miR-200b/c靶向RAP1B对甲状腺乳头状癌生物学特性的影响及机制研究

发布时间：2022-11-05 11:41

　　甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤,其发病率呈逐年上升趋势。甲状腺乳头状癌（Papillary thyroid carcinoma,PTC）是最常见的甲状腺肿瘤类型,约占所有甲状腺癌病例的80%。目前,PTC的主要疗法包括手术、化疗和放疗,大多数PTC患者经系统治疗后反应良好,然而,PTC复发率较高,且有些患者会发生预后不良。因此,揭示PTC发生和发展的潜在分子机制对于有效治疗方案的制定以及提高PTC患者的治愈率至关重要。MicroRNAs（miRNAs）是一类小的非编码RNA,可以结合特定基因的3’-非翻译区（3’-UTR）以抑制相应靶mRNA的翻译。研究表明miRNAs的异常表达与人类恶性肿瘤的发生和发展密切相关。miRNAs作为癌基因或抑癌基因,参与肿瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭。多项研究证实,miR-200b/c在多种肿瘤中表达异常,包括胃癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胆管癌等。然而,关于miR-200b/c在PTC中的具体作用及机制尚不明确。RAP1是一种小的Ras样GTP酶,它可以调节多种细胞过程,包括细胞粘附、迁移、极性、分化、生长和血管生成。Ras相关蛋白1B（Ras-relate... 

【文章页数】：128 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词表
引言
第一部分 miR-200b/c和RAP1B在PTC中的表达研究
    1 前言
    2 实验材料
        2.1 组织和细胞来源
        2.2 实验试剂
        2.3 实验仪器
        2.4 实验主要试剂的配制
    3 实验方法
        3.1 细胞培养、传代及冻存
        3.2 HE染色观察PTC组织形态
        3.3 免疫组化检测PTC组织中RAP1B蛋白的表达情况
        3.4 qRT-PCR检测miR-200b/c及RAP1B mRNA在PTC组织和细胞中的表达
        3.5 Western blot检测RAP1B蛋白在PTC组织和细胞中的表达
        3.6 数据分析
    4 实验结果
        4.1 PTC组织形态与癌旁组织形态的差别
        4.2 miR-200b、miR-200c在PTC组织中的表达情况
        4.3 RAP1B mRNA在PTC组织中的表达情况
        4.4 RAP1B蛋白在PTC组织中的表达情况
        4.5 PTC组织中miR-200b、miR-200c与RAP1B表达的相关性分析
        4.6 miR-200b、miR-200c在PTC细胞中的表达
        4.7 RAP1B mRNA在PTC细胞中的表达
        4.8 RAP1B蛋白在PTC细胞中的表达
    5 讨论
    6 结论
    参考文献
第二部分 miR-200b/c靶向RAP1B对PTC细胞生物学特性的影响及机制研究
    1 前言
    2 实验材料
        2.1 实验细胞
        2.2 实验试剂
        2.3 实验仪器
        2.4 实验主要试剂的配制
    3 实验方法
        3.1 生物信息学软件预测miR-200b、miR-200c与RAP1B的结合位点
        3.2 双荧光素酶报告基因实验
        3.3 miR-200b、miR-200c过表达载体的构建
        3.4 RAP1B过表达载体的构建
        3.5 对重组慢病毒载体进行包装和滴度测定
        3.6 LV-miR-200b、LV-miR-200c、LV-RAP1B和LV-vector分别感染TPC-1和K1细胞
        3.7 qRT-PCR检测miR-200b/c过表达载体转染效率
        3.8 MTT检测miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞增殖的影响
        3.9 克隆形成实验检测miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞克隆形成的影响
        3.10 划痕实验检测miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞迁移的影响
        3.11 Transwell检测miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞侵袭的影响
        3.12 流式细胞术检测miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞凋亡的影响
        3.13 Western blot
        3.14 ELISA检测miR-200b/c-RAP1B axis对NF-κB活性的影响
        3.15 数据分析
    4 实验结果
        4.1 生物信息学软件预测miR-200b、miR-200c与RAP1B的结合位点
        4.2 pmiR-GLO-RAP1B-3'UTR和pmiR-GLO-RAP1B-3'UTRM构建
        4.3 双荧光素酶报告基因实验结果
        4.4 miR-200b、miR-200c过表达载体的构建
        4.5 RAP1B过表达载体的构建
        4.6 重组慢病毒进行包装和滴定
        4.7 稳定细胞系TPC-1、K1的构建
        4.8 TPC-1、K1细胞中miR-200b、miR-200c的转染效率
        4.9 miR-200b/c对PTC细胞中RAP1B表达的影响
        4.10 miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞增殖的影响
        4.11 miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞克隆形成能力的影响
        4.12 miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞迁移的影响
        4.13 miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞侵袭的影响
        4.14 miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞凋亡的影响
        4.15 miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞EMT的影响
        4.16 miR-200b/c-RAP1B axis对TPC-1、K1细胞中NF-κB/Twist1信号通路的影响
        4.17 miR-200b/c-RAP1B axis对NF-κB活性的影响
    5 讨论
    6 结论
    参考文献
第三部分 miR-200b/c靶向RAP1B对裸鼠皮下PTC移植瘤生长的影响及机制研究
    1 前言
    2 实验材料
        2.1 实验细胞
        2.2 实验动物
        2.3 实验试剂
        2.4 实验仪器
        2.5 实验主要试剂的配制
    3 实验方法
        3.1 构建PTC移植瘤裸鼠模型
        3.2 荷瘤小鼠肿瘤体积和质量检测
        3.3 HE染色检测各组PTC移植瘤组织形态
        3.4 Western blot检测各组移植瘤中RAP1B、EMT以及NF-κB/Twist1信号通路相关蛋白蛋白的表达
        3.5 ELISA检测各组移植瘤中NF-κB的活性
        3.6 数据分析
    4 实验结果
        4.1 PTC移植瘤裸鼠模型构建结果
        4.2 miR-200b/c对PTC移植瘤生长的影响
        4.3 miR-200b/c对PTC移植瘤重量的影响
        4.4 miR-200b/c对PTC移植瘤内RAP1B表达的影响
        4.5 miR-200b/c对PTC移植瘤组织形态的影响
        4.6 miR-200b/c对PTC移植瘤内EMT的影响
        4.7 miR-200b/c对PTC移植瘤内NF-κB/Twist1信号通路的影响
        4.8 miR-200b/c对PTC移植瘤内NF-κB活性的影响
    5 讨论
    6 结论
    参考文献
全文结论
综述 miR-200b/c在人类疾病中的研究进展
    参考文献
个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Twist1通过NF-κB信号通路对人乳头状甲状腺癌上皮-间质转化的调控机制研究[J]. 毛冲舟,何海山,杜尖,付小兰.  临床和实验医学杂志. 2016(14)
[2]Diabetic retinopathy-ocular complications of diabetes mellitus[J]. Martin M Nentwich,Michael W Ulbig.  World Journal of Diabetes. 2015(03)
[3]Annual report on status of cancer in China, 2011[J]. Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)
[4]miRNA-103: Molecular link between insulin resistance and nonalcoholic fatty liver disease[J]. Qian Xu,Ying Li,Yong-Fang Shang,Hui-Ling Wang,Min-Xiu Yao.  World Journal of Gastroenterology. 2015(02)



本文编号：3702538