高尿酸血症动物模型构建及相关并发症研究
发布时间：2021-12-11 00:05
目的:调查在痛风患者中骨侵蚀的发病率和相关因素;检测毛壳素对痛风的作用并探索其机制;构建高尿酸血症动物模型,观察其血尿酸水平及高尿酸血症相关肾脏损害、糖脂代谢的情况及对降尿酸药物的敏感性。方法:（1）收集在本院内分泌门诊就诊的痛风患者的一般情况、生化指标。通过超声扫描患者的下肢关节包括膝关节、踝关节、跗骨间关节、跖趾关节等。痛风的诊断根据2015年的ACR/EULAR痛风诊断标准,骨侵蚀通过有经验的影像学医生通过关节超声进行诊断。计算在痛风患者中骨侵蚀的患病率及好发部位,通过二元logistic回归分析筛选痛风患者中骨侵蚀的独立相关因素。（2）分离小鼠骨髓来源的巨噬细胞,检测毛壳素对炎症细胞因子IL-1β表达的影响,进一步探讨其机制,检测毛壳素对糖酵解通路及NLRP3炎症小体激活的作用;在体外观察毛壳素对单尿酸钠盐结晶（MSU）诱导的小鼠腹膜炎和关节炎的影响。（3）通过CRISPR-Cas9技术敲除Wistar大鼠的尿酸氧化酶（urate oxidase,UOX）基因,每4周采集空腹血,检测其血尿酸、血脂、肌酐和尿素氮水平;收集24小时尿液检测尿量和尿蛋白水平;肾脏病理包括HE、α-S...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
痛风性关节炎超声超声下征象
毛壳素抑制NLCaspase-1β-tubulin
上海交通大学2015级博士研究生学位论文 41 图2.毛壳素抑制NLRP3炎症小体的激活Figure2.ChaetocininhibitsNLRP3infammasomeactivation(A)Westernblot结果；(B)免疫荧光检测ASC斑点；(C)免疫荧光结果定量。3.毛壳素抑制TLR4信号传导并减少前IL-1β的产生在体外，MSU诱导的IL-1β释放需要称为“启动”的过程以产生炎性细胞因子的前体，该过程由TLR配体触发。在体外TLR信号刺激上调巨噬细胞中NLRP3的表达[23]。在本研究中，我们使用脂多糖（LPS）（一种TLR4激动剂）用于激活TLR4。如图3A所示，LPS显着上调NLRP3和pro-IL-1β的表达，该过程可以被毛壳素逆转。qPCR结果显示，LPS处理的BMDM细胞中NLRP3和Il1b的mRNA水平显著上升，而毛壳素预处理能抑制这种改变（图3B和C）。然后我们分析了Tnf的mRNA水平，Tnf是LPS经典上调的基因。我们发现该基因的mRNA水平在LPS组中显着更高，并且毛壳素逆转了这些效应（图3D）。通过ELISA检测细胞上清中TNF-α的水平，结果显示，在毛壳素预处理的BMDM细胞上清中TNF-α的水平显著低于仅用LPS处理的细胞（图3E）。然而，TLR配体引起炎性细胞因子前体产生的机制尚不完全清楚。据报道，在LPS处理过程中MAPKs的磷酸化发生了变化[24]，因此我们研究了是否是否会影响这一过程。如图3F所示，LPS处理后p38MAPK，ERK和JNK的磷酸化水平显著升高，但是，毛壳素并没有对这一过程产生影响。因此，我们接下来寻找毛壳素抑制IL-1β前体表达的其他机制。AChaetocin---+Caspase-1β-tubulinASCLPS-+++MSU--++BC010203040Specksnumber*LPS-+++MSU--++Chaetocin---+***
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国高尿酸血症相关疾病诊疗多学科专家共识[J]. 李林,朱小霞,戴宇翔,林寰东,戴若莲,薛鸾,樊松. 中华内科杂志. 2017 (03)
[2]高尿酸血症的患病情况及相关因素分析[J]. 陈涛,李卫,王杨,胡泊,徐涛,刘冰,孙毅. 中华临床医师杂志(电子版). 2012(13)
[3]镇海地区机关事业单位人群血尿酸水平调查分析[J]. 曹利君,洪晓平. 检验医学. 2009(11)
[4]西宁地区职业人群高尿酸血症患病率调查与饮食干预[J]. 李艳梅. 青海医药杂志. 2009(08)
[5]2112例铁路职工高尿酸血症患病率及相关疾病的分析[J]. 廖予婕. 检验医学与临床. 2009(11)
[6]体检人群高尿酸血症患病率及血脂 血糖异常情况的调查分析[J]. 韩献华,姚学颖,房兴胜. 山西医药杂志. 2008(05)
[7]青岛市沿海社区人群高尿酸血症与痛风的流行病学调查[J]. 姚宗良,姜胜杰,刘慧,万希琴,丁志高. 中华风湿病学杂志. 2007(11)
[8]宁波市某石化企业员工高尿酸血症和痛风患病率调查[J]. 毛玉山,周丽诺,叶红英,黄童,陈长喜,杜娟,洪中立,胡仁明. 中华内分泌代谢杂志. 2006(04)
[9]上海市黄浦区社区高尿酸血症与痛风流行病学调查[J]. 杜蕙,陈顺乐,王元,徐力青. 中华风湿病学杂志. 1998(02)
本文编号：3533642
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
痛风性关节炎超声超声下征象
毛壳素抑制NLCaspase-1β-tubulin
上海交通大学2015级博士研究生学位论文 41 图2.毛壳素抑制NLRP3炎症小体的激活Figure2.ChaetocininhibitsNLRP3infammasomeactivation(A)Westernblot结果；(B)免疫荧光检测ASC斑点；(C)免疫荧光结果定量。3.毛壳素抑制TLR4信号传导并减少前IL-1β的产生在体外，MSU诱导的IL-1β释放需要称为“启动”的过程以产生炎性细胞因子的前体，该过程由TLR配体触发。在体外TLR信号刺激上调巨噬细胞中NLRP3的表达[23]。在本研究中，我们使用脂多糖（LPS）（一种TLR4激动剂）用于激活TLR4。如图3A所示，LPS显着上调NLRP3和pro-IL-1β的表达，该过程可以被毛壳素逆转。qPCR结果显示，LPS处理的BMDM细胞中NLRP3和Il1b的mRNA水平显著上升，而毛壳素预处理能抑制这种改变（图3B和C）。然后我们分析了Tnf的mRNA水平，Tnf是LPS经典上调的基因。我们发现该基因的mRNA水平在LPS组中显着更高，并且毛壳素逆转了这些效应（图3D）。通过ELISA检测细胞上清中TNF-α的水平，结果显示，在毛壳素预处理的BMDM细胞上清中TNF-α的水平显著低于仅用LPS处理的细胞（图3E）。然而，TLR配体引起炎性细胞因子前体产生的机制尚不完全清楚。据报道，在LPS处理过程中MAPKs的磷酸化发生了变化[24]，因此我们研究了是否是否会影响这一过程。如图3F所示，LPS处理后p38MAPK，ERK和JNK的磷酸化水平显著升高，但是，毛壳素并没有对这一过程产生影响。因此，我们接下来寻找毛壳素抑制IL-1β前体表达的其他机制。AChaetocin---+Caspase-1β-tubulinASCLPS-+++MSU--++BC010203040Specksnumber*LPS-+++MSU--++Chaetocin---+***
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国高尿酸血症相关疾病诊疗多学科专家共识[J]. 李林,朱小霞,戴宇翔,林寰东,戴若莲,薛鸾,樊松. 中华内科杂志. 2017 (03)
[2]高尿酸血症的患病情况及相关因素分析[J]. 陈涛,李卫,王杨,胡泊,徐涛,刘冰,孙毅. 中华临床医师杂志(电子版). 2012(13)
[3]镇海地区机关事业单位人群血尿酸水平调查分析[J]. 曹利君,洪晓平. 检验医学. 2009(11)
[4]西宁地区职业人群高尿酸血症患病率调查与饮食干预[J]. 李艳梅. 青海医药杂志. 2009(08)
[5]2112例铁路职工高尿酸血症患病率及相关疾病的分析[J]. 廖予婕. 检验医学与临床. 2009(11)
[6]体检人群高尿酸血症患病率及血脂 血糖异常情况的调查分析[J]. 韩献华,姚学颖,房兴胜. 山西医药杂志. 2008(05)
[7]青岛市沿海社区人群高尿酸血症与痛风的流行病学调查[J]. 姚宗良,姜胜杰,刘慧,万希琴,丁志高. 中华风湿病学杂志. 2007(11)
[8]宁波市某石化企业员工高尿酸血症和痛风患病率调查[J]. 毛玉山,周丽诺,叶红英,黄童,陈长喜,杜娟,洪中立,胡仁明. 中华内分泌代谢杂志. 2006(04)
[9]上海市黄浦区社区高尿酸血症与痛风流行病学调查[J]. 杜蕙,陈顺乐,王元,徐力青. 中华风湿病学杂志. 1998(02)
本文编号：3533642
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