氯沙坦减轻间断性缺氧诱导的大鼠肾小管周毛细血管丧失和肾脏纤维化机制的研究

发布时间：2021-05-24 18:01

　　背景:阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）是最常见的睡眠呼吸紊乱类型,慢性间断性缺氧（CIH）是OSA的主要病理生理特征。近年来研究发现,单纯的OSA是慢性肾脏病（CKD）的独立危险因素。肾小管周毛细血管（PTC）丧失和肾脏纤维化是CKD的主要特征。大量的研究表明,血管紧张素II受体阻滞剂（ARBs）除了降低血压外,还具有减少PTC丧失,减轻肾脏细胞凋亡、抑制肾纤维化,延缓CKD进展的作用。但CIH诱导PTC丧失和肾脏纤维化的分子机制及氯沙坦（losartan）的肾脏保护作用尚不完全清楚。目的:本课题通过OSA动物模型研究CIH诱导PTC丧失和肾脏纤维化的病理机制,并了解氯沙坦干预对CIH肾脏损害的保护作用。进一步通过间断性缺氧（IH）细胞实验,初步探讨IH对肾小管上皮细胞（TEC）的损害及氯沙坦的干预作用。本研究内容分为三部分,第一部分探讨CIH诱导大鼠PTC丧失的机制及氯沙坦的保护作用。第二部分研究氯沙坦对CIH诱导的大鼠TEC凋亡、肾小管上皮细胞-间充质转分化（EMT）、肾脏纤维化的干预作用;第三部分为IH对人近端肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡和损伤的影响及氯沙坦干预的体外研究。方法:第... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
常用缩略词中引文对照表
第一部分 前言
    1.阻塞性睡眠呼吸暂停和慢性肾脏疾病概述
    2.OSA和 CKD的发病情况
    3.OSA与 CKD的临床特点
    4.OSA导致CKD的病理机制
        4.1 直接途径-缺氧
        4.2 间接途径
            4.2.1 RAAS激活
            4.2.2 交感神经兴奋性增强
            4.2.3 氧化应激
            4.2.4 高血压
            4.2.5 内皮功能紊乱和动脉粥样硬化
    5.CKD导致OSA的病理机制
        5.1 上气道狭窄
        5.2 化学感受性反射改变
第二部分 氯沙坦通过调节肾脏肾素-血管紧张素系统和血管生成因子减轻慢性间断性缺氧诱导的大鼠肾小管周毛细血管丧失
    1.前言
    2.材料与方法
        2.1 主要实验仪器
        2.2 主要试剂与耗材
        2.3 主要实验试剂配制
        2.4 动物分组及间断性缺氧设备
            2.4.1 动物来源
            2.4.2 动物分组
            2.4.3 间断性缺氧设备
        2.5 慢性间断性缺氧实验
        2.6 实验标本采集
        2.7 肾脏功能检测
        2.8 肾脏病理学检查
            2.8.1 苏木精-伊红(HE)染色
            2.8.2 免疫组化检测大鼠肾脏CD34、HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-表达
            2.8.3 透射电镜检查
        2.9 酶联免疫吸附测定法检测大鼠肾脏AngII的水平
        2.10 RT-qPCR检测大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1mRNA表达
            2.10.1 TRIzol法提取RNA
            2.10.2 检测RNA浓度
            2.10.3 RNA反转录成c DNA
            2.10.4 RT-qPCR反应
            2.10.5 结果分析
        2.11 免疫印迹试验检测大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1 蛋白表达
            2.11.1 肾脏蛋白提取
            2.11.2 BCA法检测蛋白质浓度
            2.11.3 SDD-PAGE电泳
            2.11.4 转模
            2.11.5 封闭
            2.11.6 一抗孵育
            2.11.7 二抗孵育
            2.11.8 曝光
            2.11.9 蛋白表达检测
    3.统计学分析
    4.结果
        4.1 CIH和氯沙坦对大鼠体重和肾脏功能的影响
        4.2 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠TEC损伤
        4.3 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠TEC超微结构损伤
        4.4 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠PTC超微结构损害
        4.5 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠PTC丧失
        4.6 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏HIF-1α表达
        4.7 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏RAS激活
            4.7.1 氯沙坦降低CIH诱导的大鼠肾脏Ang II水平
            4.7.2 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏AT1R表达
        4.8 氯沙坦调节CIH诱导的大鼠肾脏血管生成因子失衡
        4.9 氯沙坦下调CIH诱导的大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1mRNA表达
        4.10 免疫印迹试验证实氯沙坦下调CIH诱导的大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1 蛋白表达
    5.讨论
第三部分 氯沙坦通过抑制肾小管上皮细胞凋亡和上皮细胞-间充质转化减轻CIH诱导的大鼠肾脏纤维化
    1.前言
    2.材料与方法
        2.1 大鼠肾脏Masson染色
        2.2 大鼠肾脏天狼猩红染色
        2.3 TUNEL法检测大鼠肾小管上皮细胞凋亡
        2.4 免疫组化检测大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA表达
        2.5 RT-qPCR检测大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA mRNA表达
        2.6 免疫印迹试验检测大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA蛋白表达
    3.统计学分析
    4.结果
        4.1 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏纤维化
        4.2 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏肾小管上皮细胞凋亡
        4.3 氯沙坦调节大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3 表达
        4.4 氯沙坦降低CIH诱导的大鼠肾脏TGF-β1、CTGF表达
        4.5 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾小管上皮细胞EMT
        4.6 氯沙坦调节CIH诱导的大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达
        4.7 氯沙坦调节CIH诱导的大鼠肾脏TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMAmRNA表达
        4.8 免疫印迹试验检测氯沙坦对CIH诱导的大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达的影响
        4.9 免疫印迹试验检测氯沙坦对CIH诱导的大鼠肾脏TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA蛋白表达的影响
    5.讨论
第四部分 :氯沙坦减轻间断性缺氧诱导的肾小管上皮细胞凋亡的体外实验研究
    1.前言
    2.材料和方法
        2.1 细胞
        2.2 主要实验仪器
        2.3 主要试剂与耗材
        2.4 主要试剂的配制
        2.5 细胞复苏
        2.6 细胞传代
        2.7 细胞计数
        2.8 细胞冻存
        2.9 实验分组及IH模型暴露细胞
        2.10 倒置显微镜观察HK-2细胞形态
        2.11 MTT法检测细胞存活
        2.12 流式细胞术定量检测细胞凋亡
        2.13 RT-qPCR检测HK-2 细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达
        2.14 免疫印迹试验检测HK-2 细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达
    3.统计学分析
    4.结果
        4.1 各组HK-2细胞形态学改变
        4.2 氯沙坦减轻IH诱导的HK-2细胞活性降低
        4.3 氯沙坦抑制IH诱导的HK-2细胞凋亡
        4.4 氯沙坦调节IH诱导的HK-2 细胞Bcl-2、Bax和 Caspase-3 mRNA表达
        4.5 氯沙坦调节IH诱导的HK-2 细胞Bcl-2、Bax和 Caspase-3 蛋白表达
    5.讨论
结论
参考文献
在学期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]我国慢性肾脏病防治政策及策略研究——基于卫生经济学视角[J]. 杜晔,孟群.  中国卫生政策研究. 2018(07)
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[3]上海市慢性肾脏病三级防治体系优势及推广意义[J]. 王九生,石锦浩,徐波,邬碧波,顾春英,梅长林.  第二军医大学学报. 2018(01)
[4]打造我国睡眠呼吸暂停分级医疗体系[J]. 何权瀛.  医学研究杂志. 2017(03)
[5]肾脏缺血再灌注损伤的分子机制[J]. 任冰霜,雷艳,黄梁浒.  实用医学杂志. 2016(10)
[6]血液透析患者的高血压管理[J]. 孙雪峰.  中国中西医结合肾病杂志. 2016(03)
[7]How tubular epithelial cells dictate the rate of renal fibrogenesis?[J]. Kevin Louis,Alexandre Hertig.  World Journal of Nephrology. 2015(03)
[8]慢性间歇性低氧对大鼠肾脏氧化应激损伤及HIF-1α表达的影响[J]. 李婷,李秀翠,梁冬施,温正旺,梅红芳,曹红超,苏苗赏,蔡晓红.  中国病理生理杂志. 2015(02)
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[10]马兜铃酸致肾小管周围毛细血管丢失的体内实验研究[J]. 刘圆圆,李艺,王帅,官涛,郑科,黄云剑.  第三军医大学学报. 2014(06)

博士论文
[1]OSAHS动物模型的建立及对老年冠心病预后的研究[D]. 杨宇.中南大学 2006
[2]缺氧对瘢痕成纤维细胞的生物学作用和瘢痕缺氧环境的变化及其机制[D]. 李高峰.中南大学 2004
[3]CTGF在介导肾脏肥大中的作用——体内外实验研究[D]. 刘必成.南京医科大学 2004



本文编号：3204616