miR-181a负向调控HMGB2抑制肝癌转移的机制与临床研究
发布时间：2021-07-15 11:15
目的肝细胞肝癌（HCC）是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,已成为亟待解决的公共健康问题。HCC转移和术后复发严重影响患者的疗效和生活质量,是导致HCC患者死亡的主要原因。因此,深入研究HCC转移的机制,筛选复发转移的关键诊治靶点尤为重要。miRNA在肝癌发生发展过程中发挥着重要作用,参与调控肝癌的侵袭和转移。本研究通过miRNA芯片发现miR-181a在高转移能力肝癌细胞Huh-7/M8中表达下调。miR-181a是一种多功能miRNA,既往的研究显示其对HCC转移的影响存在争议。进而通过数据库预测,找出miR-181a可能的下游靶基因HMGB2。HMGB2是高迁移率族蛋白家族的成员,已被报道参与调控胃癌、卵巢癌等肿瘤的转移,但暂无文献报道HMBG2参与调控HCC转移。目前也未有文献报道miR-181a与HMGB2的上下游调控关系。故此,本研究的目的在于探讨miR-181a对HCC转移的作用及介导HMGB2的具体分子机制,并分析miR-181a和HMGB2表达异常与HCC临床病理特征、预后的关系。方法首先,以Huh-7细胞为亲代,利用反复穿越Transwell小室的方法我们建立了...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１高转移肝癌细胞Ｈｕｈ－７／Ｍ８的建立
２．２?Ｈｕｈ－７／Ｍ８细胞在体外具有更强迁移侵袭能力??我们做了一系列实验比较Ｈｕｈ－７与Ｈｕｈ－７／Ｍ８在体外的生物学特性。与亲代??Ｈｕｈ－７细胞相比，Ｈｕｈ－７／Ｍ８细胞体外增殖速度没有显著区别（图１－２Ａ）。划痕实??验发现Ｈｕｈ－７／Ｍ８具有更强的水平迁移能力（图１－２Ｂ）。迁移和侵袭实验进一步证??实有更多的Ｈｕｈ－７／Ｍ８细胞穿过有或无基质胶包被的Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室（图１－２Ｃ和??１－２Ｄ），证明Ｈｕｈ－８／Ｍ８具有更强的迁移和侵袭能力。综上所述，与Ｈｕｈ－７相比，??Ｈｕｈ－７／Ｍ８在体外增殖速度相近，但具有更强的迁移侵袭能力。??Ａ?ｉｆｖ?１?ｌｉｌｉ??０?４８?９６?１４４?１９６?織：Ｔ：、＇．＇??Ｔｉｍｅ?（ｈ）?Ｏｈ?４８?ｈ??Ｃ?Ｄ??／?ｒ＇ｆ?Ａ?．、?１｜．?、＊？■？?？?，??；?：?ｊ?：？?＾??Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ?Ｉｎｖａｓｉｏｎ??義?瞧湓：＇■隱ｍｒ）：??Ｈｕｈ－７?Ｈｕｈ－７／Ｍ８?Ｈｕｈ－７?Ｈｕｈ－７／Ｍ８??图１－２高转移肝癌细胞Ｈｕｈ－７／Ｍ８细胞体外生物学特性的鉴定。??（Ａ）?Ｈｕｈ－７和Ｈｕｈ－７／Ｍ８细胞接种６?ｃｍ培养皿，每２４小时细胞计数，绘制??体外生长曲线。（Ｂ）细胞融合度达到１００％时进行划痕操作，０和４８小时后拍照??比较。（Ｃ）相同细胞数接种Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上室，３０小时后进行Ｇｉｍｓａ染色，封片拍??照（１００倍放大倍数）。（Ｄ）接种细胞至基质胶包被的Ｔｒａｎｓｗｅｌ丨小室，４８小时进??行Ｇｉｍｓａ染色
进一步用尾静脉肺转移模型比较Ｈｕｈ－７与Ｈｕｈ－７／Ｍ８在体内的转移能力。用带??有ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ的Ｈｕｈ－７与Ｈｕｈ－７／Ｍ８构建尾静脉肺转移模型，每姐各１０只裸鼠。２??个月后行生物活体成像（图１－３Ａ），发现Ｈｕｈ－７／Ｍ８组６只肺部有高信号，转移概??率为６／１０（６０％）；?Ｈｕｈ－７组无１只肺部有高信号，转移概率为０／１０（０％），ｐ＜０．００５??（图１－３Ｂ）。取肺部行ＨＥ染色，Ｈｕｈ－７／Ｍ８组６只肺部有肿瘤转移结节形成，而??Ｈｕｈ－７组肺部均为正常肺泡组织，无肿瘤转移结节形成（图１－３Ｃ）。综上所述，??Ｈｕｈ－７／Ｍ８在体内也具有更强的转移能力。??Ａ?Ｂ??ｒ??Ｕ３?ｔｉｒ?ｆ?Ｈｕｈ７?Ｈｕｈ７／Ｍ８??ｎＶＴ?Ｗ?（ｎ＊１〇）??Ｂｐ?４ＩＨ?Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ?０／１０（０％）?６／１０（６０％）??Ｈｕｈ７?Ｈｕｈ７／ｍ８??ｍｍ??Ｈｕｈ７?Ｈｕｈ７＇Ｍ８??图１－３尾静脉肺转移模型比较Ｈｕｈ－７与Ｈｕｈ－７／Ｍ８在体内的转移能力。??（Ａ）无肺转移的Ｈｕｈ－７组裸鼠与有肺转移的Ｈｕｈ－７／Ｍ８组裸鼠荧光素酶活??性成像。（Ｂ）?Ｈｕｈ－７与Ｈｕｈ－７／Ｍ８组裸鼠肺转移数目的统计情况。（Ｃ）无肺转移??的Ｈｕｈ－７组裸鼠与有肺转移的Ｈｕｈ－７／Ｍ８组裸鼠肺部ＨＥ染色，各取４０倍、２００??２３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Clinical features and prognosis of patients with extrahepatic metastases from hepatocellular carcinoma[J]. Kiminori Uka,Hiroshi Aikata,Shintaro Takaki,Hiroo Shirakawa,Soo Cheol Jeong,Keitaro Yamashina,Akira Hiramatsu,Hideaki Kodama,Shoichi Takahashi,Kazuaki Chayama. World Journal of Gastroenterology. 2007(03)
本文编号：3285597
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：126 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１高转移肝癌细胞Ｈｕｈ－７／Ｍ８的建立
２．２?Ｈｕｈ－７／Ｍ８细胞在体外具有更强迁移侵袭能力??我们做了一系列实验比较Ｈｕｈ－７与Ｈｕｈ－７／Ｍ８在体外的生物学特性。与亲代??Ｈｕｈ－７细胞相比，Ｈｕｈ－７／Ｍ８细胞体外增殖速度没有显著区别（图１－２Ａ）。划痕实??验发现Ｈｕｈ－７／Ｍ８具有更强的水平迁移能力（图１－２Ｂ）。迁移和侵袭实验进一步证??实有更多的Ｈｕｈ－７／Ｍ８细胞穿过有或无基质胶包被的Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室（图１－２Ｃ和??１－２Ｄ），证明Ｈｕｈ－８／Ｍ８具有更强的迁移和侵袭能力。综上所述，与Ｈｕｈ－７相比，??Ｈｕｈ－７／Ｍ８在体外增殖速度相近，但具有更强的迁移侵袭能力。??Ａ?ｉｆｖ?１?ｌｉｌｉ??０?４８?９６?１４４?１９６?織：Ｔ：、＇．＇??Ｔｉｍｅ?（ｈ）?Ｏｈ?４８?ｈ??Ｃ?Ｄ??／?ｒ＇ｆ?Ａ?．、?１｜．?、＊？■？?？?，??；?：?ｊ?：？?＾??Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ?Ｉｎｖａｓｉｏｎ??義?瞧湓：＇■隱ｍｒ）：??Ｈｕｈ－７?Ｈｕｈ－７／Ｍ８?Ｈｕｈ－７?Ｈｕｈ－７／Ｍ８??图１－２高转移肝癌细胞Ｈｕｈ－７／Ｍ８细胞体外生物学特性的鉴定。??（Ａ）?Ｈｕｈ－７和Ｈｕｈ－７／Ｍ８细胞接种６?ｃｍ培养皿，每２４小时细胞计数，绘制??体外生长曲线。（Ｂ）细胞融合度达到１００％时进行划痕操作，０和４８小时后拍照??比较。（Ｃ）相同细胞数接种Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上室，３０小时后进行Ｇｉｍｓａ染色，封片拍??照（１００倍放大倍数）。（Ｄ）接种细胞至基质胶包被的Ｔｒａｎｓｗｅｌ丨小室，４８小时进??行Ｇｉｍｓａ染色
进一步用尾静脉肺转移模型比较Ｈｕｈ－７与Ｈｕｈ－７／Ｍ８在体内的转移能力。用带??有ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ的Ｈｕｈ－７与Ｈｕｈ－７／Ｍ８构建尾静脉肺转移模型，每姐各１０只裸鼠。２??个月后行生物活体成像（图１－３Ａ），发现Ｈｕｈ－７／Ｍ８组６只肺部有高信号，转移概??率为６／１０（６０％）；?Ｈｕｈ－７组无１只肺部有高信号，转移概率为０／１０（０％），ｐ＜０．００５??（图１－３Ｂ）。取肺部行ＨＥ染色，Ｈｕｈ－７／Ｍ８组６只肺部有肿瘤转移结节形成，而??Ｈｕｈ－７组肺部均为正常肺泡组织，无肿瘤转移结节形成（图１－３Ｃ）。综上所述，??Ｈｕｈ－７／Ｍ８在体内也具有更强的转移能力。??Ａ?Ｂ??ｒ??Ｕ３?ｔｉｒ?ｆ?Ｈｕｈ７?Ｈｕｈ７／Ｍ８??ｎＶＴ?Ｗ?（ｎ＊１〇）??Ｂｐ?４ＩＨ?Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ?０／１０（０％）?６／１０（６０％）??Ｈｕｈ７?Ｈｕｈ７／ｍ８??ｍｍ??Ｈｕｈ７?Ｈｕｈ７＇Ｍ８??图１－３尾静脉肺转移模型比较Ｈｕｈ－７与Ｈｕｈ－７／Ｍ８在体内的转移能力。??（Ａ）无肺转移的Ｈｕｈ－７组裸鼠与有肺转移的Ｈｕｈ－７／Ｍ８组裸鼠荧光素酶活??性成像。（Ｂ）?Ｈｕｈ－７与Ｈｕｈ－７／Ｍ８组裸鼠肺转移数目的统计情况。（Ｃ）无肺转移??的Ｈｕｈ－７组裸鼠与有肺转移的Ｈｕｈ－７／Ｍ８组裸鼠肺部ＨＥ染色，各取４０倍、２００??２３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Clinical features and prognosis of patients with extrahepatic metastases from hepatocellular carcinoma[J]. Kiminori Uka,Hiroshi Aikata,Shintaro Takaki,Hiroo Shirakawa,Soo Cheol Jeong,Keitaro Yamashina,Akira Hiramatsu,Hideaki Kodama,Shoichi Takahashi,Kazuaki Chayama. World Journal of Gastroenterology. 2007(03)
本文编号：3285597
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