右美托咪定通过调控AKT和ERK减轻糖尿病肾病上皮-间质转化及其相关机制研究
发布时间：2021-07-22 22:56
目的:糖尿病肾病是一种较常见的糖尿病并发症,其特有的病理生理学改变提高了麻醉风险,越来越受到临床麻醉医生的重视。右美托咪定作为α2-肾上腺素受体激动剂,具有较稳定的镇静、镇痛作用,且对急性肾损伤和肾缺血再灌注损伤具有保护作用。糖尿病患者体内长期处于高血糖状态,可导致组织和细胞氧化应激损伤,进而引起肾小管上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,其与肾间质纤维化关系密切,严重影响肾脏功能。本研究利用体外细胞实验和体内动物实验,探讨右美托咪定对糖尿病肾病的保护作用及其相关机制,旨在为糖尿病肾病的麻醉药物选择提供可靠的理论依据,并为糖尿病肾病的临床麻醉管理提供一定的指导作用。方法:1.体外建立高糖对人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）损伤模型,加入不同浓度（0 m M、10 m M、20 m M、30 m M、40 m M、50 m M、60 m M）葡萄糖处理HK-2细胞6 h,通过CCK-8法检测不同浓度各组细胞存活率,利用倒置显微镜镜下观察不同浓度葡萄糖各组细胞形态学改变,通过Western blotting法检测不同浓度各组细胞AKT、...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：94 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
1痛觉通路的相关调节递质[103]
第4章结果31第4章结果4.1高糖诱导人肾小管上皮细胞细胞上皮间质转化4.1.1CCK-8法检测不同浓度葡萄糖处理HK-2细胞存活率如图4.1.1A所示，和Normal组（0mM组）相比，20mM、30mM、40mM、50mM、60mM浓度的Glu组细胞存活率均有明显下降，差异均具有统计学意义（P<0.05）并且在相同时间随着葡萄糖处理浓度的增高，HK-2细胞存活率逐渐下降，呈剂量依赖性。与Normal组相比较，甘露醇浓度为20mM（M20mM组）和40mM（M40mM组）时的细胞存活率与Normal组差异不具有统计学意义（P>0.05）。与Normal组相比较，在葡萄糖浓度为40mM处理6h时，HK-2细胞存活率约在85%。通过查阅文献，结合上述研究结果，最终选择40mM处理6h作为本研究高糖对HK-2损伤的建模条件。图4.1.1不同浓度葡萄糖对HK-2细胞存活率的影响Fig.4.1.1Effectsofglucoseconcentrationonsurvivalrateofhk-2cellsA．随着葡萄糖处理浓度的增高，HK-2细胞存活率逐渐下降。与Normal组相比，20mM、30mM、40mM、50mM和60mM组的细胞存活率明显下降，差异具有统计学意义（P<0.05）；与Normal组相比，10mM、M20mM和M40mM组的细胞存活率差异不具有统计学意义（P>0.05）
吉林大学博士学位论文324.1.2不同浓度葡萄糖处理对人肾小管上皮细胞的形态学影响在6孔板中按照前述方法铺好HK-2细胞，确保不同浓度的孔内细胞密度均匀一致，分组情况为：Normal组（0mM组）、10mM组、20mM组、30mM组、40mM组、50mM组，分别加入相应浓度的葡萄糖处理6小时后通过倒置显微镜观察，我们发现，如图4.1.2A所示，Normal组HK-2细胞呈圆形或椭圆形（铺路石样）紧密排列，贴壁生长状态较好，但随着葡萄糖处理浓度的增加，细胞形状由近似圆形逐渐变为长梭形，且细胞间隙变大、贴壁细胞减少，生长状态变差。A图4.1.2人肾小管上皮细胞葡萄糖不同浓度的形态学改变Fig.4.1.2MorphologicalchangesofhumantubularepithelialcellsindifferentglucoseconcentrationA．随着葡萄糖浓度增加，HK-2细胞形态学明显改变，贴壁细胞数量明显减少标尺=200μm4.1.3不同浓度葡萄糖处理HK-2细胞AKT和ERK蛋白表达通过Westernblot检测不同浓度葡萄糖处理各组HK-2细胞的AKT和ERK蛋白表达情况，如图4.1.3A所示，和Normal组（0mM组）相比，相同时间随着葡萄糖处理浓度的升高，HK-2细胞总蛋白AKT表达略有下降（P0.05），p-AKT表达稍有上调（P0.05），但p-AKT和AKT比值（p-AKT/AKT）明显升高（P0.01）。和Normal组（0mM组）相比，相同时间随着葡萄糖处理浓度的升高，HK-2细胞总蛋白ERK表达明显上调（P0.01），p-ERK表达明显上调（P0.05），
【参考文献】：
期刊论文
[1]How tubular epithelial cells dictate the rate of renal fibrogenesis?[J]. Kevin Louis,Alexandre Hertig. World Journal of Nephrology. 2015(03)
本文编号：3298061
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：94 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
1痛觉通路的相关调节递质[103]
第4章结果31第4章结果4.1高糖诱导人肾小管上皮细胞细胞上皮间质转化4.1.1CCK-8法检测不同浓度葡萄糖处理HK-2细胞存活率如图4.1.1A所示，和Normal组（0mM组）相比，20mM、30mM、40mM、50mM、60mM浓度的Glu组细胞存活率均有明显下降，差异均具有统计学意义（P<0.05）并且在相同时间随着葡萄糖处理浓度的增高，HK-2细胞存活率逐渐下降，呈剂量依赖性。与Normal组相比较，甘露醇浓度为20mM（M20mM组）和40mM（M40mM组）时的细胞存活率与Normal组差异不具有统计学意义（P>0.05）。与Normal组相比较，在葡萄糖浓度为40mM处理6h时，HK-2细胞存活率约在85%。通过查阅文献，结合上述研究结果，最终选择40mM处理6h作为本研究高糖对HK-2损伤的建模条件。图4.1.1不同浓度葡萄糖对HK-2细胞存活率的影响Fig.4.1.1Effectsofglucoseconcentrationonsurvivalrateofhk-2cellsA．随着葡萄糖处理浓度的增高，HK-2细胞存活率逐渐下降。与Normal组相比，20mM、30mM、40mM、50mM和60mM组的细胞存活率明显下降，差异具有统计学意义（P<0.05）；与Normal组相比，10mM、M20mM和M40mM组的细胞存活率差异不具有统计学意义（P>0.05）
吉林大学博士学位论文324.1.2不同浓度葡萄糖处理对人肾小管上皮细胞的形态学影响在6孔板中按照前述方法铺好HK-2细胞，确保不同浓度的孔内细胞密度均匀一致，分组情况为：Normal组（0mM组）、10mM组、20mM组、30mM组、40mM组、50mM组，分别加入相应浓度的葡萄糖处理6小时后通过倒置显微镜观察，我们发现，如图4.1.2A所示，Normal组HK-2细胞呈圆形或椭圆形（铺路石样）紧密排列，贴壁生长状态较好，但随着葡萄糖处理浓度的增加，细胞形状由近似圆形逐渐变为长梭形，且细胞间隙变大、贴壁细胞减少，生长状态变差。A图4.1.2人肾小管上皮细胞葡萄糖不同浓度的形态学改变Fig.4.1.2MorphologicalchangesofhumantubularepithelialcellsindifferentglucoseconcentrationA．随着葡萄糖浓度增加，HK-2细胞形态学明显改变，贴壁细胞数量明显减少标尺=200μm4.1.3不同浓度葡萄糖处理HK-2细胞AKT和ERK蛋白表达通过Westernblot检测不同浓度葡萄糖处理各组HK-2细胞的AKT和ERK蛋白表达情况，如图4.1.3A所示，和Normal组（0mM组）相比，相同时间随着葡萄糖处理浓度的升高，HK-2细胞总蛋白AKT表达略有下降（P0.05），p-AKT表达稍有上调（P0.05），但p-AKT和AKT比值（p-AKT/AKT）明显升高（P0.01）。和Normal组（0mM组）相比，相同时间随着葡萄糖处理浓度的升高，HK-2细胞总蛋白ERK表达明显上调（P0.01），p-ERK表达明显上调（P0.05），
【参考文献】：
期刊论文
[1]How tubular epithelial cells dictate the rate of renal fibrogenesis?[J]. Kevin Louis,Alexandre Hertig. World Journal of Nephrology. 2015(03)
本文编号：3298061
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3298061.html
