E3泛素化连接酶Fbw7通过结合Mcl-1参与氧化应激诱导的心肌细胞损伤的机制研究

发布时间：2021-08-03 22:07

　　前言:氧化应激参与诸多心血管疾病,并且已知为心肌细胞发生病理变化的重要机制之一。泛素化作为一种重要的生化反应,近几年已被证实为凋亡相关的关键步骤。本次研究中发现E3泛素化连接酶可通过与Mcl-1结和促进氧化应激诱导的心肌细胞（H9c2）损伤。Mcl-1可抑制同家族Bcl-2内其他成员并参与维持细胞生存,但Fbw7可降解Mcl-1并干预此过程。因此我们推测Fbw7可能为促进心肌细胞凋亡的因素。材料与方法:本次研究细胞实验选用H9c2大鼠心肌细胞系作为实验对象,并应用H₂O₂作为氧化应激诱导药物建立H9c2细胞氧化应激损伤模型。应用CCK-8、流式细胞术、Western Blot、ROS活性氧检测验证不同程度氧化应激损伤下,H9c2细胞活性、凋亡水平,Fbw7、Mcl-1、Bax的蛋白表达,以及ROS产生水平。而后探究敲减Fbw7后,上述指标的变化,以及应用免疫共沉淀验证Fbw7与Mcl-1在生理及氧化应激损伤下分子结合水平。Western Blot、流式细胞术、ROS图像均由Photoshop 2017处理,结果分析条形图应用Graphpad ... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
    2.1 细胞培养
    2.2 建立氧化应激模型
    2.3 CCK-8 法检测细胞活性
    2.4 流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测细胞凋亡率
    2.5 Western Blot(WB,蛋白质印迹法)检测细胞内蛋白表达水平
    2.6 细胞转染沉默或过表达 Fbw7
    2.7 免疫共沉淀(co-Immunoprecipitation,co-IP)检测蛋白分子结合或相互作用
    2.8 活性氧测定(Reactive Oxygen Species,ROS)检测细胞内 ROS 积累水平
    2.9 质粒抽提扩增 GFP-Fbw7 过表达质粒
        2.9.1 转化及扩大培养
        2.9.2 质粒抽提过程(需质粒中提试剂盒)
    2.10 常用试剂制备方法
    2.11 统计学分析方法
3 结果
    3.1 Fbw7在氧化应激诱导的H9c2心肌细胞损伤中表达升高
    3.2 敲减Fbw7 后氧化应激诱导的心肌细胞损伤缓解。
    3.3 敲减Fbw7 后氧化应激心肌细胞ROS积累量减少。
    3.4 Fbw7 通过与Mcl-1 相互作用参与氧化应激诱导的心肌细胞损伤
4 讨论
5 结论
本研究的创新性自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介



本文编号：3320418