JQ1与抗CD47抗体/纳米化CA4联用抗淋巴瘤效应及相关机制的研究
发布时间：2022-07-29 15:56
背景及目的:目前非霍奇金淋巴瘤已稳居恶性肿瘤发病率、致死率的前10位,严重威胁人们的健康,侵袭性B细胞淋巴瘤是淋巴瘤的重要组成部分,也是目前此领域研究的重点。虽然利妥昔单抗、硼替佐米、来那度胺等药物的出现已经显著改善了侵袭性B细胞淋巴瘤患者的预后,但是化疗依然有着不可取代的地位,化疗相关不良反应以及肿瘤最终的复发进展依然是困扰淋巴瘤医生和患者的重要问题。因此,新药或新的治疗方案的研发以及对传统化疗药物的改造是目前淋巴瘤研究的重点。本研究探讨BET蛋白抑制剂JQ1对淋巴瘤细胞的毒性及其对巨噬细胞功能的影响,并用聚谷氨酸接枝甲氧基聚乙二醇担载血管阻断剂CA4,探讨JQ1与抗CD47抗体联用治疗人Burkitt淋巴瘤,JQ1与纳米化CA4联用治疗A20鼠B细胞淋巴瘤的疗效、作用机制及安全性,旨在为淋巴瘤的治疗提供新的选择。方法:1.细胞实验:用CCK-8法检测JQ1对Raji、Pfeiffer、BJAB和A20这4种淋巴瘤细胞活性的影响;用Annexin-FITC/PI双染法检测JQ1对Raji、Pfeiffer和A20细胞凋亡的影响;用流式细胞术探讨JQ1对Raji、Pfeiffer和A2...
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
第1章 绪论
1.1 侵袭性B细胞淋巴瘤
1.1.1 侵袭性B细胞淋巴瘤的特征
1.1.2 侵袭性B细胞淋巴瘤的治疗现状
1.1.3 肿瘤相关巨噬细胞及其与B细胞NHL预后的关系
1.2 BET蛋白抑制剂JQ1
1.2.1 JQ1的结构及作用机制
1.2.2 JQ1的抗淋巴瘤作用
1.2.3 JQ1对肿瘤免疫微环境的影响
1.2.4 对JQ1耐药的产生及相关药物联用方案
1.3 抗CD47抗体
1.3.1 抗CD47抗体的抗肿瘤作用机制
1.3.2 抗CD47抗体在淋巴瘤中的应用
1.4 血管阻断剂
1.4.1 肿瘤相关血管的特征及血管阻断剂的抗肿瘤作用机制
1.4.2 淋巴瘤中的血管分布情况及临床意义
1.4.3 CA4的抗肿瘤治疗现状
1.4.4 CA4对肿瘤免疫微环境的影响
1.5 抗肿瘤纳米药物
1.5.1 纳米药物的定义及优势
1.5.2 纳米药物抗肿瘤作用的机制及影响因素
1.5.3 抗肿瘤纳米药的研究现状
1.6 本课题的立题依据、研究内容及主要的创新点
1.6.1 立题依据及研究内容
1.6.2 创新点
第2章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 淋巴瘤细胞系
2.1.2 药品
2.1.3 试剂
2.2 主要设备
2.3 实验动物
2.4 实验方法
2.4.1 CA4-NPs载药量的检测
2.4.2 CA4-NPs粒径的检测
2.4.3 CA4-NPs的释放
2.4.4 细胞培养
2.4.5 抗CD47抗体的制备及纯度检测
2.4.6 CCK-8 法细胞增殖检测
2.4.7 Annexin V-FITC/PI法细胞凋亡检测
2.4.8 细胞周期检测
2.4.9 JQ对细胞表面CD47、PD-L1表达水平的影响
2.4.10 超纯RNA的提取
2.4.11 RT-PCR
2.4.12 吞噬实验
2.4.13 CCK-8 法检测JQ1与抗CD47抗体联用对淋巴瘤细胞增殖的影响
2.4.14 酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immuno SorbentAssay,ELISA)检测细胞因子的水平
2.4.15 JQ1对巨噬细胞极化的影响
2.4.16 体内抑瘤实验
2.4.17 小鼠血细胞计数及肝功、肾功检测
2.4.18 组织石蜡包埋切片及HE染色
2.4.19 免疫组织化学染色
2.5 统计学方法
2.6 主要技术路线
第3章 JQ1与抗CD47抗体联用治疗人BURKITT淋巴瘤的效果及相关机制研究
3.1 引言
3.2 结果
3.2.1 JQ1对Raji、Pfeiffer和BJAB细胞增殖的影响
3.2.2 JQ1对Raji、Pfeiffer细胞凋亡的影响
3.2.3 JQ1对Raji、Pfeiffer细胞周期的影响
3.2.4 JQ1对Raji、Pfeiffer表面CD47表达水平的影响
3.2.5 JQ1对Raji细胞中C-MYC、CD47基因转录水平的影响
3.2.6 JQ1对人巨噬细胞极化的影响
3.2.7 JQ1与抗CD47抗体联用对人巨噬细胞吞噬作用的影响
3.2.8 JQ1与抗CD47抗体联用对Raji、BJAB细胞存活率的影响
3.2.9 JQ1与抗CD47抗体联用的抑瘤效果
3.2.10 JQ1与抗CD47抗体联用的相关毒性
3.2.11 JQ1与抗CD47抗体对肿瘤组织中Ki-67 表达水平的影响
3.3 讨论
3.4 本章小结
第4章 JQ1与CA4-NPS联用治疗鼠B细胞淋巴瘤的效果及相关机制研究
4.1 引言
4.2 结果
4.2.1 CA4-NPs的载药量
4.2.2 CA4-NPs的粒径分布
4.2.3 CA4-NPs在p H=5.5 和p H=7.4 条件下的药物释放
4.2.4 JQ1对A20细胞增殖的影响
4.2.5 JQ1对A20细胞凋亡的影响
4.2.6 JQ1对A20细胞周期的影响
4.2.7 JQ1对A20细胞表面CD47、PD-L1表达水平的影响
4.2.8 JQ1对A20细胞中C-MYC、CD47和PD-L1基因转录水平的影响
4.2.9 JQ1在基因转录水平对鼠巨噬细胞极化的影响
4.2.10 JQ1在表面标志方面对鼠巨噬细胞极化的影响
4.2.11 JQ1在分泌细胞因子方面对鼠巨噬细胞极化的影响
4.2.12 A20鼠淋巴瘤模型的建立
4.2.13 JQ1与CA4-NPs联用的抑瘤效果
4.2.14 JQ1与CA4-NPs联用的相关毒性
4.2.15 JQ1与CA4-NPs对肿瘤组织中Ki-67、Casepase-3、C-MYC、CD47、PD-L1和HIF-1α 表达水平的影响
4.3 讨论
4.4 本章小结
第5章 结论
参考文献
作者简介及在读期间所取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]高分子抗肿瘤纳米药物的挑战与发展[J]. 孙瑞,邱娜莎,申有青. 高分子学报. 2019(06)
[2]基于多向药理学的BET Bromodomain抑制剂及降解剂研究进展[J]. 陈红丽,陈海芳,张智敏,陆涛,陈亚东. 国际药学研究杂志. 2017(06)
[3]小分子抑制剂JQ1抑制小鼠乳腺癌生长及转移[J]. 吴鹏,郭建,王威,刘妍,赫慧文,陈翀,罗云萍. 基础医学与临床. 2016(07)
[4]中国淋巴瘤亚型分布:国内多中心性病例10002例分析[J]. 李小秋,李甘地,高子芬,周小鸽,朱雄增. 诊断学理论与实践. 2012(02)
博士论文
[1]蛋白质乙酰化修饰参与鼠伤寒沙门菌毒力的调控[D]. 桑昱.上海交通大学 2016
硕士论文
[1]α-mangostin衍生物对新生大鼠脑瘫模型的作用及其机制初探[D]. 李彩凤.浙江工业大学 2019
本文编号：3666748
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【学位级别】：博士
【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
中英文缩略词对照表
第1章 绪论
1.1 侵袭性B细胞淋巴瘤
1.1.1 侵袭性B细胞淋巴瘤的特征
1.1.2 侵袭性B细胞淋巴瘤的治疗现状
1.1.3 肿瘤相关巨噬细胞及其与B细胞NHL预后的关系
1.2 BET蛋白抑制剂JQ1
1.2.1 JQ1的结构及作用机制
1.2.2 JQ1的抗淋巴瘤作用
1.2.3 JQ1对肿瘤免疫微环境的影响
1.2.4 对JQ1耐药的产生及相关药物联用方案
1.3 抗CD47抗体
1.3.1 抗CD47抗体的抗肿瘤作用机制
1.3.2 抗CD47抗体在淋巴瘤中的应用
1.4 血管阻断剂
1.4.1 肿瘤相关血管的特征及血管阻断剂的抗肿瘤作用机制
1.4.2 淋巴瘤中的血管分布情况及临床意义
1.4.3 CA4的抗肿瘤治疗现状
1.4.4 CA4对肿瘤免疫微环境的影响
1.5 抗肿瘤纳米药物
1.5.1 纳米药物的定义及优势
1.5.2 纳米药物抗肿瘤作用的机制及影响因素
1.5.3 抗肿瘤纳米药的研究现状
1.6 本课题的立题依据、研究内容及主要的创新点
1.6.1 立题依据及研究内容
1.6.2 创新点
第2章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 淋巴瘤细胞系
2.1.2 药品
2.1.3 试剂
2.2 主要设备
2.3 实验动物
2.4 实验方法
2.4.1 CA4-NPs载药量的检测
2.4.2 CA4-NPs粒径的检测
2.4.3 CA4-NPs的释放
2.4.4 细胞培养
2.4.5 抗CD47抗体的制备及纯度检测
2.4.6 CCK-8 法细胞增殖检测
2.4.7 Annexin V-FITC/PI法细胞凋亡检测
2.4.8 细胞周期检测
2.4.9 JQ对细胞表面CD47、PD-L1表达水平的影响
2.4.10 超纯RNA的提取
2.4.11 RT-PCR
2.4.12 吞噬实验
2.4.13 CCK-8 法检测JQ1与抗CD47抗体联用对淋巴瘤细胞增殖的影响
2.4.14 酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immuno SorbentAssay,ELISA)检测细胞因子的水平
2.4.15 JQ1对巨噬细胞极化的影响
2.4.16 体内抑瘤实验
2.4.17 小鼠血细胞计数及肝功、肾功检测
2.4.18 组织石蜡包埋切片及HE染色
2.4.19 免疫组织化学染色
2.5 统计学方法
2.6 主要技术路线
第3章 JQ1与抗CD47抗体联用治疗人BURKITT淋巴瘤的效果及相关机制研究
3.1 引言
3.2 结果
3.2.1 JQ1对Raji、Pfeiffer和BJAB细胞增殖的影响
3.2.2 JQ1对Raji、Pfeiffer细胞凋亡的影响
3.2.3 JQ1对Raji、Pfeiffer细胞周期的影响
3.2.4 JQ1对Raji、Pfeiffer表面CD47表达水平的影响
3.2.5 JQ1对Raji细胞中C-MYC、CD47基因转录水平的影响
3.2.6 JQ1对人巨噬细胞极化的影响
3.2.7 JQ1与抗CD47抗体联用对人巨噬细胞吞噬作用的影响
3.2.8 JQ1与抗CD47抗体联用对Raji、BJAB细胞存活率的影响
3.2.9 JQ1与抗CD47抗体联用的抑瘤效果
3.2.10 JQ1与抗CD47抗体联用的相关毒性
3.2.11 JQ1与抗CD47抗体对肿瘤组织中Ki-67 表达水平的影响
3.3 讨论
3.4 本章小结
第4章 JQ1与CA4-NPS联用治疗鼠B细胞淋巴瘤的效果及相关机制研究
4.1 引言
4.2 结果
4.2.1 CA4-NPs的载药量
4.2.2 CA4-NPs的粒径分布
4.2.3 CA4-NPs在p H=5.5 和p H=7.4 条件下的药物释放
4.2.4 JQ1对A20细胞增殖的影响
4.2.5 JQ1对A20细胞凋亡的影响
4.2.6 JQ1对A20细胞周期的影响
4.2.7 JQ1对A20细胞表面CD47、PD-L1表达水平的影响
4.2.8 JQ1对A20细胞中C-MYC、CD47和PD-L1基因转录水平的影响
4.2.9 JQ1在基因转录水平对鼠巨噬细胞极化的影响
4.2.10 JQ1在表面标志方面对鼠巨噬细胞极化的影响
4.2.11 JQ1在分泌细胞因子方面对鼠巨噬细胞极化的影响
4.2.12 A20鼠淋巴瘤模型的建立
4.2.13 JQ1与CA4-NPs联用的抑瘤效果
4.2.14 JQ1与CA4-NPs联用的相关毒性
4.2.15 JQ1与CA4-NPs对肿瘤组织中Ki-67、Casepase-3、C-MYC、CD47、PD-L1和HIF-1α 表达水平的影响
4.3 讨论
4.4 本章小结
第5章 结论
参考文献
作者简介及在读期间所取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]高分子抗肿瘤纳米药物的挑战与发展[J]. 孙瑞,邱娜莎,申有青. 高分子学报. 2019(06)
[2]基于多向药理学的BET Bromodomain抑制剂及降解剂研究进展[J]. 陈红丽,陈海芳,张智敏,陆涛,陈亚东. 国际药学研究杂志. 2017(06)
[3]小分子抑制剂JQ1抑制小鼠乳腺癌生长及转移[J]. 吴鹏,郭建,王威,刘妍,赫慧文,陈翀,罗云萍. 基础医学与临床. 2016(07)
[4]中国淋巴瘤亚型分布:国内多中心性病例10002例分析[J]. 李小秋,李甘地,高子芬,周小鸽,朱雄增. 诊断学理论与实践. 2012(02)
博士论文
[1]蛋白质乙酰化修饰参与鼠伤寒沙门菌毒力的调控[D]. 桑昱.上海交通大学 2016
硕士论文
[1]α-mangostin衍生物对新生大鼠脑瘫模型的作用及其机制初探[D]. 李彩凤.浙江工业大学 2019
本文编号：3666748
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3666748.html
