去泛素化酶OTUB2在肺癌中的功能及其分子机制研究

发布时间：2022-10-03 21:23

　　最新的肿瘤数据统计显示,在世界范围内,肺癌是在男性继前列腺癌,女性继乳腺癌之后发病率第二,死亡率第一的恶性肿瘤。肺癌的发生是一个多步骤、多因素、多分子参与的复杂过程,目前对肺癌发生发展的分子机制仍不清楚。蛋白质是生命活动的主要执行者,其表达丰度和功能异常与恶性肿瘤的发生发展密切相关。研究证据表明,蛋白翻译后泛素化修饰是调控蛋白质表达和活性的关键机制之一。与泛素化修饰相关的酶包括E1激活酶,E2结合酶,E3连接酶和去泛素酶,而去泛素化酶能够将泛素分子特异性地从靶蛋白上水解下来,逆转泛素化过程,在泛素化修饰中起着重要的作用。由于去泛素化酶种类及作用的复杂性,对于去泛素化酶在肺癌中的作用及其所涉及的多种机制研究仍需进一步探索。越来越多的证据发现很多去泛素化酶的表达在肿瘤中均发生改变,并且与肿瘤发生发展密切相关。因此,从去泛素化酶的角度研究肺癌发生发展的分子机制,具有重要的临床研究价值,可能为治疗肺癌提供新的靶点。为了探究去泛素化酶在肺癌中是否存在异常表达及发挥重要功能,我们首先利用GEO数据库比较去泛素化酶在83对肺癌与配对癌旁组织中的表达,结合体外的迁移,侵袭,增殖实验的验证,寻找与肺癌发... 

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 OTUB2 在肺癌中的功能研究
    前言
    1 材料与方法
        1.1 细胞系
        1.2 肺癌组织样本
        1.3 主要试剂及检测试剂盒
        1.4 主要仪器
        1.5 主要溶液配制
        1.6 引物序列
        1.7 siRNA序列
        1.8 抗体及所用比例
        1.9 临床组织及细胞总RNA提取
        1.10 临床组织及细胞总蛋白提取
        1.11 cDNA合成及Real time PCR
        1.12 Western blot实验
        1.13 siRNA转染
        1.14 质粒转化扩增和提取
        1.15 慢病毒感染
        1.16 增殖实验
        1.17 克隆形成实验
        1.18 细胞体外侵袭和迁移实验
        1.19 细胞损伤愈合实验
        1.20 ECAR和 OCR
        1.21 葡萄糖检测
        1.22 乳酸检测
        1.23 统计学方法
    2 结果
        2.1 鉴定促进肺癌进展的去泛素化酶
        2.2 OTUB2 在肺癌组织中表达上调,并且与临床分期和肿瘤的转移复发相关
        2.3 OTUB2 对肺癌细胞系体外增殖和克隆形成能力的影响
        2.4 OTUB2 对肺癌细胞系的体外侵袭与迁移能力的影响
        2.5 OTUB2 对肺癌细胞系的体外损伤愈合能力的影响
        2.6 OTUB2 对肺癌细胞糖酵解的影响
        2.7 OTUB2 对肺癌细胞的线粒体能量代谢的影响
        2.8 OTUB2 对肺癌细胞的葡萄糖吸收及乳酸产出的影响
        2.9 OTUB2 调控糖酵解相关酶和AKT/mTOR信号通路
    3 讨论
    4 小结
第二部分 OTUB2 促进肺癌发生发展的分子机制研究
    前言
    1 材料与方法
        1.1 细胞系及实验动物
        1.2 肺癌组织样本
        1.3 主要试剂及检测试剂盒
        1.4 主要仪器
        1.5 主要溶液配制
        1.6 引物序列
        1.7 siRNA序列
        1.8 抗体及所用比例
        1.9 细胞总RNA提取
        1.10 临床组织蛋白和细胞总蛋白提取
        1.11 cDNA 合成及 Real time PCR
        1.12 Western Blot实验
        1.13 siRNA转染
        1.14 质粒转化扩增和抽提
        1.15 慢病毒感染
        1.16 增殖实验
        1.17 克隆形成实验
        1.18 细胞体外侵袭和迁移实验
        1.19 ECAR
        1.20 葡萄糖检测
        1.21 乳酸检测
        1.22 免疫共沉淀
        1.23 质谱
        1.24 体外泛素化实验
        1.25 皮下肺癌移植瘤模型
        1.26 统计学方法
    2 结果
        2.1 OTUB2 直接与U2AF2 蛋白结合
        2.2 OTUB2 在蛋白水平调控U2AF2 的表达
        2.3 OTUB2 稳定U2A2
        2.4 OTUB2对U2AF2 蛋白的泛素化修饰的机制研究
        2.5 U2AF2 对肺癌细胞的体外增殖,克隆形成和迁移侵袭能力的影响
        2.6 U2AF2 对肺癌细胞的糖酵解能力的影响
        2.7 U2AF2 对肺癌细胞中糖酵解相关酶和AKT/mTOR信号通路的影响
        2.8 GEO数据库分析U2AF2 在肺癌组织中上调并与患者预后复发相关
        2.9 U2AF2 在肺癌组织中mRNA水平的表达
        2.10 OTUB2与U2AF2 在肺癌组织中蛋白水平水平的表达呈正相关
        2.11 OTUB2 促进肺癌细胞的皮下移植肿瘤生长
        2.12 OTUB2与U2AF2 降低肺癌细胞PGK1的mRNA水平表达
        2.13 OTUB2,U2AF2和PGK1 的高表达与肺癌患者的预后显著相关
        2.14 OTUB2在NSCLC中的作用机制模式图
    3 讨论
    4 小结
总结
参考文献
发表论文及获奖情况



本文编号：3684842