长链非编码RNA H19通过调控PKCβⅠ介导淫羊藿苷抑制动脉粥样硬化的研究

发布时间：2021-10-17 10:25

　　动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是以内膜粥样化或纤维斑块形成、管腔狭窄为病变特征的血管性疾病,其发病率呈逐年上升趋势,可导致严重的并发症而威胁人类的健康。目前治疗动脉粥样硬化的一线用药主要是他汀类药物,但在临床应用中存在着不可忽视的副作用。发现新的药物作用靶点并转换干预策略,从而延缓动脉粥样硬化的进展,是目前抗动脉粥样硬化机制研究的重点。非编码RNA（noncoding RNA,ncRNA）在许多重要的生命活动中发挥功能,随着近年来长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）在人类疾病中的作用逐渐被揭示,深化lncRNAs的研究对于理解疾病发生发展的分子机制具有现实意义,也无疑为开发疾病诊断标志物以及筛选药物靶标带来了诸多的新方向。淫羊藿苷（icariin,ICA）是传统中药淫羊藿（Epimedium）的主要活性成分之一,近年已被证实其具有心血管系统保护作用,为动脉粥样硬化的防治提供了新的选择。但淫羊藿苷抗动脉粥样硬化相关机制的研究仍较少,且以往关于淫羊藿苷作用靶点的研究主要集中在编码基因领域,对于淫羊藿苷干预疾病发生发展过程中lncRNA... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：156 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩写词对照表
第一篇 前言
第二篇 文献综述长链非编码RNA与动脉粥样硬化的研究进展
    1.1 LncRNAs与血管壁组分
        1.1.1 LncRNA ANRIL
        1.1.2 LncRNA H19
        1.1.3 LincRNA-p21
        1.1.4 LncRNA MALAT1
        1.1.5 LncRNA TUG1
    1.2 LncRNAs与脂代谢
        1.2.1 LncRNA Le Xis与lnc RNA Me Xis
        1.2.2 LncRNA APOA1-AS
        1.2.3 LncLSTR
    1.3 LncRNAs与炎症
        1.3.1 LincRNA-Cox2
        1.3.2 LincRNA-EPS
        1.3.3 Lnc-DC
    1.4 LncRNAs在AS治疗策略中的研究前景与挑战
第三篇 实验研究
    第1章 淫羊藿苷对Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化及基因表达谱的影响
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验试剂
            1.1.2 实验仪器
            1.1.3 实验用溶液配制
        1.2 实验方法
            1.2.1 实验动物
            1.2.2 实验动物分组及给药
            1.2.3 小鼠取材
            1.2.4 血脂水平的检测
            1.2.5 主动脉大体油红O染色
            1.2.6 主动脉HE染色
            1.2.7 组织中总RNA提取
            1.2.8 RNA质量检测
            1.2.9 反转录合成c DNA
            1.2.10 基因芯片检测
            1.2.11 Gene Ontology和信号通路富集分析
            1.2.12 全局信号转导网络构建
            1.2.13 LncRNA对信号通路调控网络构建
            1.2.14 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)
            1.2.15 免疫组织化学染色
            1.2.16 统计学处理
        1.3 实验结果
            1.3.1 小鼠一般情况及体重
            1.3.2 各组小鼠血脂水平
            1.3.3 主动脉大体油红O染色结果
            1.3.4 主动脉HE染色结果
            1.3.5 总RNA提取完整性结果
            1.3.6 差异基因表达
            1.3.7 GO与Pathway富集分析
            1.3.8 Global Signal Transduction Network
            1.3.9 LncRNA Target Pathway Network
            1.3.10 QPCR
            1.3.11 免疫组织化学染色
        1.4 本章小结
    第2章 PKCβⅠ在淫羊藿苷干预主动脉平滑肌细胞增殖及迁移中的作用
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验试剂
            2.1.2 实验仪器
            2.1.3 实验用溶液配制
        2.2 实验方法
            2.2.1 HA-VSMCs的培养
            2.2.2 MTS检测HA-VSMCs增殖情况
            2.2.3 流式细胞术分析HA-VSMCs细胞周期
            2.2.4 Transwell实验检测HA-VSMCs迁移能力
            2.2.5 细胞中总RNA提取
                2.2.5.1 用品准备
                2.2.5.2 提取方法
                2.2.5.3 去基因组
            2.2.6 RNA质量检测
            2.2.7 反转录合成cDNA
            2.2.8 QPCR
            2.2.9 Western blot
            2.2.10 统计学处理
        2.3 实验结果
            2.3.1 ox-LDL诱导HA-VSMCs增殖、迁移的最适浓度
                2.3.1.1 ox-LDL诱导HA-VSMCs增殖的最适浓度
                2.3.1.2 ox-LDL诱导HA-VSMCs迁移的最适浓度
            2.3.2 ICA对ox-LDL诱导HA-VSMCs增殖、迁移及相关基因表达的作用
                2.3.2.1 ICA对ox-LDL诱导HA-VSMCs增殖的抑制作用
                2.3.2.2 ICA对ox-LDL诱导HA-VSMCs细胞周期的影响
                2.3.2.3 ICA对ox-LDL诱导HA-VSMCs迁移的抑制作用
                2.3.2.4 ICA对ox-LDL诱导HA-VSMCs相关基因m RNAs及蛋白表达的影响
            2.3.3 PKCβⅠ在ICA抑制HA-VSMCs增殖、迁移及相关基因表达中的作用
                2.3.3.1 PKCβⅠ在ICA抑制HA-VSMCs增殖中的作用
                2.3.3.2 PKCβⅠ在ICA阻滞HA-VSMCs细胞周期中的作用
                2.3.3.3 PKCβⅠ在ICA抑制HA-VSMCs迁移中的作用
                2.3.3.4 PKCβⅠ在ICA干预下对Cyclin D1和MMP-9 表达的影响
        2.4 本章小结
    第3章 淫羊藿苷通过lnc RNA H19调控PKCβⅠ抑制主动脉平滑肌细胞的增殖及迁移
        3.1 实验材料
            3.1.1 实验试剂
            3.1.2 实验仪器
            3.1.3 实验用溶液配制
        3.2 实验方法
            3.2.1 载体构建
            3.2.2 Si RNA合成
            3.2.3 细胞转染
            3.2.4 MTS、流式细胞术及Transwell实验
            3.2.5 细胞中总RNA提取、RNA质量检测、反转录合成c DNA及q PCR
            3.2.6 Western blot
            3.2.7 统计学处理
        3.3 实验结果
            3.3.1 ICA对ox-LDL诱导HA-VSMCs lnc RNA H19表达的影响
            3.3.2 pLVX-IRES-Neo-H19载体的鉴定及转染效率评价
                3.3.2.1 pLVX-IRES-Neo-H19载体的鉴定
                3.3.2.2 转染效率评价
            3.3.3 LncRNA H19对HA-VSMCs增殖、迁移及相关基因mRNA、蛋白表达的影响
                3.3.3.1 LncRNA H19对HA-VSMCs增殖的影响
                3.3.3.2 LncRNA H19对HA-VSMCs细胞周期的影响
                3.3.3.3 LncRNA H19对HA-VSMCs迁移的影响
                3.3.3.4 LncRNA H19对相关基因m RNA表达的影响
                3.3.3.5 LncRNA H19对相关基因蛋白表达的影响
            3.3.4 阻断PKCβⅠ对lnc RNA H19调控HA-VSMCs增殖、迁移及相关基因表达的影响
                3.3.4.1 阻断PKCβⅠ对lnc RNA H19调控HA-VSMCs增殖的影响
                3.3.4.2 阻断PKCβⅠ对lnc RNA H19调控HA-VSMCs细胞周期的影响
                3.3.4.3 阻断PKCβⅠ对lnc RNA H19调控HA-VSMCs迁移的影响
                3.3.4.4 阻断PKCβⅠ对lnc RNA H19调控PKCβⅠ、Cyclin D1和MMP-9 表达的影响
            3.3.5 抑制lnc RNA H19的表达对ICA干预HA-VSMCs增殖、迁移及相关基因m RNA、蛋白表达的影响
                3.3.5.1 Si-H19对ICA抑制HA-VSMCs增殖的作用
                3.3.5.2 Si-H19对ICA阻滞HA-VSMCs细胞周期的作用
                3.3.5.3 Si-H19对ICA抑制HA-VSMCs迁移的作用
                3.3.5.4 Si-H19对ICA干预下相关基因m RNAs表达的影响
                3.3.5.5 Si-H19对ICA干预下相关基因蛋白表达的影响
        3.4 本章小结
    第4章 讨论
        4.1 ICA对ApoE~(-/-)小鼠AS进展的阻滞作用
            4.1.1 ICA对小鼠体重、存活率及血脂水平的影响
            4.1.2 ICA能够有效减少Apo~(E-/-)小鼠主动脉斑块面积
        4.2 Cyclin D1、MMP-9 在ICA对细胞增殖、迁移干预效应中的作用
            4.2.1 Cyclin D1在细胞周期中的调控作用及ICA对细胞周期的干预效应
            4.2.2 MMP-9 在VSMCs迁移中的作用及ICA对细胞迁移的干预效应
        4.3 PKCβⅠ作为ICA抗AS作用核心节点的探讨
        4.4 LncRNA H19作为ICA抗AS作用靶点的探讨
第四篇 结论
创新点
今后工作展望
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
博士论文
[1]槐耳通过lncRNA-H19抑制乳腺癌进展的分子机制研究[D]. 王继军.山东大学 2017
[2]长链非编码RNA-p21（lincRNA-p21）在动脉粥样硬化中的作用和分子机制研究[D]. 吴庚泽.第三军医大学 2014



本文编号：3441603