基于NF-κB及OPG/RANKL/RANK信号通路探究青蒿琥酯对骨关节炎的作用及机制
发布时间：2022-02-15 17:25
目的:（1）通过构建骨关节炎软骨细胞模型并给予不同浓度青蒿琥酯干预探究青蒿琥酯对软骨细胞分解代谢、炎症反应、凋亡及NF-κB信号通路的影响。（2）通过构建骨关节炎小鼠模型并给予不同剂量青蒿琥酯干预探讨青蒿琥酯对骨关节炎软骨下骨中OPG/RANKL/RANK通路及TGF-β/Smad2/3通路的影响。（3）探究青蒿琥酯对骨关节炎软骨下骨异常增生的CD31hiEmcnhi血管的影响。方法:（1）1.ATDC5细胞经ITS诱导后,用阿尔新蓝染色和qRT-PCR测定ATDC5细胞成软骨水平。2.通过CCK-8和PE-Annexin V/7-ADD双染评估青蒿琥酯对正常的和IL-1β干预的软骨细胞活性影响。3.通过RT-PCR和Western Blot检测青蒿琥酯对IL-1β干预的软骨细胞中分解代谢、炎症反应及细胞凋亡的影响。4.通过Western Blot评估青蒿琥酯对NF-κB通路的影响。（2）1.预实验设立6组,即假手术组,ACLT+安慰剂组,ACLT+4种计量的青蒿琥酯组。术后评估软骨退变情况确定最佳用药剂量。正式试验设立3组,即假手术组,AL...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：134 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
阿尔新蓝染色
新疆医科大学博士学位论文26图1-1阿尔新蓝染色Fig.1-1Alcianbluestaining图1-2qPCR定量不同诱导时间点Ⅱ型胶原与Ⅹ型胶原的表达水平Fig.1-2ExpressionlevelsofTypeIICollagenandTypeXCollagendetectedbyqPCRatdifferenttimpoints2.2青蒿琥酯对软骨样ATDC5细胞活性的影响本研究通过CCK-8实验分析不同干预措施对软骨样ATDC5细胞活性的影响。首先，我们进行单独用药对细胞活性的影响评估。实验结果表明，青蒿琥酯的药物浓度在3.125-12.5μM剂量范围内，软骨样ATDC5细胞活性与无药物干预的对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。当青蒿琥酯的浓度升高至25μM和50μM时，软骨样ATDC5细胞活性急剧下降，且与无药物干预的对照组相比，差异有统计学意义（P<0.01）（图1-3）。随后，我们进行青蒿琥酯对IL-1β干预的软骨样ATDC5细胞活性的影响评估。实验结果发现，与正常对照组相比，IL-1β明显抑制了软骨样
27ATDC5的细胞活性。在此基础上，随着不同浓度青蒿琥酯（药物剂量在3.125-12.5μM范围内）的干预，软骨样ATDC5细胞活性随药物梯度的增加而增加。然而，当青蒿琥酯浓度达到25μM时，细胞活性出现不升反降的抑制现象，并且在50μM时，细胞活性将至最低（图1-4）。根据以上实验结果，我们选取3.125μM，6.25μM和12.5μM青蒿琥酯进行后续实验。图1-3青蒿琥酯对ATDC5软骨样细胞活性的影响Fig.1-3EffectofARTonthecellviabilityofchondrocyticATDC5cells**对照组与青蒿琥酯组相比，P<0.01**ThecomparisonbetweenTGF-β1groupandcontrolgroup,P<0.01图1-4不同浓度青蒿琥酯与IL-1β联合培养24小时后的ATDC5软骨样细胞活性Fig.1-4ChondrocyticATDC5cellsweretreatedwithIL-1βplusARTatdifferentconcentrationsfor24h#对照组与IL-1β组相比，P<0.05；*IL-1β组与青蒿琥酯组相比，P<0.05；**IL-1β组与青蒿琥酯组相比，P<0.01#ThecomparisonbetweencontrolgroupandIL-1βgroup,P<0.05;*ThecomparisonbetweenIL-1βgroupandARTgroup,P<0.05;**ThecomparisonbetweenIL-1βgroupandARTgroup,P<0.01新疆医科大学博士学位论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清基质金属蛋白酶3水平与早期类风湿关节炎病情评估[J]. 刘梦珂,王露辰,胡凡磊. 北京大学学报(医学版). 2018(06)
本文编号：3627030
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：134 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
阿尔新蓝染色
新疆医科大学博士学位论文26图1-1阿尔新蓝染色Fig.1-1Alcianbluestaining图1-2qPCR定量不同诱导时间点Ⅱ型胶原与Ⅹ型胶原的表达水平Fig.1-2ExpressionlevelsofTypeIICollagenandTypeXCollagendetectedbyqPCRatdifferenttimpoints2.2青蒿琥酯对软骨样ATDC5细胞活性的影响本研究通过CCK-8实验分析不同干预措施对软骨样ATDC5细胞活性的影响。首先，我们进行单独用药对细胞活性的影响评估。实验结果表明，青蒿琥酯的药物浓度在3.125-12.5μM剂量范围内，软骨样ATDC5细胞活性与无药物干预的对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。当青蒿琥酯的浓度升高至25μM和50μM时，软骨样ATDC5细胞活性急剧下降，且与无药物干预的对照组相比，差异有统计学意义（P<0.01）（图1-3）。随后，我们进行青蒿琥酯对IL-1β干预的软骨样ATDC5细胞活性的影响评估。实验结果发现，与正常对照组相比，IL-1β明显抑制了软骨样
27ATDC5的细胞活性。在此基础上，随着不同浓度青蒿琥酯（药物剂量在3.125-12.5μM范围内）的干预，软骨样ATDC5细胞活性随药物梯度的增加而增加。然而，当青蒿琥酯浓度达到25μM时，细胞活性出现不升反降的抑制现象，并且在50μM时，细胞活性将至最低（图1-4）。根据以上实验结果，我们选取3.125μM，6.25μM和12.5μM青蒿琥酯进行后续实验。图1-3青蒿琥酯对ATDC5软骨样细胞活性的影响Fig.1-3EffectofARTonthecellviabilityofchondrocyticATDC5cells**对照组与青蒿琥酯组相比，P<0.01**ThecomparisonbetweenTGF-β1groupandcontrolgroup,P<0.01图1-4不同浓度青蒿琥酯与IL-1β联合培养24小时后的ATDC5软骨样细胞活性Fig.1-4ChondrocyticATDC5cellsweretreatedwithIL-1βplusARTatdifferentconcentrationsfor24h#对照组与IL-1β组相比，P<0.05；*IL-1β组与青蒿琥酯组相比，P<0.05；**IL-1β组与青蒿琥酯组相比，P<0.01#ThecomparisonbetweencontrolgroupandIL-1βgroup,P<0.05;*ThecomparisonbetweenIL-1βgroupandARTgroup,P<0.05;**ThecomparisonbetweenIL-1βgroupandARTgroup,P<0.01新疆医科大学博士学位论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清基质金属蛋白酶3水平与早期类风湿关节炎病情评估[J]. 刘梦珂,王露辰,胡凡磊. 北京大学学报(医学版). 2018(06)
本文编号：3627030
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