溴结构域蛋白BRD4维持胃癌细胞高侵袭转移特性的作用及机制研究
发布时间：2021-07-03 11:39
近年来,随着测序深度与蛋白结构解析技术的不断提高,针对恶性肿瘤的相关研究取得了长足的进步。人们逐渐发现,单纯的中心法则已经无法解释复杂的肿瘤恶性生物学行为。值得关注的是,表观遗传学的紊乱在恶性肿瘤发生发展中发挥着重要的作用,而针对癌症发生、进展的关键表观事件,寻找新兴抗癌靶点的表观靶向治疗（Epigenetic Therapeutics）是新一代靶向药物设计和研发的新策略和新方向。溴结构域超末端蛋白（Bromodomain and extra terminal protein,BET）家族是近年来备受关注的潜在表观靶点之一。该家族的主要成员包括BRD2,BRD3,BRD4和BRDT（仅在睾丸组织中表达）,而BRD4是当中最受关注的“明星分子”。作为“表观阅读器”（Epigenetic Reader）,BRD4可以直接识别并结合于组蛋白乙酰化的赖氨酸残基,同时招募并形成一系列关键的调控复合物,如转录延长因子P-TEFb（CDK9蛋白的异源二聚体）、Jumonji结构域蛋白6（JMJD6）等协同调控众多癌基因的转录,从而促进肿瘤的发生与癌细胞的急速增殖。关键的癌基因原癌基因蛋白MYC与凋亡...
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：136 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
BET家族蛋白在各项肿瘤与癌旁组织中mRNA的表达水平A-C,BET家族蛋白BRD2，BRD3和BRD4在各消化道肿瘤及癌旁组织中mRNA的表达水平（LIHC为肝细胞癌，ESCA为食管癌，LIHC为肝细胞癌，GC为胃癌;红色代表癌组织，灰色代表
图 1-3 BRD4 的表达水平是胃癌患者的独立预后因素, 在 GSE62254 的胃癌患者相关测序数据中，BRD4 的高表达提示患者更短的总生存期(O进展生存期(FPS)以及首次进展生存期(PFS)；B, 联合 GSE14210, GSE15459, GSE29272, GSE51105 以及 GSE62254 数据集，BRD4 的表达水平与相关临床指标的联合预后分于我院 162 例样本，BRD4 蛋白的高表达提示更短的 OS 以及无转移生存期（MFS）；D, 数据库中 BRD4 的 Kaplan-Meier 预后相关分析。讨 论表观靶向治疗是近年来肿瘤靶向治疗的新方向，而 BET 家族无疑是这一领域的蛋白家族之一，在这其中，BRD4 被认为最具潜力成为下一代表观靶向药物点。最初，BRD4 是作为重要的调控血液系统肿瘤的分子被大众所认识的。201nnes Zuber 通过表观调控分子小干扰 RNA 文库的筛选，发现 BRD4 是维持急性病细胞生存的重要基因。敲除 BRD4 可以抑制肿瘤细胞的生长，促进凋亡，而
人胃黏膜永生化上皮细胞 GES-1，胃癌细胞 BGC-823,SGC-7901,MGC-803 C-27 均购自上海中科院细胞库；胃癌细胞 AGS 以及人胚胎肾细胞 293T 均购自C 细胞库；HGC-27 细胞应用含 20%胎牛血清的 1640 培养基进行培养，AGS0%胎牛血清的 F12 培养基进行培养，293T 应用含 10%胎牛血清的 DMEM 高糖行培养，其余各细胞均用含 10%胎牛血清的培养基进行培养。3.1.4.2 BRD4 敲除稳定细胞株的构建本实验中我们利用 CRISPR/Cas9 技术进行 BRD4 基因敲除，并借助慢病毒感染建 BRD4 敲除（BRD4-/-）的稳定胃癌细胞株。（1）BRD4 敲除病毒：敲除病毒购自上海吉凯基因科技有限公司，该病毒载体为双载体（附图 2-1），为 Cas9 携带载体，载体二为 sgRNA 携带载体，前者具备嘌呤霉素抗性，而后色荧光蛋白的表达，病毒滴度均高于 1E+8TU。三条用于引导 Cas9 剪切的 sg属、靶点编号以及具体的 sgRNA 序列如附图 2-2 所示；
【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular mechanisms of chemoresistance in gastric cancer[J]. Wen-Jia Shi,Jin-Bo Gao. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(09)
本文编号：3262512
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：136 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
BET家族蛋白在各项肿瘤与癌旁组织中mRNA的表达水平A-C,BET家族蛋白BRD2，BRD3和BRD4在各消化道肿瘤及癌旁组织中mRNA的表达水平（LIHC为肝细胞癌，ESCA为食管癌，LIHC为肝细胞癌，GC为胃癌;红色代表癌组织，灰色代表
图 1-3 BRD4 的表达水平是胃癌患者的独立预后因素, 在 GSE62254 的胃癌患者相关测序数据中，BRD4 的高表达提示患者更短的总生存期(O进展生存期(FPS)以及首次进展生存期(PFS)；B, 联合 GSE14210, GSE15459, GSE29272, GSE51105 以及 GSE62254 数据集，BRD4 的表达水平与相关临床指标的联合预后分于我院 162 例样本，BRD4 蛋白的高表达提示更短的 OS 以及无转移生存期（MFS）；D, 数据库中 BRD4 的 Kaplan-Meier 预后相关分析。讨 论表观靶向治疗是近年来肿瘤靶向治疗的新方向，而 BET 家族无疑是这一领域的蛋白家族之一，在这其中，BRD4 被认为最具潜力成为下一代表观靶向药物点。最初，BRD4 是作为重要的调控血液系统肿瘤的分子被大众所认识的。201nnes Zuber 通过表观调控分子小干扰 RNA 文库的筛选，发现 BRD4 是维持急性病细胞生存的重要基因。敲除 BRD4 可以抑制肿瘤细胞的生长，促进凋亡，而
人胃黏膜永生化上皮细胞 GES-1，胃癌细胞 BGC-823,SGC-7901,MGC-803 C-27 均购自上海中科院细胞库；胃癌细胞 AGS 以及人胚胎肾细胞 293T 均购自C 细胞库；HGC-27 细胞应用含 20%胎牛血清的 1640 培养基进行培养，AGS0%胎牛血清的 F12 培养基进行培养，293T 应用含 10%胎牛血清的 DMEM 高糖行培养，其余各细胞均用含 10%胎牛血清的培养基进行培养。3.1.4.2 BRD4 敲除稳定细胞株的构建本实验中我们利用 CRISPR/Cas9 技术进行 BRD4 基因敲除，并借助慢病毒感染建 BRD4 敲除（BRD4-/-）的稳定胃癌细胞株。（1）BRD4 敲除病毒：敲除病毒购自上海吉凯基因科技有限公司，该病毒载体为双载体（附图 2-1），为 Cas9 携带载体，载体二为 sgRNA 携带载体，前者具备嘌呤霉素抗性，而后色荧光蛋白的表达，病毒滴度均高于 1E+8TU。三条用于引导 Cas9 剪切的 sg属、靶点编号以及具体的 sgRNA 序列如附图 2-2 所示；
【参考文献】：
期刊论文
[1]Molecular mechanisms of chemoresistance in gastric cancer[J]. Wen-Jia Shi,Jin-Bo Gao. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(09)
本文编号：3262512
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3262512.html
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