TOP2靶向化疗药物促进TOP2β泛素化降解的分子机制及生理意义研究

发布时间：2021-05-18 04:46

　　DNA拓扑异构酶Ⅱ（TOP2）作为一种复杂的分子机器,它在RNA的转录、DNA的复制以及染色体的压缩和解凝等细胞基础活动中通过短暂的剪切双链DNA并在原位重新连接断端的方式,松弛、解螺旋DNA双链来调整DNA的拓扑结构,是细胞生长存活必不可少的酶类。针对TOP2的这一特性已开发出了多种干扰细胞增殖的药物,比如临床上广泛使用的TOP2靶向化疗药物替尼泊苷（VM-26）、依托泊苷（VP-16）和阿霉素（DOX）等。这类药物通过抑制TOP2的DNA再连接活性,增加并稳定TOP2-DNA共价复合物（TOP2ccs）,从而导致肿瘤细胞死亡,因此也被称为TOP2毒药。目前研究表明与DNA形成共价复合物的TOP2会被26S蛋白酶体降解,从而暴露出隐藏在TOP2ccs复合物中的DNA双链断裂（DSBs）,触发DNA损伤反应;如果这些DSBs不能正确修复则会导致基因组的不稳定性以及染色体重排。临床上用这类药物治疗的患者,常常会产生复发性的恶性肿瘤和心脏毒性也正是因为这个原因。在人类基因组上编码了两种类型的TOP2分别为TOP2α和TOP2β,有研究表明TOP2α是介导TOP2毒药细胞毒性的亚型,而TOP... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：114 页

【学位级别】：博士

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致谢
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缩略词表
1引言
    1.1 泛素-蛋白酶体系统
    1.2 DNA拓扑异构酶Ⅱ的结构和功能
    1.3 靶向TOP2抗肿瘤药物的作用机制
    1.4 本研究的创新性和意义
2 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系与菌株
        2.1.2 质粒、siRNA及sgRNA
        2.1.3 重要化合物
        2.1.4 抗体
        2.1.5 实验设备
        2.1.6 试剂耗材
    2.2 实验步骤和方法
3 实验结果
    3.1 TOP2β是CRLE3s泛素连接酶的新底物
    3.2 SCFβ-TrCP通过泛素化修饰TOP2β调控其蛋白水平
    3.3 TOP2β的泛素化依赖于β-TrCP的降解基序
    3.4 ATM激酶磷酸化TOP2β并促进其降解
    3.5 CK1激酶磷酸化TOP2β并促进其降解
    3.6 SCFβ-TrCP的失活抑制TOP2β的降解而降低DNA损伤应答反应
    3.7 TOP2β降解受抑制促进细胞凋亡并增敏肿瘤细胞对V M-26 的应答
4 讨论和展望
5 参考文献
6 附录常用试剂及其配方
综述 泛素化和SUMO化介导调控拓扑异构酶Ⅱ-DNA剪切复合物水平的研究进展
    参考文献
作者简历及在读期间所取得的科研成果



本文编号：3193139