5.1.3 实验仪器
        5.2 实验方法
            5.2.1 巴贝虫的复苏
            5.2.2 巴贝虫感染小鼠模型建立
            5.2.3 心脏总蛋白的提取
            5.2.4 蛋白酶解
            5.2.5 TiO_2 法富集磷酸化肽段
            5.2.6 高pH高效液相色谱(HPLC)的样品分级分离
            5.2.7 DDA建库
            5.2.8 DIA质谱分析
            5.2.9 蛋白质的DIA鉴定与数据分析
            5.2.10 生物信息学分析
        5.3 实验结果
            5.3.1 磷酸化肽段定量结果
            5.3.2 Cluster聚类分析
            5.3.3 GO功能注释与分析
            5.3.4 KEGG通路分析
        5.4 讨论
    第六章 蛋白质组学分析巴贝虫感染对小鼠血清蛋白表达的影响
        6.1 实验材料
            6.1.1 实验动物及实验虫株
            6.1.2 实验试剂
            6.1.3 实验仪器
        6.2 实验方法
            6.2.1 巴贝虫的复苏
            6.2.2 巴贝虫感染小鼠模型建立
            6.2.3 血清提取
            6.2.4 蛋白提取
            6.2.5 酶解
            6.2.6 脱盐
            6.2.7 高pH高效液相色谱(HPLC)的样品分级分离
            6.2.8 DDA建库
            6.2.9 DIA质谱分析
            6.2.10 蛋白质的DIA鉴定与数据分析
            6.2.11 生物信息学分析
        6.3 实验结果
            6.3.1 感染早期和恢复期蛋白变化
            6.3.2 差异表达蛋白GO功能注释与分析
            6.3.3 差异表达蛋白KEGG分析
            6.3.4 蛋白质互作分析
        6.4 讨论
    第七章 全文总结
参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3182773