Mst1抑制心肌细胞自噬在OSM延缓心肌梗死后心力衰竭中的机制研究
发布时间：2022-10-08 12:06
缺血性心脏疾病依然是世界范围内引起死亡的最主要疾病,并且呈现逐年快速增加的趋势。据欧洲统计学数据显示,缺血性心脏疾病每年导致180万患者死亡,占欧洲总死亡病例数的20%,其巨大的危害不言而喻。心脏功能衰竭是急性心肌梗死后最常见、也是最为人知的并发症,在过去的三十年时间里,随着科学技术的不断进步和心脏治疗技术的广泛开展,如经皮冠状动脉介入治疗、介入性药物治疗等手段,使急性心肌梗死的死亡率逐渐呈现下降趋势,有效遏制了心肌梗死后心脏功能衰竭等众多并发症的发生。心脏功能衰竭常常伴随着严重的左心室重构,最终表现为心室腔扩张和心脏功能障碍。研究数据显示:2010年,在因急性心肌梗死引发心脏功能衰竭而住院的患者中,1年死亡率仍然高达45.5%。该数据自2007年以来一直保持增加趋势,严重危害患者生命健康。2013年,中国的人群调查数据显示,慢性心脏功能衰竭的发生率已经高达0.9%,但是目前仍然缺乏有效的治疗方法。心肌梗死后心脏功能衰竭的发生发展过程十分复杂,有研究报道显示,心肌细胞坏死、过多的心肌细胞凋亡、各类细胞因子的分泌、心脏内部纤维化以及梗死区域非心肌细胞增生导致的的心脏力学变化等都在心肌梗死...
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
Abstract
前言
文献回顾
1.心血管疾病概述
1.1.心血管疾病流行病学现状分析
1.2.心血管疾病的致死率
1.3.心血管疾病造成的社会负担
1.4.心力衰竭
1.4.1.心力衰竭的流行病学现状
1.4.2.心力衰竭的致死率
1.4.3.心力衰竭造成的的社会负担
2.自噬
2.1.自噬的定义
2.2.自噬的机制
2.3.自噬与心血管疾病的关系
2.3.1.自噬发挥心脏保护功能的机制
2.3.2.自噬与心脏疾病的关系
2.3.3.自噬与心力衰竭和肥厚型增生的关系
2.3.4.自噬与缺血/再灌注损伤的关系
2.3.5.自噬与糖尿病心肌病的关系
3.OSM研究概述
3.1.OSM与心血管疾病的关系
3.2.OSM受体分类及调节
4.Mst1研究概述
第一部分 OSM改善心肌梗死后心脏功能,延缓左室重构
1.材料
1.1.实验动物
1.2.主要试剂
1.3.主要仪器
2.方法
2.1.动物实验分组
2.2.小鼠心肌梗死模型的构建
2.3.小鼠OSM处理
2.4.小鼠心脏超声检测
2.5.小鼠心脏左心室压力检测
2.6.小鼠心脏马松染色
2.7.小鼠心脏组织制作透射电镜标本,并观察心肌组织超微结构
2.8.细胞实验分组
2.9.原代心肌细胞分离培养
2.10.原代心肌细胞自噬水平的检测—GFP-LC3表达量检测
2.11.原代心肌细胞p62和蛋白聚集体的共定位检测
2.12.透射电子显微镜观察原代心肌细胞超微结构的变化
2.13.检测心脏组织及原代心肌细胞信号通路分子蛋白表达情况
2.13.1.蛋白样本的制备:
2.13.2.Western blotting实验检测分子表达量变化
2.13.2.1 配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶:
2.13.2.2.Western blotting过程:
2.14.原代心肌细胞凋亡检测
2.15.原代心肌细胞线粒体膜电位检测
2.16.心肌组织活性氧检测
2.17.柠檬酸合成酶活性检测
2.18.心肌组织ATP含量测定
2.19.心肌组织线粒体钙存储能力检测
2.20.数据的统计与分析
3.结果
3.1.OSM处理改善心肌梗死后心脏功能
3.2.OSM处理改善心肌梗死后血流动力学指标
3.3.OSM显著延缓心肌梗死后左心室重构
3.4.OSM显著改善心肌梗死后心肌组织结构,促进心肌细胞自噬
3.5.OSM显著改善心肌梗死后心肌组织线粒体功能
3.6.OSM显著改善缺氧后原代心肌细胞超微结构损伤,促进自噬水平
3.7.OSM显著减少原代心肌细胞缺氧后凋亡
3.8.OSM显著改善原代心肌细胞缺氧后线粒体膜电位
3.9.OSM显著促进原代心肌细胞缺氧后自噬水平GFP-LC3的表达
3.10.OSM显著抑制原代心肌细胞缺氧后p62与蛋白聚集体的聚集
3.11.OSM显著促进原代心肌细胞缺氧后自噬流水平
3.12.OSM显著促进心肌梗死后心肌自噬相关蛋白的表达,抑制Mst1的磷酸化
4.讨论
第二部分 OSM通过Oβ受体促进心肌梗死后心肌细胞自噬,改善心肌梗死后心脏功能
1.材料
1.1.实验动物
1.2.主要试剂
1.3.主要仪器
2.方法
2.1.动物实验分组一
2.2.动物实验分组二
2.3.小鼠心肌梗死模型的构建
2.4.小鼠3-MA处理处理
2.5.小鼠OSM处理处理
2.6.小鼠心脏超声检测
2.7.小鼠心脏左心室血流动力学检测
2.8.小鼠心脏马松染色
2.9.小鼠心脏组织制作透射电镜标本,并观察心肌组织超微结构
2.10.细胞实验分组
2.11.原代心肌细胞分离培养
2.12.原代心肌细胞自噬水平的检测—GFP-LC3表达量检测
2.13.原代心肌细胞p62和蛋白聚集体的共定位检测
2.14.透射电子显微镜观察原代心肌细胞超微结构的变化
2.15.检测心脏组织及原代心肌细胞信号通路分子蛋白表达情况
2.16.原代心肌细胞凋亡检测
2.17.原代心肌细胞线粒体膜电位检测
2.18.心肌组织活性氧检测
2.19.柠檬酸合成酶活性检测
2.20.心肌组织ATP含量测定
2.21.数据的统计与分析
3.结果
3.1.3-MA显著抑制OSM发挥的心肌梗死后心脏保护作用
3.2.OSM不能改善Oβ受体敲除小鼠心肌梗死后心脏功能
3.3.OSM不能改善Oβ受体敲除小鼠心肌梗死后血流动力学指标
3.4.Oβ受体敲除后,OSM不能延缓小鼠心肌梗死后左心室重构
3.5.Oβ受体敲除后,OSM不能改善心肌梗死后心肌组织超微结构,不能促进心肌细胞自噬
3.6.OSM不能改善Oβ受体敲除小鼠心肌梗死后心肌组织线粒体功能
3.7.Oβ基因敲低后,OSM不能改善缺氧后原代心肌细胞的损伤,不能促进自噬水平
3.8.Oβ基因敲低后,OSM不能抑制原代心肌细胞缺氧后凋亡
3.9.Oβ基因敲低后,OSM不能改善原代心肌细胞缺氧后线粒体膜电位
3.10.Oβ基因敲低后,OSM不能促进缺氧后原代心肌细胞自噬水平
3.11.Oβ基因敲低后,OSM不能抑制缺氧后原代心肌细胞p62与蛋白聚集体的聚集
3.12.Oβ基因敲低后,OSM不能促进缺氧后原代心肌细胞自噬流水平
3.13.OSM不能促进Oβ受体敲除小鼠心肌梗死后心肌自噬相关蛋白的表达,不能抑制其Mst1的磷酸化
4.讨论
第三部分 OSM通过Oβ受体抑制Mst1的磷酸化,促进心肌梗死后心肌细胞自噬,改善心肌梗死后心脏功能
1.材料
1.1.实验动物
1.2.主要试剂
1.3.主要仪器
2.方法
2.1.动物实验分组
2.2.小鼠心肌梗死模型的构建
2.3.小鼠OSM处理处理
2.4.小鼠心脏超声检测
2.5.小鼠心脏左心室血流动力学检测
2.6.小鼠心脏马松染色
2.7.小鼠心脏组织制作透射电镜标本,并观察心肌组织超微结构
2.8.细胞实验分组
2.9.原代心肌细胞分离培养
2.10.原代心肌细胞GFP-LC3表达量检测
2.11.原代心肌细胞p62和蛋白聚集体的检测
2.12.透射电子显微镜观察心肌细胞缺氧后超微结构的变化
2.13.Western blotting检测心脏组织及原代心肌细胞信号通路分子蛋白表达情况
2.14.原代心肌细胞凋亡检测
2.15.原代心肌细胞线粒体膜电位检测
2.16.心肌组织活性氧检测
2.17.柠檬酸合成酶活性检测
2.18.心肌组织ATP含量测定
2.19.数据的统计与分析
3.结果
3.1.Mst1敲除后,OSM不能改善心肌梗死后心脏功能
3.2.Mst1敲除后,OSM改善心肌梗死后血流动力学的保护作用消失
3.3.OSM显著延缓Mst1转基因小鼠心肌梗死后左心室重构,Mst1敲除后,该保护作用消失
3.4.OSM显著改善Mst1转基因小鼠心肌梗死后心肌组织超微结构,Mst1敲除后,该保护作用消失
3.5.Mst1敲除后,OSM不能改善心肌梗死后心肌组织线粒体功能
3.6.Mst1基因敲低后,OSM不能进一步缓解缺氧后原代心肌细胞的损伤,不能促进自噬水平
3.7.Mst1基因敲低后,OSM不能进一步减少原代心肌细胞缺氧后凋亡
3.8.Mst1基因敲低后,OSM不能进一步改善原代心肌细胞缺氧后线粒体膜电位
3.9.OSM显著促进Mst1基因过表达原代心肌细胞GFP-LC3的表达,Mst1基因敲低后,该作用消失
3.10.Mst1基因敲低后,OSM不能进一步抑制原代心肌细胞缺氧后p62与蛋白聚集体的聚集
3.11.Mst1基因敲低后,OSM不能进一步促进原代心肌细胞缺氧后自噬流水平
3.12.OSM通过Oβ受体抑制Mst1的磷酸化,促进心肌梗死后心肌自噬
4.讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2017》概要[J]. 陈伟伟,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,蒋立新,胡盛寿. 中国循环杂志. 2018(01)
本文编号：3687682
【文章页数】：127 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
缩略语表
中文摘要
Abstract
前言
文献回顾
1.心血管疾病概述
1.1.心血管疾病流行病学现状分析
1.2.心血管疾病的致死率
1.3.心血管疾病造成的社会负担
1.4.心力衰竭
1.4.1.心力衰竭的流行病学现状
1.4.2.心力衰竭的致死率
1.4.3.心力衰竭造成的的社会负担
2.自噬
2.1.自噬的定义
2.2.自噬的机制
2.3.自噬与心血管疾病的关系
2.3.1.自噬发挥心脏保护功能的机制
2.3.2.自噬与心脏疾病的关系
2.3.3.自噬与心力衰竭和肥厚型增生的关系
2.3.4.自噬与缺血/再灌注损伤的关系
2.3.5.自噬与糖尿病心肌病的关系
3.OSM研究概述
3.1.OSM与心血管疾病的关系
3.2.OSM受体分类及调节
4.Mst1研究概述
第一部分 OSM改善心肌梗死后心脏功能,延缓左室重构
1.材料
1.1.实验动物
1.2.主要试剂
1.3.主要仪器
2.方法
2.1.动物实验分组
2.2.小鼠心肌梗死模型的构建
2.3.小鼠OSM处理
2.4.小鼠心脏超声检测
2.5.小鼠心脏左心室压力检测
2.6.小鼠心脏马松染色
2.7.小鼠心脏组织制作透射电镜标本,并观察心肌组织超微结构
2.8.细胞实验分组
2.9.原代心肌细胞分离培养
2.10.原代心肌细胞自噬水平的检测—GFP-LC3表达量检测
2.11.原代心肌细胞p62和蛋白聚集体的共定位检测
2.12.透射电子显微镜观察原代心肌细胞超微结构的变化
2.13.检测心脏组织及原代心肌细胞信号通路分子蛋白表达情况
2.13.1.蛋白样本的制备:
2.13.2.Western blotting实验检测分子表达量变化
2.13.2.1 配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶:
2.13.2.2.Western blotting过程:
2.14.原代心肌细胞凋亡检测
2.15.原代心肌细胞线粒体膜电位检测
2.16.心肌组织活性氧检测
2.17.柠檬酸合成酶活性检测
2.18.心肌组织ATP含量测定
2.19.心肌组织线粒体钙存储能力检测
2.20.数据的统计与分析
3.结果
3.1.OSM处理改善心肌梗死后心脏功能
3.2.OSM处理改善心肌梗死后血流动力学指标
3.3.OSM显著延缓心肌梗死后左心室重构
3.4.OSM显著改善心肌梗死后心肌组织结构,促进心肌细胞自噬
3.5.OSM显著改善心肌梗死后心肌组织线粒体功能
3.6.OSM显著改善缺氧后原代心肌细胞超微结构损伤,促进自噬水平
3.7.OSM显著减少原代心肌细胞缺氧后凋亡
3.8.OSM显著改善原代心肌细胞缺氧后线粒体膜电位
3.9.OSM显著促进原代心肌细胞缺氧后自噬水平GFP-LC3的表达
3.10.OSM显著抑制原代心肌细胞缺氧后p62与蛋白聚集体的聚集
3.11.OSM显著促进原代心肌细胞缺氧后自噬流水平
3.12.OSM显著促进心肌梗死后心肌自噬相关蛋白的表达,抑制Mst1的磷酸化
4.讨论
第二部分 OSM通过Oβ受体促进心肌梗死后心肌细胞自噬,改善心肌梗死后心脏功能
1.材料
1.1.实验动物
1.2.主要试剂
1.3.主要仪器
2.方法
2.1.动物实验分组一
2.2.动物实验分组二
2.3.小鼠心肌梗死模型的构建
2.4.小鼠3-MA处理处理
2.5.小鼠OSM处理处理
2.6.小鼠心脏超声检测
2.7.小鼠心脏左心室血流动力学检测
2.8.小鼠心脏马松染色
2.9.小鼠心脏组织制作透射电镜标本,并观察心肌组织超微结构
2.10.细胞实验分组
2.11.原代心肌细胞分离培养
2.12.原代心肌细胞自噬水平的检测—GFP-LC3表达量检测
2.13.原代心肌细胞p62和蛋白聚集体的共定位检测
2.14.透射电子显微镜观察原代心肌细胞超微结构的变化
2.15.检测心脏组织及原代心肌细胞信号通路分子蛋白表达情况
2.16.原代心肌细胞凋亡检测
2.17.原代心肌细胞线粒体膜电位检测
2.18.心肌组织活性氧检测
2.19.柠檬酸合成酶活性检测
2.20.心肌组织ATP含量测定
2.21.数据的统计与分析
3.结果
3.1.3-MA显著抑制OSM发挥的心肌梗死后心脏保护作用
3.2.OSM不能改善Oβ受体敲除小鼠心肌梗死后心脏功能
3.3.OSM不能改善Oβ受体敲除小鼠心肌梗死后血流动力学指标
3.4.Oβ受体敲除后,OSM不能延缓小鼠心肌梗死后左心室重构
3.5.Oβ受体敲除后,OSM不能改善心肌梗死后心肌组织超微结构,不能促进心肌细胞自噬
3.6.OSM不能改善Oβ受体敲除小鼠心肌梗死后心肌组织线粒体功能
3.7.Oβ基因敲低后,OSM不能改善缺氧后原代心肌细胞的损伤,不能促进自噬水平
3.8.Oβ基因敲低后,OSM不能抑制原代心肌细胞缺氧后凋亡
3.9.Oβ基因敲低后,OSM不能改善原代心肌细胞缺氧后线粒体膜电位
3.10.Oβ基因敲低后,OSM不能促进缺氧后原代心肌细胞自噬水平
3.11.Oβ基因敲低后,OSM不能抑制缺氧后原代心肌细胞p62与蛋白聚集体的聚集
3.12.Oβ基因敲低后,OSM不能促进缺氧后原代心肌细胞自噬流水平
3.13.OSM不能促进Oβ受体敲除小鼠心肌梗死后心肌自噬相关蛋白的表达,不能抑制其Mst1的磷酸化
4.讨论
第三部分 OSM通过Oβ受体抑制Mst1的磷酸化,促进心肌梗死后心肌细胞自噬,改善心肌梗死后心脏功能
1.材料
1.1.实验动物
1.2.主要试剂
1.3.主要仪器
2.方法
2.1.动物实验分组
2.2.小鼠心肌梗死模型的构建
2.3.小鼠OSM处理处理
2.4.小鼠心脏超声检测
2.5.小鼠心脏左心室血流动力学检测
2.6.小鼠心脏马松染色
2.7.小鼠心脏组织制作透射电镜标本,并观察心肌组织超微结构
2.8.细胞实验分组
2.9.原代心肌细胞分离培养
2.10.原代心肌细胞GFP-LC3表达量检测
2.11.原代心肌细胞p62和蛋白聚集体的检测
2.12.透射电子显微镜观察心肌细胞缺氧后超微结构的变化
2.13.Western blotting检测心脏组织及原代心肌细胞信号通路分子蛋白表达情况
2.14.原代心肌细胞凋亡检测
2.15.原代心肌细胞线粒体膜电位检测
2.16.心肌组织活性氧检测
2.17.柠檬酸合成酶活性检测
2.18.心肌组织ATP含量测定
2.19.数据的统计与分析
3.结果
3.1.Mst1敲除后,OSM不能改善心肌梗死后心脏功能
3.2.Mst1敲除后,OSM改善心肌梗死后血流动力学的保护作用消失
3.3.OSM显著延缓Mst1转基因小鼠心肌梗死后左心室重构,Mst1敲除后,该保护作用消失
3.4.OSM显著改善Mst1转基因小鼠心肌梗死后心肌组织超微结构,Mst1敲除后,该保护作用消失
3.5.Mst1敲除后,OSM不能改善心肌梗死后心肌组织线粒体功能
3.6.Mst1基因敲低后,OSM不能进一步缓解缺氧后原代心肌细胞的损伤,不能促进自噬水平
3.7.Mst1基因敲低后,OSM不能进一步减少原代心肌细胞缺氧后凋亡
3.8.Mst1基因敲低后,OSM不能进一步改善原代心肌细胞缺氧后线粒体膜电位
3.9.OSM显著促进Mst1基因过表达原代心肌细胞GFP-LC3的表达,Mst1基因敲低后,该作用消失
3.10.Mst1基因敲低后,OSM不能进一步抑制原代心肌细胞缺氧后p62与蛋白聚集体的聚集
3.11.Mst1基因敲低后,OSM不能进一步促进原代心肌细胞缺氧后自噬流水平
3.12.OSM通过Oβ受体抑制Mst1的磷酸化,促进心肌梗死后心肌自噬
4.讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
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期刊论文
[1]《中国心血管病报告2017》概要[J]. 陈伟伟,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,蒋立新,胡盛寿. 中国循环杂志. 2018(01)
本文编号：3687682
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