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JAG1对肠神经发育的影响及机制研究

发布时间:2021-07-23 00:07
  研究目的:本研究拟通过斑马鱼模型及细胞学实验研究JAG1对肠神经系统(Enteric nervous system,ENS)发育形成的影响及具体机制。明确JAG1是否可以通过Notch通路影响肠神经前体细胞的增殖和迁移,进而影响ENS的形成和先天性巨结肠的发生,以期为进一步了解先天性巨结肠的发病机制提供新方向。研究方法:首先在正常小鼠结肠及非先天性巨结肠患儿结肠标本中验证JAG1蛋白的表达情况,并与胚鼠(E15天)肠管的JAG1蛋白表达情况比较;然后分别获取不同发育阶段的胚鼠肠管(E11.5d,E13.5d,E15.5d),通过q RT-PCR法检测Jag1及Notch通路信号分子表达量。再构建JAG1-Splicing-Morpholino探针降低斑马鱼jag1 m RNA的表达量,用免疫荧光染色法标记成熟神经元特异蛋白Hu,观察斑马鱼肠神经发育情况,明确JAG1对肠神经发育的影响。另外再获取胚鼠(E16.5天)的肠管进行原代细胞培养获得肠神经前体细胞,分别利用JAG1 Si RNA,JAG1重组蛋白,DAPT(Notch通路抑制剂)对其进行干扰,比较不同处理组间肠神经前体细胞在细胞... 

【文章来源】:上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:152 页

【学位级别】:博士

【部分图文】:

JAG1对肠神经发育的影响及机制研究


人结肠组织PGP9.5免疫组化染色Figure5.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5inhumancolon;绿色为PGP9.6着色区域,可见正常结肠组织(非先天性巨结肠结肠组织)肌

结肠,神经节


上海交通大学博士学位论文图6人结肠组织PGP9.5/JAG1双标免疫组化染色Figure6.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inhumancolon红色着色区域为PGP9.5阳性的神经节细胞;绿色为JAG1蛋白阳性细胞;二者未见重叠着色区域,提示此时JAG1蛋白未在PGP9.5阳性细胞上表达。图7正常小鼠结肠组织PGP9.5/JAG1双标免疫组化染色Figure7.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inmousecolon;对新生小鼠的PGP9.5染色(红色)提示此时小鼠的肠神经节细胞已经发育成熟;JAG1蛋白染色(绿色)见小鼠肌间散在的JAG1阳性细胞,与PGP9.5阳性细胞部分重叠,提示此时部分PGP9.5阳性的神经节细胞表达JAG1蛋白。图8E15天胚鼠肠组织PGP9.5/JAG1双标免疫组化染色Figure8.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inE15embronicmousecolonE15天的胚鼠肠管可见肠管肌间PGP9.5散在的阳性成熟神经嵴细胞(红色);JAG1染色(绿色)见此时JAG1在肠管间质表达广泛,同时肌间见大量散在的JAG1阳性着色区域,该区域和PGP9.5着色区域大部分重合,提示此时肠神经节细胞大部分表达JAG1蛋白。1.2.1.2JAG1及Notch通路相关信号分子在胚鼠肠管发育过程中表达量改变情况对肠神经发育过程中各基因的表达量分析的结果提示,Jag1、Notch1、Sox10在E11.5天时的表达量明显低于E13.5天和E15.5天的表达量,在E13.5天和E15.5天时的表达量无统计学差异;Dll1、Hes1、Mash1的表达水平在三个时间段随着31

神经节,蛋白,细胞,绿色


上海交通大学博士学位论文图6人结肠组织PGP9.5/JAG1双标免疫组化染色Figure6.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inhumancolon红色着色区域为PGP9.5阳性的神经节细胞;绿色为JAG1蛋白阳性细胞;二者未见重叠着色区域,提示此时JAG1蛋白未在PGP9.5阳性细胞上表达。图7正常小鼠结肠组织PGP9.5/JAG1双标免疫组化染色Figure7.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inmousecolon;对新生小鼠的PGP9.5染色(红色)提示此时小鼠的肠神经节细胞已经发育成熟;JAG1蛋白染色(绿色)见小鼠肌间散在的JAG1阳性细胞,与PGP9.5阳性细胞部分重叠,提示此时部分PGP9.5阳性的神经节细胞表达JAG1蛋白。图8E15天胚鼠肠组织PGP9.5/JAG1双标免疫组化染色Figure8.ImmunohistochemicalstainingofPGP9.5andJag1inE15embronicmousecolonE15天的胚鼠肠管可见肠管肌间PGP9.5散在的阳性成熟神经嵴细胞(红色);JAG1染色(绿色)见此时JAG1在肠管间质表达广泛,同时肌间见大量散在的JAG1阳性着色区域,该区域和PGP9.5着色区域大部分重合,提示此时肠神经节细胞大部分表达JAG1蛋白。1.2.1.2JAG1及Notch通路相关信号分子在胚鼠肠管发育过程中表达量改变情况对肠神经发育过程中各基因的表达量分析的结果提示,Jag1、Notch1、Sox10在E11.5天时的表达量明显低于E13.5天和E15.5天的表达量,在E13.5天和E15.5天时的表达量无统计学差异;Dll1、Hes1、Mash1的表达水平在三个时间段随着31

【参考文献】:
期刊论文
[1]肠神经系统发育的研究进展[J]. 肖俊,李智.  中华小儿外科杂志. 2018 (12)
[2]先天性巨结肠小肠结肠炎发病机制及防治研究进展[J]. 虞贤贤,施诚仁,蔡威.  临床小儿外科杂志. 2018(04)
[3]先天性巨结肠多中心研究的进展与意义[J]. 卫园园,詹江华.  中华小儿外科杂志. 2016 (04)



本文编号:3298177

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