降香新黄酮latifolin促进骨髓间充质干细胞对缺血性心脏病心肌修复作用及机制研究
发布时间：2021-07-16 09:19
目的:骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BM-MSCs）移植治疗心肌梗死被认为是一种有效的治疗方法,然而炎性微环境导致移植的BM-MSCs生存率和分化率低,限制了其疗效,提高BM-MSCs的生存率和分化能力以提高BM-MSCs移植治疗心肌梗死疗效十分重要。Latifolin是从中药降香中分离出来的单体化合物,研究报道表明latifolin具有抗炎作用,前期研究发现latifolin对心肌细胞具有保护作用,可降低心肌组织炎细胞浸润,提高心功能。因此,推测latifolin可通过改善炎性微环境提高BM-MSCs生存率和增强BM-MSCs定向分化能力,进而提高BM-MSCs移植治疗心肌梗死疗效。本研究探索latifolin对BM-MSCs生存率和心肌定向分化的作用,以达到增强BM-MSCs移植治疗缺血性心脏病目的,为心肌梗死细胞治疗和心肌再生研究奠定基础。研究方法:1.采用全骨髓提取法收集大鼠BM-MSCs,倒置显微镜观察培养细胞形态;采用流式细胞仪检测BM-MSCs表面抗原CD29、CD90、CD34和CD45。2.采用噻唑蓝（Meth...
【文章来源】：江西中医药大学江西省
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
3代骨髓间充质干细胞形态(×200)
164.7%，结果见图2。由实验鉴定结果显示，CD29和CD90阳性表达99%以上，CD34和CD45表达量小于5%，可排除造血前体细胞。根据流式鉴定，可以判定分离提取和传代的细胞95%以上均为骨髓来源的间充质干细胞。图2骨髓间充质干细胞表面标记物表达Fig.2IdentificationofSurfaceMarkersofBoneMarrowMesenchymalStemCells4讨论骨髓间充质干细胞来源于中胚层，具有强扩增能力、多向潜能分化性。1968年，Friendenstein首次在骨髓中发现，其在特定的诱导条件和环境中可定向分化为成骨、软骨、神经、脂肪、心肌细胞。因其获取容易，扩增快速，在基因组织工程和细胞替代疗法领域得到青睐[93,94]。骨髓中的间充质干细胞占有含量是非常少的，占总单核细胞数量的0.1～0.01‰，需要在体外先行提娶分离、纯化和扩增后才够应用于各项治疗和研究[95]。目前，骨髓间充质干细胞的体外获取和
28呈贴壁良好，见图1E-H；在24h时，与正常组比，氧糖剥夺组、氧糖剥夺+TNF-α组、氧糖剥夺+LPS组细胞细胞明显皱缩变小，长梭形形态消失，细胞贴壁减弱，细胞数量明显减少，细胞损伤明显见图1I-L。图1BM-MSCs在缺血缺氧和炎症环境下形态变化(×200)Fig.1MorphologyofBM-MSCsunderOGDandinflammatoryconditions(×200)3.2缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs活力的影响MTT结果显示，与正常组比，氧糖剥夺6h和12h后BM-MSCs存活率升高，分别为115.13%和106.97%，其中6h具有显著差异性（P＜0.05），氧糖剥夺24h后BM-MSCs存活率降低，为85.95%；与正常组比，氧糖剥夺+TNF-α处理6h、12h和24h后BM-MSCs存活率下降，分别为98.85%、89.70%和51.40%，氧糖剥夺+LPS处理6h、12h和24h后BM-MSCs存活率下降，分别为97.92%、81.30%和40.27%，其中氧糖剥夺+TNF-α、氧糖剥夺+LPS处理24h细胞生存率与正常组比具有显著差异性（P＜0.01）；与氧糖剥夺组比较，氧糖剥夺+TNF-α组和氧糖剥夺+LPS组在12h细胞活力显著降低（P＜0.05，P＜0.01），在24h细胞活力降低更为显著（P＜0.01）。由结果可得，氧糖剥夺6h、12h使细胞活力增强，氧糖剥夺24h对细胞造成损伤，而加入TNF-α和LPS诱导，导致BM-MSCs活力明显降低，见图2。
【参考文献】：
期刊论文
[1]1990～2016年中国及省级行政区心血管病疾病负担报告[J]. 李镒冲,刘世炜,曾新颖,周脉耕. 中国循环杂志. 2019(08)
[2]活血化瘀药在冠心病中现代临床应用[J]. 金娟,赵炎,付佳新,武子健,刘莉. 辽宁中医药大学学报. 2019(08)
[3]益气活血类中药治疗冠心病的临床效果研究[J]. 林晶. 中国医药指南. 2019(20)
[4]丹红注射液对比复方丹参注射液治疗冠心病心绞痛有效性及安全性的Meta分析[J]. 赵学梅,徐卉,徐国良. 中国中医急症. 2019(03)
[5]降香与降真香本草考证[J]. 王祥红,王立志. 亚太传统医药. 2019(01)
[6]脂肪间充质干细胞移植改善急性心肌梗死大鼠心功能[J]. 汪兆艳,杨印祥,王倩,屈素清,丁毅伟,栾佐. 细胞与分子免疫学杂志. 2019(01)
[7]Stem cell-derived exosomes-an emerging tool for myocardial regeneration[J]. Erzsebet Lazar,Theodora Benedek,Szilamer Korodi,Nora Rat,Jocelyn Lo,Imre Benedek. World Journal of Stem Cells. 2018(08)
[8]三七总皂苷通过活化骨髓来源的间充质干细胞改善急性心肌梗死大鼠的心功能[J]. 周剑,吴荣,王龙. 细胞与分子免疫学杂志. 2018(07)
[9]黄檀属植物新黄酮类化学成分与药理活性研究进展[J]. 刘荣华,林帅,张普照,陈兰英,黄慧莲,梅丹仪,胡少杰,邵峰. 中国中药杂志. 2017(24)
[10]降香新黄酮latifolin对大鼠急性心肌缺血影响及介导Nrf2信号通路机制研究[J]. 李雪亮,陈兰英,官紫祎,骆瑶,崔亚茹,刘荣华,邵峰,王定清. 中国中药杂志. 2017(20)
本文编号：3286732
【文章来源】：江西中医药大学江西省
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
3代骨髓间充质干细胞形态(×200)
164.7%，结果见图2。由实验鉴定结果显示，CD29和CD90阳性表达99%以上，CD34和CD45表达量小于5%，可排除造血前体细胞。根据流式鉴定，可以判定分离提取和传代的细胞95%以上均为骨髓来源的间充质干细胞。图2骨髓间充质干细胞表面标记物表达Fig.2IdentificationofSurfaceMarkersofBoneMarrowMesenchymalStemCells4讨论骨髓间充质干细胞来源于中胚层，具有强扩增能力、多向潜能分化性。1968年，Friendenstein首次在骨髓中发现，其在特定的诱导条件和环境中可定向分化为成骨、软骨、神经、脂肪、心肌细胞。因其获取容易，扩增快速，在基因组织工程和细胞替代疗法领域得到青睐[93,94]。骨髓中的间充质干细胞占有含量是非常少的，占总单核细胞数量的0.1～0.01‰，需要在体外先行提娶分离、纯化和扩增后才够应用于各项治疗和研究[95]。目前，骨髓间充质干细胞的体外获取和
28呈贴壁良好，见图1E-H；在24h时，与正常组比，氧糖剥夺组、氧糖剥夺+TNF-α组、氧糖剥夺+LPS组细胞细胞明显皱缩变小，长梭形形态消失，细胞贴壁减弱，细胞数量明显减少，细胞损伤明显见图1I-L。图1BM-MSCs在缺血缺氧和炎症环境下形态变化(×200)Fig.1MorphologyofBM-MSCsunderOGDandinflammatoryconditions(×200)3.2缺血、缺氧和炎症环境对BM-MSCs活力的影响MTT结果显示，与正常组比，氧糖剥夺6h和12h后BM-MSCs存活率升高，分别为115.13%和106.97%，其中6h具有显著差异性（P＜0.05），氧糖剥夺24h后BM-MSCs存活率降低，为85.95%；与正常组比，氧糖剥夺+TNF-α处理6h、12h和24h后BM-MSCs存活率下降，分别为98.85%、89.70%和51.40%，氧糖剥夺+LPS处理6h、12h和24h后BM-MSCs存活率下降，分别为97.92%、81.30%和40.27%，其中氧糖剥夺+TNF-α、氧糖剥夺+LPS处理24h细胞生存率与正常组比具有显著差异性（P＜0.01）；与氧糖剥夺组比较，氧糖剥夺+TNF-α组和氧糖剥夺+LPS组在12h细胞活力显著降低（P＜0.05，P＜0.01），在24h细胞活力降低更为显著（P＜0.01）。由结果可得，氧糖剥夺6h、12h使细胞活力增强，氧糖剥夺24h对细胞造成损伤，而加入TNF-α和LPS诱导，导致BM-MSCs活力明显降低，见图2。
【参考文献】：
期刊论文
[1]1990～2016年中国及省级行政区心血管病疾病负担报告[J]. 李镒冲,刘世炜,曾新颖,周脉耕. 中国循环杂志. 2019(08)
[2]活血化瘀药在冠心病中现代临床应用[J]. 金娟,赵炎,付佳新,武子健,刘莉. 辽宁中医药大学学报. 2019(08)
[3]益气活血类中药治疗冠心病的临床效果研究[J]. 林晶. 中国医药指南. 2019(20)
[4]丹红注射液对比复方丹参注射液治疗冠心病心绞痛有效性及安全性的Meta分析[J]. 赵学梅,徐卉,徐国良. 中国中医急症. 2019(03)
[5]降香与降真香本草考证[J]. 王祥红,王立志. 亚太传统医药. 2019(01)
[6]脂肪间充质干细胞移植改善急性心肌梗死大鼠心功能[J]. 汪兆艳,杨印祥,王倩,屈素清,丁毅伟,栾佐. 细胞与分子免疫学杂志. 2019(01)
[7]Stem cell-derived exosomes-an emerging tool for myocardial regeneration[J]. Erzsebet Lazar,Theodora Benedek,Szilamer Korodi,Nora Rat,Jocelyn Lo,Imre Benedek. World Journal of Stem Cells. 2018(08)
[8]三七总皂苷通过活化骨髓来源的间充质干细胞改善急性心肌梗死大鼠的心功能[J]. 周剑,吴荣,王龙. 细胞与分子免疫学杂志. 2018(07)
[9]黄檀属植物新黄酮类化学成分与药理活性研究进展[J]. 刘荣华,林帅,张普照,陈兰英,黄慧莲,梅丹仪,胡少杰,邵峰. 中国中药杂志. 2017(24)
[10]降香新黄酮latifolin对大鼠急性心肌缺血影响及介导Nrf2信号通路机制研究[J]. 李雪亮,陈兰英,官紫祎,骆瑶,崔亚茹,刘荣华,邵峰,王定清. 中国中药杂志. 2017(20)
本文编号：3286732
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