沙眼衣原体感染相关lncRNA的筛选及其功能的初步研究
发布时间：2021-12-09 03:49
背景与目的:沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）是一种严格胞内寄生的革兰阴性菌,是世界范围内引起性传播感染的主要病原体之一。Ct生殖道感染通常呈慢性或无症状,容易形成上行性感染,导致严重并发症,例如附睾炎、前列腺炎、子宫内膜炎、输卵管炎、异位妊娠和不育。深入研究Ct的致病机制、寻找药物干预靶点,将为临床防治Ct感染提供重要的实验及理论依据。由于Ct胞内生存的特性,其在早期需要通过调控宿主相关信号通路、调节宿主细胞基因转录,改变宿主细胞生物学行为从而实现免疫逃避,完成胞内发育周期。本课题组前期发现的Ct唯一一种分泌型质粒蛋白pORF5被证明是Ct必不可少的致病因子,在衣原体感染早期阶段被分泌至宿主细胞胞浆中参与了衣原体致病过程。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lncRNA）为一类重要的基因表达调控元件。本研究以人宫颈癌上皮细胞为模式细胞,构建E型Ct持续性感染模型,在此模型基础上探究宿主在衣原体急性感染和持续性感染过程中差异表达的lncRNA和mRNA及其相关信号传导通路,随后分析pORF5对宿主lncRNA 和未折叠蛋白反应（Unfo...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：181 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
不同浓度IFN-γ对Ct子代感染率的影响
19图1-2不同浓度青霉素G对Ct子代感染率的影响Fig1-2EffectsofdifferentconcentrationsofPenicillinGontheinfectivityofC.trachomatisDifferentconcentrationsofPenicillinGwereaddedintomediumtodetecttheprogenyinfectivity.ThenumberofinclusionexpressedasIFUs.DNA(blue)wasstainedbyHoechst33258,inclusions(green)wasstainedbyCy2.*,P<0.05;**,P<0.01;***,P<0.001.3.2持续性感染状态下Ct包涵体的形态变化Ct持续性感染状态下包涵体形态发生显著变化。为探究不同诱导因素下包涵体形态的变化，分别用75U/mLIFN-γ和75U/mL青霉素G诱导持续性感染48h，IFA观察高倍镜下的包涵体形态。结果如图1-3所示，与急性感染相比，青霉素G诱导后包涵体体积明显减小，其结构相对致密；而IFN-γ诱导后，包涵体结构相对疏松，体积大小不一。计算不同诱导因素下的包涵体体积，结果表明，与急性感染相比（144.700±12.340）μm2，青霉素G诱导的持续性感染状态下包涵体体积（48.170±8.853）μm2显著减小（P<0.01）；IFN-γ诱导的持续性感染状态下包涵体体积偏小（89.330±15.560）μm2，出现大小不均一的现象（P<0.05），且大于青霉素G诱导的持续性感染包涵体体积（P<0.05）。
20图1-3持续感染下Ct包涵体的形态学变化（10×100）Fig1-3MorphologicalchangesofC.trachomatisinclusionbodiesindifferentpersistentinfection(10×100)Infectedcellswerefixedat48hpi.DNA(blue)wasstainedbyHoechst33258,inclusions(green)wasstainedbyCy2.Theareaofinclusionbodiesinpersistentstateinducedbydifferentreagents.TheareawascountedbyImageJsoftware.*,P<0.05;***,P<0.001.3.3移除持续性感染诱导因素后Ct感染能力的恢复IFN-γ和青霉素G诱导持续性感染24h时，更换不含诱导因素的新鲜培养基，继续培养16h后高倍镜观察衣原体生长形态。结果如图1-4所示，移除诱导因素后，包涵体可部分恢复正常形态。移除诱导因素后16h，收集衣原体，检测其子代感染率，结果如图1-4所示，移除诱导因素后，与急性感染组（32.400±1.800）×106相比，移除IFN-γ后子代IFU为（12.600±0.520）×106，移除青霉素G后子代IFU为（14.400±1.375）×106，而未移除IFN-γ组子代IFU为（3.600±0.520）×106，未移除青霉素G组子代IFU为（3.900±0.300）×106，以上结果表明，持续性感染状态下子代衣原体形成减少（P<0.05），移除诱导因素后，衣原体感染力得到部分恢复（P<0.05），移除IFN-γ和青霉素G后Ct感染力恢复无显著差异（P>0.05）。
本文编号：3529858
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：181 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
不同浓度IFN-γ对Ct子代感染率的影响
19图1-2不同浓度青霉素G对Ct子代感染率的影响Fig1-2EffectsofdifferentconcentrationsofPenicillinGontheinfectivityofC.trachomatisDifferentconcentrationsofPenicillinGwereaddedintomediumtodetecttheprogenyinfectivity.ThenumberofinclusionexpressedasIFUs.DNA(blue)wasstainedbyHoechst33258,inclusions(green)wasstainedbyCy2.*,P<0.05;**,P<0.01;***,P<0.001.3.2持续性感染状态下Ct包涵体的形态变化Ct持续性感染状态下包涵体形态发生显著变化。为探究不同诱导因素下包涵体形态的变化，分别用75U/mLIFN-γ和75U/mL青霉素G诱导持续性感染48h，IFA观察高倍镜下的包涵体形态。结果如图1-3所示，与急性感染相比，青霉素G诱导后包涵体体积明显减小，其结构相对致密；而IFN-γ诱导后，包涵体结构相对疏松，体积大小不一。计算不同诱导因素下的包涵体体积，结果表明，与急性感染相比（144.700±12.340）μm2，青霉素G诱导的持续性感染状态下包涵体体积（48.170±8.853）μm2显著减小（P<0.01）；IFN-γ诱导的持续性感染状态下包涵体体积偏小（89.330±15.560）μm2，出现大小不均一的现象（P<0.05），且大于青霉素G诱导的持续性感染包涵体体积（P<0.05）。
20图1-3持续感染下Ct包涵体的形态学变化（10×100）Fig1-3MorphologicalchangesofC.trachomatisinclusionbodiesindifferentpersistentinfection(10×100)Infectedcellswerefixedat48hpi.DNA(blue)wasstainedbyHoechst33258,inclusions(green)wasstainedbyCy2.Theareaofinclusionbodiesinpersistentstateinducedbydifferentreagents.TheareawascountedbyImageJsoftware.*,P<0.05;***,P<0.001.3.3移除持续性感染诱导因素后Ct感染能力的恢复IFN-γ和青霉素G诱导持续性感染24h时，更换不含诱导因素的新鲜培养基，继续培养16h后高倍镜观察衣原体生长形态。结果如图1-4所示，移除诱导因素后，包涵体可部分恢复正常形态。移除诱导因素后16h，收集衣原体，检测其子代感染率，结果如图1-4所示，移除诱导因素后，与急性感染组（32.400±1.800）×106相比，移除IFN-γ后子代IFU为（12.600±0.520）×106，移除青霉素G后子代IFU为（14.400±1.375）×106，而未移除IFN-γ组子代IFU为（3.600±0.520）×106，未移除青霉素G组子代IFU为（3.900±0.300）×106，以上结果表明，持续性感染状态下子代衣原体形成减少（P<0.05），移除诱导因素后，衣原体感染力得到部分恢复（P<0.05），移除IFN-γ和青霉素G后Ct感染力恢复无显著差异（P>0.05）。
本文编号：3529858
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