成人T细胞白血病中Notch1信号通路的激活机制与功能研究

发布时间：2021-05-16 07:01

　　成人T细胞白血病（Adult T-cell leukemia/lymphoma,ATL）是一种由感染人类T淋巴细胞白血病I型病毒（Human T-lymphotropic virus 1,HTLV-1）诱发的恶性淋巴系增殖性疾病。Notch1信号通路是一条在进化上极为保守的信号通路,该信号通路能够反复调控细胞增殖、分化、凋亡等生命进程。有报道称Notch1信号通路在ATL中存在异常活化,但迄今尚未对其活化机制进行深入的研究。本文对HTLV-1病毒感染与ATL中Notch1信号通路异常活化之间的关系展开一系列研究,并获得相关实验数据如下:1.本研究首次发现HTLV-1感染激活Notch1信号通路:研究发现ATL细胞系中功能性Notch1（Notch1 intracellular domain,NICD1）及Notch1信号通路下游基因HES1的表达水平偏高;同时,还发现HTLV-1感染会引起NICD1高表达,进而诱导Notch下游基因HES1的高表达,实现对Notch信号通路的活化作用。2.证明Tax是HTLV-1激活Notch信号通路的关键病毒蛋白:采用报告基因技术筛选HBZ和Tax对... 

【文章来源】：华侨大学福建省

【文章页数】：131 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第1章 引言
    1.1 人类T淋巴细胞白血病I型病毒简介
        1.1.1 HTLV-1 感染流行病学
        1.1.2 HTLV-1 相关性疾病及其治疗方法
        1.1.3 HTLV-1 病毒颗粒概况
        1.1.4 HTLV-1 基因组结构及其功能
        1.1.5 HTLV-1 基因表达调控
    1.2 Tax蛋白研究进展
        1.2.1 Tax蛋白概述
        1.2.2 Tax蛋白结构
        1.2.3 Tax蛋白功能
    1.3 Notch信号通路
        1.3.1 Notch信号通路组成
        1.3.2 Notch信号转录激活
        1.3.3 病毒与Notch信号通路的关系
    1.4 本研究的目的及意义
第2章 HTLV-1 激活Notch1 信号通路
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 菌株
        2.1.3 质粒
        2.1.4 主要试剂
        2.1.5 抗体
        2.1.6 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养与冻存
        2.2.2 E?coli DH5α感受态的制备
        2.2.3 报告基因质粒构建
        2.2.4 碱裂解法大量提取质粒
        2.2.5 贴壁细胞转染
        2.2.6 Trizol法提取总RNA提取
        2.2.7 c DNA合成
        2.2.8 Real-time PCR
        2.2.9 Western blot
        2.2.10 双荧光素酶报告基因检测系统
    2.3 实验结果
        2.3.1 NICD1在ATL细胞中高表达
        2.3.2 HTLV-1 病毒促进NICD1蛋白高表达
        2.3.3 HES1在ATL细胞中高表达
        2.3.4 HTLV-1 病毒激活Notch1信号通路
    2.4 结果分析与讨论
第3章 HTLV-1 编码的Tax激活Notch1信号通路
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 菌株
        3.1.3 质粒
        3.1.4 主要试剂药品
        3.1.5 抗体
        3.1.6 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 Cd Cl2诱导JPX9细胞表达Tax
        3.2.2 碱裂解法大量提取质粒
        3.2.3 悬浮细胞转染
        3.2.4 报告基因实验
        3.2.5 Real-time PCR
        3.2.6 Western blot
    3.3 实验结果
        3.3.1 HBZ不激活Notch1信号通路
        3.3.2 Tax激活Notch信号通路
    3.4 结果分析与讨论
第4章 Tax通过NICD1激活Notch1信号通路
    4.1 实验材料
        4.1.1 细胞株
        4.1.2 菌株
        4.1.3 质粒
        4.1.4 主要试剂
        4.1.5 抗体
        4.1.6 主要仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养与冻存
        4.2.2 h NICD1表达载体及其突变体构建
        4.2.3 质粒转染
        4.2.4 报告基因实验
        4.2.5 Real-time PCR
        4.2.6 Western blot
        4.2.7 染色质免疫共沉淀
        4.2.8 免疫荧光
        4.2.9 免疫共沉淀
    4.3 实验结果
        4.3.1 Tax延长NICD1的半衰期
        4.3.2 Tax增强NICD1与CSL响应元件的结合能力
        4.3.3 Tax与NICD1相互结合
    4.4 结果分析与讨论
第5章 RBP-Jκ 参与Tax对Notch1信号通路的调控
    5.1 实验材料
        5.1.1 细胞株
        5.1.2 菌株
        5.1.3 质粒
        5.1.4 主要试剂
        5.1.5 抗体
        5.1.6 主要仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 h RBP-Jκ 表达载体构建
        5.2.2 质粒转染
        5.2.3 双荧光素酶报告基因检测系统
        5.2.4 染色质免疫共沉淀
        5.2.5 免疫共沉淀
    5.3 实验结果
        5.3.1 RBP-Jκ 与NICD1、Tax形成三聚体
        5.3.2 Tax/NICD1/RBP-Jκ 三聚体与CSL响应元件结合
        5.3.3 RBP-Jκ 促进Tax-NICD1介导的转录激活作用
    5.4 结果分析与讨论
第6章 Notch1信号通路促使ATL发生
    6.1 实验材料
        6.1.1 细胞株
        6.1.2 菌株
        6.1.3 质粒
        6.1.4 主要试剂
        6.1.5 主要仪器
    6.2 实验方法
        6.2.1 p LKO.1-puro-sh Notch1载体构建
        6.2.2 sh Notch1稳定株构建
        6.2.3 细胞活力检测
        6.2.4 Trans-well迁移实验
        6.2.5 动物实验
    6.3 实验结果
        6.3.1 Notch1沉默效率检测
        6.3.2 沉默Notch1抑制细胞增殖
        6.3.3 沉默Notch1抑制MT-2 细胞迁移
        6.3.4 沉默Notch1抑制体内肿瘤形成
    6.4 结果分析与讨论
第7章 结论与展望
    7.1 结论
    7.2 展望
参考文献
致谢
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果
    个人简历
    发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of post-translational modifications of HTLV-1 Tax in NF-κB activation[J]. Noula Shembade,Edward W Harhaj.  World Journal of Biological Chemistry. 2010(01)



本文编号：3189216