超声介导的基因转染靶向下调颈动脉体P2X3受体治疗高血压的实验研究

发布时间：2021-06-07 14:46

　　第一部分阳离子脂质微泡的制备及物理性能检测目的:制备表面电位为正电荷的阳离子脂质微泡（CMB）,检测其外观形态、稳定性、分散度、粒径、表面电位等基本物理特征,通过评价CMBs体内、外显影的能力及超声敏感性,探寻低强度聚焦超声（LIFU）的适宜工作参数,为制备载质粒的阳离子微泡及超声介导的基因转染提供实验基础。方法:使用薄膜水化-机械振荡法,用DPPC和SPEG-PEG2000加入DC-Chol制备阳离子脂质微泡,用C3F8气体替换微泡空气内核,同时制备DIO标记的阳离子脂质微泡用以更清晰观察微泡的表面物理特征。分别用光镜、透射电镜、激光共聚焦显微镜观察微泡的外观形态及分散性,用细胞计数板检测微泡浓度,马尔文仪器检测微泡的粒径和Zeta表面电位。制备3%琼脂糖凝胶,检测阳离子脂质微泡的体外显影能力,使用LIFU在不同工作参数及辐照时间观察微泡被完全击破的时间,探索LIFU的最适应工作条件。使用百盛超声仪的高频探头定位颈动脉体的位置,并静脉注射CMBs,通过观察颈总动脉增强超声影像评价其体内显影能力。结果:CMBs由脂质外壳、内含C3F8气体构成,外观呈高密度乳白色,形态稳定。光学显微镜及... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

CB外周化学反射示意图[5]

重庆医科大学博士研究生学位论文21等因素引起Ⅰ型细胞释放大量ATP，可作用于P2X3受体并将信号传递至岩神经元，兴奋交感和呼吸中枢（图2）[15]。在低氧动物模型中，使用P2X3受体抑制剂或P2X3基因敲除均可明显抑制交感中枢放电，降低低氧刺激所诱发的通气反应[16]。最新动物和临床前研究发现，在高血压和HF动物模型中的CBP2X3受体表达明显上调，CBI型细胞的P2X3受体表达水平与其活性及交感兴奋性程度密切相关[17，18]。当给予SHR不同浓度P2X3受体抑制剂时，CB的兴奋程度、交感神经系统活性及血压呈剂量相关性降低，但血压正常的大鼠则无此效应[17]。此外，该研究还进一步证实在高血压患者CB中P2X3受体同样处于高表达状态[17]。但是，P2X3受体广泛分布于人体不同组织器官，其活性与疼痛、咳嗽、膀胱功能等相关，发挥不同的生理作用，因而静脉使用P2X3受体抑制剂虽可使CB活性降低并降低血压，但不具靶器官特异性，可能导致疼痛反射减弱或膀胱功能不全等不良反应[19]。如应用AF-219治疗顽固性慢性咳嗽的临床试验发现症状控制同时出现味觉减退或丧失[20]。以上研究结果表明：P2X3受体是参与CB兴奋信号传递的关键受体之一，其表达水平与机体的CB和交感神经活性强度存在一定的量-效关系。因此，靶向下调CB的P2X3受体表达水平有望成为治疗高血压的新方法。图2CB细胞间神经及受体相互作用机制图[21]Figure2InteractionsbetweencellularelementsintheCB[21].(a)CarotidbifurcationandlocationoftheCB.(b)SchematicrepresentationofaCBglomerulus.Chemosensoryandchemoproliferativesynapsesareindicated.(c)Schematicrepresentationofthetripartitesynapse.CB,carotidbody.

微泡负载DNA示意


本文编号：3216779