利拉鲁肽对脂毒性肝损伤自噬的影响及其机制的探讨

发布时间：2022-10-19 15:12

　　目的:目前非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的发病率日益增长。在发达国家,80%患有肥胖或糖尿病的成年人同时患有NAFLD^[1]。由于NAFLD与胰岛素抵抗、肥胖、血脂异常等密切相关,其被认为是代谢综合征在肝脏的临床表现^[2]。NAFLD包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎及脂肪性肝炎相关肝硬化,其可发展为肝癌^[3]。而即使是单纯性脂肪肝,目前也已经证实与心脑血管疾病有关,影响人们生存质量。因此NAFLD的防治已成为当今医学界所关注的热点。NAFLD的发病主要与过多的脂质沉积在肝脏有关。由于胰岛素抵抗,肝细胞摄入过多的自由脂肪酸（free fatty acid,FFA）致使肝细胞发生脂肪变性;随后引起的氧化应激反应、脂质过氧化及其异常细胞因子的作用致使肝小叶局部炎性变化而形成脂肪性肝炎。因此NAFLD的实质是过多脂质沉积在肝脏导致肝脏一系列的变化。目前认为自噬与肝内脂质沉积密切相关。自噬是生物体内一种相对固定的对本身进行分解代谢的过程。自噬可“自我清除”细胞内一些... 

【文章页数】：77 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:利拉鲁肽对脂毒性肝损伤自噬的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料与试剂
            2.1.1 实验材料
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器设备
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 NAFLD动物模型建立,评估
            2.2.1 实验动物的分组与NAFLD大鼠模型建立
            2.2.2 NAFLD大鼠模型评估方法
            2.2.3 标本采集
        2.3 细胞培养及分组
            2.3.1 细胞培养
            2.3.2 实验分组
        2.4 指标检测
            2.4.1 大鼠代谢指标
            2.4.2 透射电子显微镜检测自噬
            2.4.3 MTT法检测细胞存活率
            2.4.4 细胞内甘油三酯(TG)测定
            2.4.5 Real-time RT-PCR方法检测NAFLD大鼠肝脏组织及HepG2 细胞LC3II、Beclin1、Atg7 mRNA水平变化
            2.4.6 Western blot方法检测LC3、Beclin1、Atg7 蛋白表达水平
        2.5 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 NAFLD大鼠模型的建立
        3.2 利拉鲁肽对大鼠肝脏大体及组织形态学的影响
            3.2.1 大鼠肝脏大体形态学变化
            3.2.2 大鼠肝脏组织形态学变化
        3.3 利拉鲁肽对NAFLD大鼠体重、肝指数及血清生化指标的影响
        3.4 利拉鲁肽对HepG2 细胞脂毒性损伤的影响
        3.5 利拉鲁肽对大鼠肝组织中自噬小体的影响
        3.6 利拉鲁肽干预NAFLD大鼠自噬相关蛋白m RNA及蛋白的表达
            3.6.1 自噬相关蛋白LC3 mRNA及蛋白的表达
            3.6.2 自噬相关蛋白Beclin1 mRNA及蛋白的表达
            3.6.3 自噬相关蛋白Atg7 mRNA及蛋白的表达
        3.7 利拉鲁肽对HepG2 细胞自噬效应的影响
            3.7.1 自噬相关蛋白LC3 mRNA及蛋白的检测
            3.7.2 自噬相关蛋白Beclin1 mRNA及蛋白的检测
            3.7.3 自噬相关蛋白Atg7 mRNA及蛋白的检测
    4 讨论
    5 结论
第二部分:利拉鲁肽通过AMPK通路对自噬的干预研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞培养
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器设备
            2.1.4 主要试剂配制
        2.2 实验方法及指标检测
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 实验分组
            2.2.3 Western blot方法检测自噬相关蛋白表达水平及AMPK相关通路蛋白水平
        2.3 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 在AMPK通路抑制的情况下利拉鲁肽对肝细胞自噬作用的影响
            3.1.1 自噬相关蛋白LC3 蛋白的检测
            3.1.2 自噬相关蛋白Beclin1 的检测
            3.1.3 自噬相关蛋白Atg7 蛋白的检测
        3.2 在AMPK通路抑制的情况下利拉鲁肽对AMPK通路相关蛋白的作用
            3.2.1 在AMPK通路抑制的情况下利拉鲁肽对p-AMPK/AMPK蛋白水平的影响
            3.2.2 在AMPK通路抑制的情况下利拉鲁肽对细胞内TSC1 蛋白的影响
            3.2.3 在AMPK通路抑制的情况下利拉鲁肽对p-m TOR/mTOR水平的影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Glucagon-like peptide-1 analogue prevents nonalcoholic steatohepatitis in non-obese mice[J]. Takaya Yamamoto,Yukiomi Nakade,Taeko Yamauchi,Yuji Kobayashi,Norimitsu Ishii,Tomohiko Ohashi,Kiyoaki Ito,Ken Sato,Yoshitaka Fukuzawa,Masashi Yoneda.  World Journal of Gastroenterology. 2016(08)
[2]Effects of glucagon-like peptide-1 receptor agonists on non-alcoholic fatty liver disease and inflammation[J]. Xing-Chun Wang,Aaron M Gusdon,Huan Liu,Shen Qu.  World Journal of Gastroenterology. 2014(40)
[3]Incretin based therapies:A novel treatment approach for non-alcoholic fatty liver disease[J]. Kristina Blaslov,Tomislav Bulum,Karin Zibar,Lea Duvnjak.  World Journal of Gastroenterology. 2014(23)
[4]GLP-1对非酒精性脂肪肝大鼠肝氧化应激及TNF-α、TGF-β1的影响[J]. 高慧亭,徐丽姝,李东风,关丽嫦,邓卫平.  南方医科大学学报. 2013(11)
[5]What about non-alcoholic fatty liver disease as a new criterion to define metabolic syndrome?[J]. Giovanni Tarantino,Carmine Finelli.  World Journal of Gastroenterology. 2013(22)
[6]What is the role of adiponectin in obesity related non-alcoholic fatty liver disease?[J]. Carmine Finelli,Giovanni Tarantino.  World Journal of Gastroenterology. 2013(06)



本文编号：3693602