PKCα-P120ctn-NF-κB信号通路参与流体剪切力作用下血管内皮损伤机制的研究
发布时间：2021-08-16 23:06
背景与目的:颅内动脉瘤是对人类生命健康构成严重威胁的一种急性脑血管疾病,目前关于颅内动脉瘤的发生机制尚未完全阐明。大量研究表明,血管内皮细胞损伤是形成颅内动脉瘤的始动环节。血管内皮细胞损伤其潜在的机制包括血流动力学应激、一氧化氮合酶活性降低、氧化应激、雌激素失衡和内皮细胞与内皮细胞的连接损伤等。然而,血流动力学如何引起血管内皮损伤的机制仍需进一步阐述。P120ctn在血管内皮连接中扮演重要角色。P120ctn的高度保守近膜结构域与VE-cadherin结合维持内皮细胞黏附连接的稳定性;P120ctn也是天然免疫反应的调控因子之一,与炎症因子NF-B激活相关。PKCα与血管性疾病关系密切,能够调控P120ctn表达及磷酸化。本课题旨在研究PKCα-P120ctn-NF-B信号通路是否参与流体剪切应力引起的血管内皮损伤。方法:我们自行设计了一种新型T型细胞流体力学装置,构建血管内皮细胞损伤模型。通过流体力学模拟软件计算T型流室腔内的剪切力和剪切力梯度,根据载玻片上不同的剪切力和剪切力梯度将载玻片分为三个区域:Ⅰ区:停滞区,为低至正常的流体剪切力;Ⅱ区:加速区,高流体剪切力及高剪切力梯度;Ⅲ...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：87 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
血管内皮细胞培养装置示意图
第一部分：血管内皮细胞损伤模型构建9图1.2T型流室腔内的剪切力和剪切力梯度。Ⅰ区：绿色，停滞区，为低至正常的流体剪切力；Ⅱ区：红色，加速区，高流体剪切力及高剪切力梯度；Ⅲ区：黄色，为负到零的高流体剪切力及高剪切力梯度。1.1.4.4内皮细胞形态及密度观察当内皮细胞生长达到80%以上时，将载玻片放入T型流动腔底端的载玻片槽内，然后将其放入已消毒的37℃5%CO2培养箱中，添加2%血清DMEM培养基约200ml到储液管中，启动蠕动泵，分别对载玻片上的细胞冲击0、6小时，在冲击细胞期间也需密切观察培养基的颜色变化，判断培养基是否污染。当达到相应的冲击时间后，关闭蠕动泵，排空系统内的培养基，用无菌镊子将流动腔中的载玻片取出，然后将载玻片轻轻置入装有预冷的PBS缓冲液的10cm圆形器皿中，最后将载玻片迅速置于倒置显微镜下观察血流剪切力作用后的细胞密度及形态变化并拍照保存。
第一部分：血管内皮细胞损伤模型构建101.2结果通过流体力学模拟软件Fluent6.0计算T型流室腔内的剪切力和剪切力梯度。根据载玻片上不同的剪切力和剪切力梯度将载玻片分为三个区域：Ⅰ区：停滞区，为低至正常的流体剪切力；Ⅱ区：加速区，高流体剪切力及高剪切力梯度；Ⅲ：为负到零的高流体剪切力及高剪切力梯度（图1.2）。为了观察在不同强度流体剪切力作用下内皮细胞损伤状态，在新型“T”型流室系统实验装置中，加载500ml/min流量的冲击流场对载玻片上的正常血管内皮细胞给予6h的冲击后倒置显微镜观察其密度及形态：在II区，血管内皮细胞密度下降明显，细胞之间的间隙明显增大，细胞形态多样性伴拉长（图1.3）。图1.3人脐静脉内皮细胞在流体剪切力作用下密度及形态学变化。1、在流体剪切力作用0小时后的人脐静脉内皮细胞;2、在流体剪切力作用6小时后的人脐静脉内皮细胞：在II区，血管内皮细胞密度下降明显，细胞之间的间隙明显增大，细胞形态多样性伴拉长.
【参考文献】：
期刊论文
[1]血管内皮钙黏蛋白与p120-连环蛋白在兔颅内动脉瘤中的表达及其意义[J]. 肖志朋,熊秋迎,荣威林,赵剑斓,胡祖力,李美华. 中华实验外科杂志. 2015 (12)
[2]P120ctn overexpression enhances β-catenin-E-cadherin binding and down regulates expression of survivin and cyclin D1 in BEL-7404 hepatoma cells[J]. Chao-Zan Nong Li-Li Pan Wei-Sheng He Hai-Hong Ye Hua-Yi Huang,Department of Experimental Center,Guangxi Hospital for Nationalities,Nanning 530001,Guangxi Zhuang Autonomous Region,ChinaXi-Liang Zha,Department of Biochemistry and Molecular Biology,Fudan University Shanghai Medical College,Shanghai 200032,China. World Journal of Gastroenterology. 2006(08)
[3]妊高征患者胎盘血管中PKC-α、NF-κB表达的研究[J]. 蒋荣珍,陈汉平. 现代妇产科进展. 2004(01)
本文编号：3346552
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：87 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
血管内皮细胞培养装置示意图
第一部分：血管内皮细胞损伤模型构建9图1.2T型流室腔内的剪切力和剪切力梯度。Ⅰ区：绿色，停滞区，为低至正常的流体剪切力；Ⅱ区：红色，加速区，高流体剪切力及高剪切力梯度；Ⅲ区：黄色，为负到零的高流体剪切力及高剪切力梯度。1.1.4.4内皮细胞形态及密度观察当内皮细胞生长达到80%以上时，将载玻片放入T型流动腔底端的载玻片槽内，然后将其放入已消毒的37℃5%CO2培养箱中，添加2%血清DMEM培养基约200ml到储液管中，启动蠕动泵，分别对载玻片上的细胞冲击0、6小时，在冲击细胞期间也需密切观察培养基的颜色变化，判断培养基是否污染。当达到相应的冲击时间后，关闭蠕动泵，排空系统内的培养基，用无菌镊子将流动腔中的载玻片取出，然后将载玻片轻轻置入装有预冷的PBS缓冲液的10cm圆形器皿中，最后将载玻片迅速置于倒置显微镜下观察血流剪切力作用后的细胞密度及形态变化并拍照保存。
第一部分：血管内皮细胞损伤模型构建101.2结果通过流体力学模拟软件Fluent6.0计算T型流室腔内的剪切力和剪切力梯度。根据载玻片上不同的剪切力和剪切力梯度将载玻片分为三个区域：Ⅰ区：停滞区，为低至正常的流体剪切力；Ⅱ区：加速区，高流体剪切力及高剪切力梯度；Ⅲ：为负到零的高流体剪切力及高剪切力梯度（图1.2）。为了观察在不同强度流体剪切力作用下内皮细胞损伤状态，在新型“T”型流室系统实验装置中，加载500ml/min流量的冲击流场对载玻片上的正常血管内皮细胞给予6h的冲击后倒置显微镜观察其密度及形态：在II区，血管内皮细胞密度下降明显，细胞之间的间隙明显增大，细胞形态多样性伴拉长（图1.3）。图1.3人脐静脉内皮细胞在流体剪切力作用下密度及形态学变化。1、在流体剪切力作用0小时后的人脐静脉内皮细胞;2、在流体剪切力作用6小时后的人脐静脉内皮细胞：在II区，血管内皮细胞密度下降明显，细胞之间的间隙明显增大，细胞形态多样性伴拉长.
【参考文献】：
期刊论文
[1]血管内皮钙黏蛋白与p120-连环蛋白在兔颅内动脉瘤中的表达及其意义[J]. 肖志朋,熊秋迎,荣威林,赵剑斓,胡祖力,李美华. 中华实验外科杂志. 2015 (12)
[2]P120ctn overexpression enhances β-catenin-E-cadherin binding and down regulates expression of survivin and cyclin D1 in BEL-7404 hepatoma cells[J]. Chao-Zan Nong Li-Li Pan Wei-Sheng He Hai-Hong Ye Hua-Yi Huang,Department of Experimental Center,Guangxi Hospital for Nationalities,Nanning 530001,Guangxi Zhuang Autonomous Region,ChinaXi-Liang Zha,Department of Biochemistry and Molecular Biology,Fudan University Shanghai Medical College,Shanghai 200032,China. World Journal of Gastroenterology. 2006(08)
[3]妊高征患者胎盘血管中PKC-α、NF-κB表达的研究[J]. 蒋荣珍,陈汉平. 现代妇产科进展. 2004(01)
本文编号：3346552
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3346552.html
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