半枝莲和白花蛇舌草提取物对HBV相关性肝细胞癌的作用及对circRNAs差异表达的影响
发布时间：2022-02-24 19:44
目的:探索半枝莲、白花蛇舌草、半枝莲+白花蛇舌草提取物在体内外水平上的抗肝细胞癌（HCC）活性、抗HBV活性及从circ RNAs调控角度,探讨半白提取物对HCC生长的可能分子作用机制,为半白提取物治疗HCC的作用机制研究提供理论基础。方法:本研究采用完全随机的实验设计类型,1.分别通过乙醇加热回流的方法制备半枝莲、白花蛇舌草、半枝莲+白花蛇舌草提取物,并进行总黄酮及其活性成分木犀草素和芹菜素含量测定;2.通过CCK-8、平板克隆形成、流式细胞术、Transwell小室、细胞免疫荧光及裸鼠皮下接种Hep3B移植瘤模型等实验,明确半白提取物对HBV相关性Hep G2.2.15和Hep3B细胞生长、侵袭、转移、HBV活性及裸鼠移植瘤的影响;3.通过高通量测序技术对circ RNAs的差异表达进行初步检测,观察半白提取物调控Hep3B细胞circ RNAs差异表达谱变化,应用生物信息学方法预测靶基因、GO功能和KEGG信号通路,并构建circ RNA-mi RNA-gene共表达网络图。结果:1.半枝莲、白花蛇舌草及半枝莲+白花蛇舌草提取物的总黄酮含量分别为（5.69±0.34）%、（2.4...
【文章来源】：上海中医药大学上海市
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
英文缩略词索引
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 半白提取物对肝细胞癌体内外生长的影响
1 材料与方法
1.1 药物、细胞株和动物
1.2 主要试剂和溶液配制
1.3 主要仪器和耗材
1.4 半枝莲和白花蛇舌草乙醇提取物的制备
1.5 细胞培养
1.6 CCK-8实验
1.7 平板克隆形成实验
1.8 细胞周期
1.9 细胞凋亡
1.10 Western Blot测定相关蛋白的表达
1.11 细胞划痕实验
1.12 Transwell小室迁移和侵袭实验
1.13 细胞形态和自噬小体超微结构的观察
1.14 免疫荧光检测自噬相关蛋白的表达
1.15 RT-PCR检测细胞中HBsAg、HBV-DNA的表达
1.16 裸鼠成瘤实验
1.17 统计学处理
2 结果
2.1 半枝莲和白花蛇舌草乙醇提取物的制备
2.2 半白提取物对HepG2.2.15和Hep3B细胞生长的影响
2.3 半白提取物对细胞平板克隆的影响
2.4 半白提取物对细胞周期的影响
2.5 半白提取物对细胞凋亡的影响
2.6 半白提取物对细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响
2.7 半白提取物对细胞划痕愈合的影响
2.8 半白提取物对细胞Transwell迁移的影响
2.9 半白提取物对细胞Transwell侵袭的影响
2.10 半白提取物对细胞形态和自噬体超微结构的影响
2.11 半白提取物对细胞自噬相关蛋白表达的影响
2.12 半白提取物对裸鼠致瘤性的影响
2.13 半白提取物对细胞、肝组织、血清和移植瘤中HBV活性的影响
第二部分 半白提取物对circRNAs差异表达的影响
1 材料与方法
1.1 药物和细胞株
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 样品及分组信息
1.5 样品准备
1.6 文库构建
1.7 簇生成和测序
1.8 生物信息学分析
2 结果
2.1 circRNAs转录组比对
2.2 差异circRNAs表达谱和鉴定
2.3 差异circRNAs聚类分析
2.4 差异表达circRNAs来源基因GO功能分析
2.5 差异表达circRNAs来源基因KEGG通路分析
2.6 circRNA-miRNA相互作用预测
2.7 circRNA-miRNA-gene共表达网络构建
2.8 circRNAs可视化
讨论
1 现代医学对肝细胞癌的认识
1.1 流行病学研究
1.2 发病机理
1.3 肝细胞癌的治疗
2 中医药抗肝细胞癌研究概述
2.1 中医药抗肝细胞癌机制的研究
2.2 中医药抗肝细胞癌的现状
3 本次研究的理论和实验基础
3.1 半枝莲治疗肝细胞癌的临床及实验研究
3.2 白花蛇舌草治疗肝细胞癌的临床及实验研究
3.3 半枝莲和白花蛇舌草抗肝癌的研究基础
3.4 CircRNAs对肝细胞癌的研究意义
3.5 从CircRNAs角度研究半白提取物影响HCC生长的背景
4 本次研究结果分析
4.1 半白提取物对肝细胞癌体内外生长的结果分析
4.2 半白提取物对circRNAs差异表达的结果分析
5 不足和展望
创新点
结论
致谢
参考文献
附录
附录一 :HepG2.2.15细胞部分结果
附录二 :文库制备的接头和引物
附录三 :综述 半枝莲和白花蛇舌草抗肝细胞癌作用及机制的研究进展
参考文献
附录四 :在校期间发表学术论文、获奖情况及参加学术会议
【参考文献】：
期刊论文
[1]白花蛇舌草和半枝莲总黄酮提取工艺优化及抗氧化性研究[J]. 张蜀艳,蒲建萍,李政. 食品研究与开发. 2019(04)
[2]白花蛇舌草中黄酮、多酚、多糖提取工艺及抗氧化研究[J]. 杨新周,田孟华,杨子仙,马艳粉,田先娇. 化学研究与应用. 2019(01)
[3]原发性肝癌证型分布及用药分析[J]. 钱丽丽,赵向丽,冯晓军,黄雪,张树辉. 河南中医. 2018(08)
[4]姜黄素通过活化PI3K/Akt信号通路逆转肝癌耐药细胞株Bel7402/ADR的耐药性[J]. 魏蔚,刘玉华. 中国老年学杂志. 2018(12)
[5]半枝莲水提液和去纳米颗粒水提液在体内外抗肝肿瘤作用的对比研究[J]. 黄新伟,郑建华,陈文滨,程金生. 中国医院用药评价与分析. 2018(05)
[6]一贯煎治疗肝癌的分子机制生物信息学分析[J]. 单思,谢斌,严小军,刘红宁. 中华中医药杂志. 2018(05)
[7]姜黄素联合声光动力疗法对人肝癌HepG2细胞的作用及机制研究[J]. 朱文婷,许桐瑛,李隆敏,王玉凤,杨维,胡佳荷,谢蕊,白玉贤. 中国激光医学杂志. 2018(02)
[8]中药半枝莲有效成分抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 吴晓龙,崔思远,王琰,徐瑞荣. 中华中医药杂志. 2018(04)
[9]央芪膏外敷配合深部热疗对中晚期肝癌患者生存质量、免疫功能及Survivin蛋白的影响[J]. 唐万和,王熙,余智勇,周勇,孙易娜,何威华,佘茁萃,卢舜,王红荣,李娜,唐思思. 中医学报. 2018(02)
[10]白花蛇舌草对肝癌的作用机制研究[J]. 陈晨,张吉菲,房鑫. 河南中医. 2018(01)
博士论文
[1]索拉菲尼联合薏苡仁油治疗肝细胞肝癌的疗效及机制研究[D]. 陈琳.兰州大学 2018
[2]基于c-FLIP和内质网应激通路相互作用探讨解毒方改善索拉非尼耐药的作用机制[D]. 刘栋.第二军医大学 2017
[3]小柴胡汤调控miR-122逆转肝癌多药耐药的作用机制[D]. 赵锦燕.福建中医药大学 2016
[4]人肝细胞癌发生机制的研究[D]. 徐立斌.中国协和医科大学 2005
硕士论文
[1]乙肝病毒X蛋白对肝癌HepG2细胞DNA双链断裂修复的影响[D]. 刘庆.华中科技大学 2011
本文编号：3643391
【文章来源】：上海中医药大学上海市
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
英文缩略词索引
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 半白提取物对肝细胞癌体内外生长的影响
1 材料与方法
1.1 药物、细胞株和动物
1.2 主要试剂和溶液配制
1.3 主要仪器和耗材
1.4 半枝莲和白花蛇舌草乙醇提取物的制备
1.5 细胞培养
1.6 CCK-8实验
1.7 平板克隆形成实验
1.8 细胞周期
1.9 细胞凋亡
1.10 Western Blot测定相关蛋白的表达
1.11 细胞划痕实验
1.12 Transwell小室迁移和侵袭实验
1.13 细胞形态和自噬小体超微结构的观察
1.14 免疫荧光检测自噬相关蛋白的表达
1.15 RT-PCR检测细胞中HBsAg、HBV-DNA的表达
1.16 裸鼠成瘤实验
1.17 统计学处理
2 结果
2.1 半枝莲和白花蛇舌草乙醇提取物的制备
2.2 半白提取物对HepG2.2.15和Hep3B细胞生长的影响
2.3 半白提取物对细胞平板克隆的影响
2.4 半白提取物对细胞周期的影响
2.5 半白提取物对细胞凋亡的影响
2.6 半白提取物对细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响
2.7 半白提取物对细胞划痕愈合的影响
2.8 半白提取物对细胞Transwell迁移的影响
2.9 半白提取物对细胞Transwell侵袭的影响
2.10 半白提取物对细胞形态和自噬体超微结构的影响
2.11 半白提取物对细胞自噬相关蛋白表达的影响
2.12 半白提取物对裸鼠致瘤性的影响
2.13 半白提取物对细胞、肝组织、血清和移植瘤中HBV活性的影响
第二部分 半白提取物对circRNAs差异表达的影响
1 材料与方法
1.1 药物和细胞株
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 样品及分组信息
1.5 样品准备
1.6 文库构建
1.7 簇生成和测序
1.8 生物信息学分析
2 结果
2.1 circRNAs转录组比对
2.2 差异circRNAs表达谱和鉴定
2.3 差异circRNAs聚类分析
2.4 差异表达circRNAs来源基因GO功能分析
2.5 差异表达circRNAs来源基因KEGG通路分析
2.6 circRNA-miRNA相互作用预测
2.7 circRNA-miRNA-gene共表达网络构建
2.8 circRNAs可视化
讨论
1 现代医学对肝细胞癌的认识
1.1 流行病学研究
1.2 发病机理
1.3 肝细胞癌的治疗
2 中医药抗肝细胞癌研究概述
2.1 中医药抗肝细胞癌机制的研究
2.2 中医药抗肝细胞癌的现状
3 本次研究的理论和实验基础
3.1 半枝莲治疗肝细胞癌的临床及实验研究
3.2 白花蛇舌草治疗肝细胞癌的临床及实验研究
3.3 半枝莲和白花蛇舌草抗肝癌的研究基础
3.4 CircRNAs对肝细胞癌的研究意义
3.5 从CircRNAs角度研究半白提取物影响HCC生长的背景
4 本次研究结果分析
4.1 半白提取物对肝细胞癌体内外生长的结果分析
4.2 半白提取物对circRNAs差异表达的结果分析
5 不足和展望
创新点
结论
致谢
参考文献
附录
附录一 :HepG2.2.15细胞部分结果
附录二 :文库制备的接头和引物
附录三 :综述 半枝莲和白花蛇舌草抗肝细胞癌作用及机制的研究进展
参考文献
附录四 :在校期间发表学术论文、获奖情况及参加学术会议
【参考文献】：
期刊论文
[1]白花蛇舌草和半枝莲总黄酮提取工艺优化及抗氧化性研究[J]. 张蜀艳,蒲建萍,李政. 食品研究与开发. 2019(04)
[2]白花蛇舌草中黄酮、多酚、多糖提取工艺及抗氧化研究[J]. 杨新周,田孟华,杨子仙,马艳粉,田先娇. 化学研究与应用. 2019(01)
[3]原发性肝癌证型分布及用药分析[J]. 钱丽丽,赵向丽,冯晓军,黄雪,张树辉. 河南中医. 2018(08)
[4]姜黄素通过活化PI3K/Akt信号通路逆转肝癌耐药细胞株Bel7402/ADR的耐药性[J]. 魏蔚,刘玉华. 中国老年学杂志. 2018(12)
[5]半枝莲水提液和去纳米颗粒水提液在体内外抗肝肿瘤作用的对比研究[J]. 黄新伟,郑建华,陈文滨,程金生. 中国医院用药评价与分析. 2018(05)
[6]一贯煎治疗肝癌的分子机制生物信息学分析[J]. 单思,谢斌,严小军,刘红宁. 中华中医药杂志. 2018(05)
[7]姜黄素联合声光动力疗法对人肝癌HepG2细胞的作用及机制研究[J]. 朱文婷,许桐瑛,李隆敏,王玉凤,杨维,胡佳荷,谢蕊,白玉贤. 中国激光医学杂志. 2018(02)
[8]中药半枝莲有效成分抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 吴晓龙,崔思远,王琰,徐瑞荣. 中华中医药杂志. 2018(04)
[9]央芪膏外敷配合深部热疗对中晚期肝癌患者生存质量、免疫功能及Survivin蛋白的影响[J]. 唐万和,王熙,余智勇,周勇,孙易娜,何威华,佘茁萃,卢舜,王红荣,李娜,唐思思. 中医学报. 2018(02)
[10]白花蛇舌草对肝癌的作用机制研究[J]. 陈晨,张吉菲,房鑫. 河南中医. 2018(01)
博士论文
[1]索拉菲尼联合薏苡仁油治疗肝细胞肝癌的疗效及机制研究[D]. 陈琳.兰州大学 2018
[2]基于c-FLIP和内质网应激通路相互作用探讨解毒方改善索拉非尼耐药的作用机制[D]. 刘栋.第二军医大学 2017
[3]小柴胡汤调控miR-122逆转肝癌多药耐药的作用机制[D]. 赵锦燕.福建中医药大学 2016
[4]人肝细胞癌发生机制的研究[D]. 徐立斌.中国协和医科大学 2005
硕士论文
[1]乙肝病毒X蛋白对肝癌HepG2细胞DNA双链断裂修复的影响[D]. 刘庆.华中科技大学 2011
本文编号：3643391
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