EPAC蛋白介导的细胞凋亡在大鼠脑出血后继发性脑损伤中的作用及机制研究

发布时间：2021-07-06 07:11

　　第一部分大鼠脑出血后脑组织中EPAC1、EPAC2的蛋白水平变化目的探讨大鼠脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）后 EPAC（exchange protein directly activated by cAMP）两个亚型EAPC1和EPAC2蛋白水平变化情况。方法1.实验动物分组:随机分配54只SD大鼠（成年,雄性）到9个组中,包括:正常组,假手术组和7个ICH组,ICH组分为ICH后3小时,6小时,12小时,24小时,48小时,72小时和7天这七个亚组。2.体内ICH模型的建立:通过立体定向仪将动脉血（抽取大鼠自体心脏动脉血）注入大鼠尾状核。假手术组中,仅用注射针穿刺脑组织形成穿刺隧道但不注血。3.体外ICH模型的建立和分组:在神经元细胞中加入OxyHb（10μM）建立ICH体外模型。一共分为六组,分别是正常组和加入OxyHb后3小时组、6小时组、12小时组、24小时组、48小时组。4.检测方法及指标:使用Westem-blot方法检测体内和体外ICH模型中,各组蛋白样本中EPAC1和EPAC2的蛋白水平变化。通过对大脑组织的石蜡切片进行免疫荧光染色,... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图３：大鼠ＩＣＨ模型大体标本??

第一部分?ＥＰＡＣ蛋白介导的细胞凋亡在大鼠脑出血后继发性脑损伤中的作用及其机制研究??１?參令?ＩＣＨ?－?＾??．．???１?１?Ｒ??Ｌ．ｐｃ？Ｕｉｌ??－Ｔｕｂｕｌｉｎ?ｍｍｍ＾?ｗ？ｉＢＰ?ＤＯ??Ｂ?４＊??＃＃?＃＃??＾?３．?￣?￣??ｌｉ?＊＊ｉ?＾??ｉＬｉｉ??图４：在体内模型中，ＩＣＨ后各个时间点脑组织内ＥＰＡＣ２蛋白水平变化情况。??Ａ：典型的ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ条带图，（３－Ｔｕｂｕｌｉｎ是内参。Ｂ：对ＥＰＡＣ２蛋白水平进行量化??分析的统计图，＊＊ｐ?＜?０．０１?ｖｓ．?ｓｈａｍ?ｇｒｏｕｐ?（ｎ?＝?６）；?＃＃ｐ?＜?０．０１，６－ｈ?ｖｓ．?３－?ａｎｄ?１２－ｈ?ｇｒｏｕｐｓ??（ｎ＝６）??４．４在体内模型中，ＩＣＨ后各个时间点脑组织中ＥＡＰＣ１总蛋白和ＥＰＡＣ１磷酸化蛋??白水平的变化（见图５）：??与Ｓｈａｍ组相比，各个时间点的ＥＰＡＣ１总蛋白并没有变化，但是通过免疫共沉??淀检测ＥＰＡＣ１磷酸化蛋白水平变化结果显示：与Ｓｈａｍ组相比，在ＩＣＨ后，ＥＰＡＣ１??１６??

低谷（ｐ＜?０．０１）。??Ａ?＾?１ＣＨ?（ｈ）??〇?ＩｇＧ?＾?３?６?１２?２４?４８?ＫＤ??￡?ｐ－Ｓｅｒ?１?〇４??■■＝?ＥＰＡＣ１?＿?ＨＩ?醒４４?＿?Ｍ?１０４??ＣＯ??门?ｉ￣￣ｉ?ｅ３ｖｙ?Ｃ?ｈｄｉ?ｉ?ｒ＊ｉ?５０??ＥＰＡＣ１?？？？?ｍｍ?？ｍ?＾＼０４??ＷＣＬ??ｐ－Ｔｕｂｕ?Ｉ?ｉｎ?５５??ｌｂ?ｉｌｌ??＾?３?６?１２?２４?４８?Ｅ?０＾?３?６?１２?２４??令?ＩＣＨ?（ｈ）?伯＃?ＩＣＨ?（ｈ）??图５：在体内模型中，ＩＣＨ后各个时间点脑组织内ＥＡＰＣｌ总蛋白和ＥＰＡＣｌ磷酸??化蛋白水平变化情况。Ａ：典型的ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ条带图，ｐ－Ｔｕｂｕｌｉｎ是内参。Ｂ：对ＥＰＡＣ１??憐酸化蛋白水平进行量化分析统计图，＊＊ｐ?＜?０．０１?ｖｓ．?ｓｈａｍ?ｇｒｏｕｐ?（ｎ?＝?６）；?＊ｐ?＜?０．０５?ｖｓ．??ｓｈａｍ?ｇｒｏｕｐ?（ｎ?＝?６）；?＜?０？０１，６－ｈ?ｖｓ．?３－ｈ?ａｎｄ?１２－ｈ?ｇｒｏｕｐｓ?（ｎ＝６）。Ｃ：对?ＥＰＡＣ?１?总蛋??白水平进行量化分析，各个时间点与ＩｇＧ组相比，无统计学意义。??４．５在体内模型中，ＩＣＨ后ＥＰＡＣ２石蜡切片免疫荧光染色结果：??通过免疫荧光染色技术探测脑组织神经元中ＥＰＡＣ２的蛋白水平，结果提示??ＥＰＡＣ２在正常组和假手术组中神经元细胞中ＥＰＡＣ２的蛋白水平都很低，但在ＩＣＨ后??６ｈＥＰＡＣ２蛋白水平明显升高，这和ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｏｌｔ的结果是一致的（见图６）。??１７??


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