多能干细胞分化再生T细胞的体内抗肿瘤评估及再生可移植髓系细胞研究
发布时间：2021-06-10 12:25
从多能干细胞诱导分化出可移植、有功能的血液及免疫细胞一直是再生医学领域的研究热点和难点。本文第一部分证明小鼠胚胎干细胞分化来源、体内成熟的T细胞可以结合CAR-T技术改造实现体内清除肿瘤的目的,第二部分初步实现诱导小鼠胚胎干细胞获得可移植的髓系祖细胞种子,移植后可在体内短期再生髓系细胞（包括粒细胞、单核-巨噬细胞）。本研究为再生T细胞以及可移植髓系细胞的转化研究提供了技术借鉴。嵌合抗原受体 T 细胞（Chimeric Antigen Receptor T cells,CAR-T）疗法已成为临床上治疗血液肿瘤的有效手段。通常CAR-T细胞是通过分离患者外周血来源的T细胞在体外进行基因编辑而制备,但是患者自身的T细胞数量有限且经常出现功能异常或耗竭,因此需要探索T细胞新的来源。本研究基于课题组已开发的定向诱导T细胞技术,利用Runx1-Hoxa9条件性表达的多能干细胞系诱导分化出可植入免疫缺陷鼠（B-NDG）的造血祖细胞（induced hematopoietic progenitorcells,iHPCs）,移植B-NDG小鼠5周后,从脾脏中分离出再生的T细胞（induced T cel...
【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１．１．１正在开发的７５３种细胞疗法的全球地理分布??图注：美国和中国分别以３４４种和２０３种细胞疗法引领着细胞疗法发展竞赛??
－ＤＬ１?基质细??胞共培养，采用造血分化培养基将ｉＨＥＣｓ诱导分化为可用于移植的诱导型造血??祖细胞（ｉｎｄｕｃｅｄ?ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ?ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ?ｃｅｌｌｓ，ｉＨＰＣｓ?）（Ｌｉｎ—ｃ－Ｋｉｔ＋ＣＤ?１２７＋／ＣＤ１３５＋）??（图?１．３．２）。??０?ＳＯＫ?１００Ｋ?１５０Ｋ?２００Ｋ?２６０Ｋ?０?１〇４?１〇５?－１〇３?〇?１〇３?１〇４?１〇Ｓ??ＦＳＣ－Ａ???ＣＤ４５－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５???ＣＤ２０１－ＰＥ????图１．３．１?ｉＲ９?ｍＥＳＣｓ多能干细胞定向诱导分化ｉＨＥＣｓ细胞ｄａｙ?１１流式分选图??图注：将ｉＲ９ｍＥＳＣｓ通过２．５天的倒置培养形成拟胚体（Ｅｍｂｒｙｏｉｄｂｏｄｉｅｓ，ＥＢｓ），再将ＥＢｓ??经过诱导培养（第６天通过Ｄｏｘ诱导启动和ＦｏｘａＰ表达）使其分化为诱导型生血内??皮细胞ｉＨＥＣｓ，在第１１天将分化的细胞进行收集分选出ｉＨＥＣｓ?（ＣＤ３ｒＣＤ４１ｌＤＷＣＤ４５－ｃ－??Ｋｉｔ＋ＣＤＳＯＷ），细胞分选前由ＣＤ３１阳性富集，此图为三次独立实验的代表性图。???７－ＡＡＤ－???麵，１＿??－１〇３?〇?１０３?１０４?１０５?－１０３?０?１０３?１〇４?１０５?－１０３?０?１０？?１０４?１０＊??ＣＤ４５－ＡＰＣ?？?ＣＤ１３５－ＰＥ?？?ＣＤ１２７－ＢＶ４２１?－??２７??
?第１章多能干细胞分化再生的Ｔ细胞体内抗肿瘤评估???图１．３．２?ｉＲ９?ｍＥＳＣｓ多能干细胞定向诱导分化ｄａｙ?２１流式分析ｉＨＰＣｓ细胞??图注：将第１１天分选的ｉＨＥＣｓ与０Ｐ９－ＤＬ１基质细胞共培养经历造血成熟，经历１０天成熟??后即ｄａｙ?２１时流式分析共培养成熟的诱导型造血祖细胞ｉＨＰＣｓ，免疫表型限定为：??Ｌｉｎ?（ＣＤ２／ＣＤ３／ＣＤ４／ＣＤ８／ＣＤ１?ｌｂ／Ｇｒｌ／Ｔｅｒｌ?１９／ＣＤ１９／ＮＫ１?？?１／ＴＣＲｙＳ）?－ｃ－Ｋｉｔ＋ＣＤ１２７＋／ＣＤ１３５＋。??１．３．?２?ｉ?Ｒ９?ｍＥＳＣｓ来源的ｉ?ＨＰＣｓ移植免疫缺陷鼠再生Ｔ淋巴细胞??接下来，我们利用重度免疫缺陷鼠（Ｂ－ＮＤＧ，类似于ＮＳＧ）作为ｉＨＰＣｓ分??化产生ｉＴ细胞的反应器，在ｉＨＥＣｓ进行共培养的第１０天，收集其分化形成的造??血祖细胞ｉＨＰＣｓ?（２?ｘ?１〇６／只）通过眼静脉注射，移植到经过Ｘ－ｒａｙ照射处理（２．２５??Ｇｙ）的Ｂ－ＮＤＧ小鼠中，在移植后第５周，我们利用流式技术检测到其脾脏有供??体来源的成熟ｉＴ细胞（ＣＤ４５．２＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋或ＣＤ４５．２＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋，注：再生的Ｔ??细胞命名为ｉＴ细胞）。流式数据显示供体来源的细胞中ＣＤ４＋细胞和ＣＤ８＋细胞??比例分别为?６３．２°／。、３５．５％?（图?１．３．３）。??ＣＤ４５．２＋ＣＤ３＋??議Ｉｔ??￣｜ｉｍ＇ｌＩ?ｆＵ＇?ｉ＇Ｖ＇ｉ?Ｉ＇ｍ?１｜?１?？?＇?Ｉ?＇！？！＇?Ｉ?？？？Ｊ??？１０３?０?１０３?１〇４?１０５??ＣＤ４－ＰＥ????图１．３．３?ｉＲ９?ｍＥＳＣｓ来源的ｉＨＰＣｓ移植受体鼠脾脏ｉＴ细胞流式分析?
【参考文献】：
期刊论文
[1]Phase 1 clinical trial demonstrated that MUC1 positive metastatic seminal vesicle cancer can be effectively eradicated by modified Anti-MUC1 chimeric antigen receptor transduced T cells[J]. Fengtao You,Licui Jiang,Bozhen Zhang,Qiang Lu,Qiao Zhou,Xiaoyang Liao,Hong Wu,Kaiqi Du,Youcai Zhu,Huimin Meng,Zhishu Gong,Yunhui Zong,Lei Huang,Man Lu,Jirong Tang,Yafen Li,Xiaochen Zhai,Xiangling Wang,Sisi Ye,Dan Chen,Lei Yuan,Lin Qi,Lin Yang. Science China（Life Sciences）. 2016(04)
[2]Treatment of solid tumors with chimeric antigen receptor-engineered T cells: current status and future prospects[J]. Shengmeng Di,Zonghai Li. Science China（Life Sciences）. 2016(04)
[3]Gastric cancer and the epoch of immunotherapy approaches[J]. Elena Niccolai,Antonio Taddei,Domenico Prisco,Amedeo Amedei. World Journal of Gastroenterology. 2015(19)
本文编号：3222366
【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１．１．１正在开发的７５３种细胞疗法的全球地理分布??图注：美国和中国分别以３４４种和２０３种细胞疗法引领着细胞疗法发展竞赛??
－ＤＬ１?基质细??胞共培养，采用造血分化培养基将ｉＨＥＣｓ诱导分化为可用于移植的诱导型造血??祖细胞（ｉｎｄｕｃｅｄ?ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ?ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ?ｃｅｌｌｓ，ｉＨＰＣｓ?）（Ｌｉｎ—ｃ－Ｋｉｔ＋ＣＤ?１２７＋／ＣＤ１３５＋）??（图?１．３．２）。??０?ＳＯＫ?１００Ｋ?１５０Ｋ?２００Ｋ?２６０Ｋ?０?１〇４?１〇５?－１〇３?〇?１〇３?１〇４?１〇Ｓ??ＦＳＣ－Ａ???ＣＤ４５－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５???ＣＤ２０１－ＰＥ????图１．３．１?ｉＲ９?ｍＥＳＣｓ多能干细胞定向诱导分化ｉＨＥＣｓ细胞ｄａｙ?１１流式分选图??图注：将ｉＲ９ｍＥＳＣｓ通过２．５天的倒置培养形成拟胚体（Ｅｍｂｒｙｏｉｄｂｏｄｉｅｓ，ＥＢｓ），再将ＥＢｓ??经过诱导培养（第６天通过Ｄｏｘ诱导启动和ＦｏｘａＰ表达）使其分化为诱导型生血内??皮细胞ｉＨＥＣｓ，在第１１天将分化的细胞进行收集分选出ｉＨＥＣｓ?（ＣＤ３ｒＣＤ４１ｌＤＷＣＤ４５－ｃ－??Ｋｉｔ＋ＣＤＳＯＷ），细胞分选前由ＣＤ３１阳性富集，此图为三次独立实验的代表性图。???７－ＡＡＤ－???麵，１＿??－１〇３?〇?１０３?１０４?１０５?－１０３?０?１０３?１〇４?１０５?－１０３?０?１０？?１０４?１０＊??ＣＤ４５－ＡＰＣ?？?ＣＤ１３５－ＰＥ?？?ＣＤ１２７－ＢＶ４２１?－??２７??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]Phase 1 clinical trial demonstrated that MUC1 positive metastatic seminal vesicle cancer can be effectively eradicated by modified Anti-MUC1 chimeric antigen receptor transduced T cells[J]. Fengtao You,Licui Jiang,Bozhen Zhang,Qiang Lu,Qiao Zhou,Xiaoyang Liao,Hong Wu,Kaiqi Du,Youcai Zhu,Huimin Meng,Zhishu Gong,Yunhui Zong,Lei Huang,Man Lu,Jirong Tang,Yafen Li,Xiaochen Zhai,Xiangling Wang,Sisi Ye,Dan Chen,Lei Yuan,Lin Qi,Lin Yang. Science China（Life Sciences）. 2016(04)
[2]Treatment of solid tumors with chimeric antigen receptor-engineered T cells: current status and future prospects[J]. Shengmeng Di,Zonghai Li. Science China（Life Sciences）. 2016(04)
[3]Gastric cancer and the epoch of immunotherapy approaches[J]. Elena Niccolai,Antonio Taddei,Domenico Prisco,Amedeo Amedei. World Journal of Gastroenterology. 2015(19)
本文编号：3222366
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