BAG3通过稳定GLS促进自噬和谷氨酰胺代谢

发布时间：2021-05-26 15:30

　　目的:自噬是一种进化上保守的分解代谢过程,对维持细胞稳态起着十分重要的作用。多年来自噬被认为是一种随机过程,随着科学研究的不断深入,越来越多的研究表明自噬是一种受到严格控制的选择性的过程。代谢重编程是恶性肿瘤细胞的显著特征之一,细胞代谢的改变使肿瘤细胞能够维持其日益增长的能量需求。由于恶性增殖的肿瘤细胞,通常以糖酵解的方式获得能量,所以大多数的肿瘤代谢研究都集中在糖代谢方面。在快速增殖的肿瘤细胞中,谷氨酰胺被大量消耗,谷氨酰胺代谢替代“Warburg效应”产生ATP,为肿瘤细胞提供能量,谷氨酰胺代谢逐渐被人们所重视。谷氨酰胺代谢由谷氨酰胺酶（Glutaminase,GLS）催化脱氨开始,在线粒体中产生谷氨酸和氨。谷氨酰胺代谢发生在所有的增殖细胞中,在维持生物能量和为生物大分子合成提供氮、硫和碳骨架等方面发挥着关键作用。谷氨酰胺代谢在调节氧化还原平衡、mTOR信号传导等方面也起着重要的作用。此外,谷氨酰胺代谢是细胞氨的重要来源,它可诱导肿瘤细胞自噬。Bcl-2相关永生基因3（Bcl-2 associated athanogene,BAG3）是一种非常重要的分子,通过多种机制维持肿瘤细胞的... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
    1.1 自噬
    1.2 BAG3
    1.3 谷氨酰胺代谢与谷氨酰胺酶
    1.4 立题背景
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 慢病毒感染目的细胞
        2.2.2 总RNA提取与纯化
        2.2.3 反转录合成c DNA
        2.2.4 实时定量PCR(RT-qPCR)
        2.2.5 蛋白免疫印迹分析
        2.2.6 质粒提取
        2.2.7 转染
        2.2.8 免疫共沉淀
        2.2.9 In vivo泛素化检测
        2.2.10 谷氨酸生成测定
        2.2.11 氨测定
        2.2.12 谷氨酰胺消耗测定
        2.2.13 α-酮戊二酸分析测定
        2.2.14 透射电镜
        2.2.15 放线菌酮(CHX)法测定蛋白质稳定性
        2.2.16 荧光显微镜观察EGFP-LC3B自噬斑点的数量及分布
    2.3 数据分析
3 结果
    3.1 过表达BAG3诱导自噬
    3.2 过表达BAG3诱导自噬不依赖于Beclin1和PtdIns3K
    3.3 BAG3通过上调谷氨酰胺酶(GLS)促进自噬
    3.4 BAG3通过抑制GLS的蛋白酶体降解来稳定GLS
    3.5 过表达BAG3增加了GLS Lys158和Lys164 位点的琥珀酰化水平
    3.6 Lys158和Lys164 位点的琥珀酰化通过抑制Lys48 位的泛素化来稳定GLS
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Selective role of autophagy in neuronal function and neurodegenerative diseases[J]. Yan-Ning Rui,Weidong Le.  Neuroscience Bulletin. 2015(04)



本文编号：3206614